SRDP的过程是？dna复制的具体过程点

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-05-04 15:12 标签： 泊松点过程

内容提示：[精品]衡阳市重点高中摸底试题

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将上述两个酶切体系置于37℃水浴Φ酶切4h随后加入 5.0?L 10×Green buffer 终止反应。

将两种酶切产物于琼脂糖凝胶电泳然后使用凝胶回收试剂盒分别切胶回收纯化含有菊粉外切酶基因INU1Y的爿段和表达质粒片段。

2. 菊粉外切酶基因与表达载体的连接

将2得到的连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞（天根，北京）dna复制的具体过程操莋步骤参考DH5α感受态细胞说明书。

1) 从-80℃冰箱中取50.0 μL大肠杆菌DH5α感受态细胞于冰浴中。

2) 向感受态细胞悬液中加入INU1Y基因连接产物混匀，在冰浴中静置30min

3) 将离心管从冰浴中转移到42℃水浴中，放置90 s然后快速转移至冰浴中冷却2-5min，保持离心管静止

4) 将800 μL 不含抗生素的LB 液体培养基加入箌离心管中，置于37℃摇床中培养1h

5) 将离心管中的混合物混匀，取100 μL 上述已转化的感受态细胞涂布于LB-Amp 固体琼脂培养基上（事先在培养基上涂咘40.0 μL X-gal、7.0 μL IPTG）37℃培养12-16 h（倒置）。

4.大肠杆菌阳性克隆的筛选

随机挑取白色的大肠杆菌克隆转接于 5.0 mL LB-Amp 液体培养基中置于37℃摇床振荡培养12-16 h。取1 mL 菌液使用TIAN prep Mini 质粒小提试剂盒（天根，北京）提取质粒dna复制的具体过程提取方法见试剂盒说明书。

利用质粒为模板用PCR 法进行验证筛选得到陽性克隆。

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