知识点梳理
一、河姆渡的原始农耕1、时间---距今7千年
2、生活位置：河姆渡居民位于长江流域3、农业：河姆渡居民种植水稻，我国是世界上最早种植水稻的。4、河姆渡居民会建造房屋，还会开挖水井。
元谋人遗址：因发现地点在云南元谋县上那蚌村西北小山岗上，定名为“元谋直立人”，，俗称“元谋人考古学家认为，“元谋人”北上越过金沙江，到甘肃、青海成为古羌戎人，继续往东北越过白令海峡进入，成为印第安人的祖先。它是迄今所知中国境内年代最古老的原始人类。
　距今约6000多年的 半坡位于陕西西安半坡村，现存遗址面积约5万平方米。半坡聚落是黄域原始文化的重要代表之一。遗址北部是公共墓地，南部是居住区，东部是烧制陶器的窑厂。居住区内有一座很大的长方形房屋，是氏族成员共同活动的场所。四周建有许多圆形或方形小屋，是氏族成员的住处。居住区周围有用于防护的壕沟。半坡居民居住的房屋大多是半地穴式的。他们先从地表向下挖出一个方形或圆形的穴坑，在穴坑中埋设立柱，然后沿坑壁用树枝捆绑成围墙，内外抹上草泥，然后架设屋顶。屋内，地面修整的正分平整，中间有一个灶坑，用来烧煮食物、取暖和照明，睡觉的地方高于地面。 　　我国是最早种植栗的国家之一。半坡居民已种栗、白菜或芥菜等农作物，他们在居住区内建起圈栏，饲养猪、狗等家畜。此外，他们还经常去打猎，捕鱼，以补充食物。 　　已经开始有彩陶了。使用的工具有骨耜，石铲，石斧等。大部分都经过了磨光处理。因为他们的石器比的石器相比，已经进步了很多，所以人们把他们的时代成为新石器时代。 　　陶器是那时人们日常生活的主要用具。半坡出土了大量的陶器，陶器的底色一般为红色，上面大多绘有人、动物和几何花纹等图案，称为彩陶。 　　半坡原始居民 距今时间： 距今约五六千年 发现地点： 黄河流域陕西西安生产活动：种植粟和蔬菜，饲养猪狗；渔猎 生产工具：普遍使用磨光石器，木制的耒和耜 住房： 半地穴式房屋用具：彩陶（上有最早文字雏形） 学会纺织
中国人常称自己为，在我国上，被称为中华民族“人文初祖”的是黄帝等。中华民族之所以常自豪的称自己为“炎黄子孙”，是因为：炎黄、黄帝是华夏族的始祖：黄帝部落联合炎帝部落结成联盟，经过长期的发展，形成日后的华夏族。华夏族也就是汉族的前身，中华民族的主干部分。黄部落联盟—→华夏族—→汉族——→中华民族黄帝——→人文初祖（贡献：制衣、挖井、舟车、养蚕缫丝、文字、乐谱）1、我国原始社会结束在禹时期2、我国奴隶社会开始于公元前21世纪3、尧、舜、禹的传说：
1） 生活在我国原始社会末期
2） 部落联盟民主推选首领的制度叫“禅让”制。首先实施该制度的是尧推选舜为继承人，结束该制度的是禹。夏朝的建立，标志着奴隶制度开始了优秀的传统美德﹕尧﹕生活俭朴，克己爱民﹔舜﹕宽厚待人，；禹﹕不畏艰辛，为民造福。
3） 禅让制---原始的民主政治。
整理教师:&&
举一反三（巩固练习，成绩显著提升，去）
根据问他()知识点分析，
试题“体验新情境，回答问题：请回答：（1）请你猜猜“我”是谁。①我...”，相似的试题还有：
图片中可以感受历史，下面是古代黄河流域的部落首领黄帝、尧、舜、禹的画像。黄帝尧舜禹请回答：(1)请你按生存年代排列出这四位部落首领的先后顺序。_______________________________________________________(2)请你写出与黄帝同一时期的黄河流域和南方的部落联盟首领各一位。_______________________________________________________(3)在这些首领中与我国原始社会末期一种民主推选部落联盟首领的制度相关的人物有哪些？这种制度叫什么？_______________________________________________________(4)这些都是古代传说中的人物，举例说明我们应该怎样科学对待历史史实与神话传说的关系。_______________________________________________________
“禅让”是我国原始社会民主推举部落联盟首领的办法，传说中最后一位通过禅让制产生的部落联盟首领是&&&&()
看图片可以感受历史。下面是古代黄河流域的部落首领黄帝、尧、舜、禹的画像，仔细观察，回答问题。黄帝尧舜禹(1)请你按生存年代排列出这四位部落首领的先后顺序。__________________________________________________________________(2)请你写出与黄帝同一时期的黄河流域和东方的部落联盟首领各一位。__________________________________________________________________(3)在这些首领中与我国原始社会末期一种民主推选部落联盟首领的制度相关的人物有哪些？这种制度叫什么？__________________________________________________________________(4)这些都是古代传说中的人物，你认为传说和史实有什么区别？谈谈你的看法。__________________________________________________________________这是个机器人猖狂的时代，请输一下验证码，证明咱是正常人~本站已经通过实名认证，所有内容由王永坤大夫本人发表
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状态：就诊前
所就诊医院科室：
当地大医院
既往病史：
病史说明: 去年脑出血
根据您的描述，目前怎么治疗的？
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疾病名称：脑血栓，血小板增多症&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,是否需要就诊?就诊前做哪些准备？
病情描述：去年六月份第一次发病住院，腔隙性脑梗，去年12月第二次发病，多发性脑梗塞，今年3月发病，左侧偏瘫，现在脚能走路，手不能动，检查血常规，刚发病血小板500多，昨天复查800多，怎么能减少血小板...
疾病名称：下肢深静脉血栓&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,李主任您好！我曾在4月11号看过您的门诊，您给我开了药，...
病情描述：功血导致严重贫血住院治疗，治疗一周后出现下肢深静脉血栓
疾病名称：鼻子打玻尿酸血栓&&
病情描述：描述：我的鼻子3月26打的玻尿酸，当时很胀痛，还发黑，第二天还是疼，鼻头肿起来了，第三天淤青发紫起脓第五天做的溶菌酶。吊了七天的消炎瓶。吃了二十几天的消炎药。现在鼻子是结痂了鼻梁还是有...
疾病名称：左下肢深静脉血栓&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,目前病情是否需要手术?
病情描述：4月2日至4月12日保守治疗后，又躺床上静养一星期，做b超发现血栓还和以前一样多。
疾病名称：静脉血栓&&
病情描述：本人36岁在10天前右小腿有疼痛感，过几去医院检查是静脉血栓行成。请问我这个病治疗麻烦吗？怎么治疗
疾病名称：轻微脑血栓已治愈出院，但现在仍耳鸣，头晕&&
希望得到的帮助：这医生开的药吃几餐后胃就消化不良，是否需要更换别的中成药，这左耳耳鸣头晕能治愈吗...
病情描述：母亲，61岁，体重67公斤，务农，身高1.63米，日晚上9点突然左耳耳鸣且呕吐，至次日早上呕吐四五次，送当地县医院住院治疗说是脑血栓，治疗三日左右病情有所缓解，但三日后做了一个小...
疾病名称：脑血栓治疗后现在走路感觉想摔倒骑车也像喝醉酒的&&
病情描述：手脚不好使想摔倒还有口臭手脚不嘛站时间长了头晕
疾病名称：患有3年的脑血栓现在有时候还抽搐这种情况要怎么样、&&
希望得到的帮助：现在吃什么药管事、控制病情！
病情描述：脑血栓有3年多了、现在有时候还抽搐、应该怎么办？
疾病名称：双下肢陈旧性静脉血栓&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,目前口服华法林，穿静脉弹力袜子。请问药还需服用多长时间...
病情描述：三年前肛周脓肿手术后左腿出现静脉血栓，服用华法林，一年后右腿出现静脉血栓，去武警北京总队医院看病，服用他们开的药，期间停华法林半年，之后又开始服用华法林，一直到现在
疾病名称：右腿深静脉血栓&&脑出血 左股骨颈骨折&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议
病情描述：武汉同济，陆总看过，因病人不是太配合，滤网手术没做成。因左腿肌力几乎为0，骨科医生不建议关节置换
疾病名称：右小腿肌间静脉血栓形成&&
希望得到的帮助：大夫您好，我想咨询您几个问题，希望您在百忙中抽出点时间为我解答一下。1.小腿肌间静...
病情描述：日在当地医院外科门诊做右小腿皮下纤维瘤切除手术，术后第2天右小腿及踝关节出现肿胀，第3天右小腿踝关节内侧出现有一大片瘀血，术后第6天手术伤口红肿感染，此后一个半月之内一直在...
疾病名称：左下肢深静脉血栓&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,目前病情是否需要手术？,可以治愈吗？,可以治愈吗？
病情描述：9月1号开始的，开学返校做了一晚上大约8个小时火车，后来就红肿发热痛，10月13号在天津第一中心医院确诊为左侧胫后静脉血栓，开了一个月的药，情况后来减轻，将近一个月腿就又开始疼，发热，D二...
疾病名称：左下肢深静脉血栓&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,目前病情是否需要手术？
病情描述：1月15号左腿肿涨，沉重去市152医院做彩超检查，但未发现异常，19号第二次左腿出现上述情况，去市二院检查发现血栓。经治疗现两腿相差l厘米
疾病名称：小圆细胞瘤 骶骨前占位肿块右下肢静脉血栓&&
希望得到的帮助：右下肢血栓能治好？怎么护理，能运动？吃什么好？
病情描述：刚发现没多久，近期化疗治肿瘤，也就这次去化疗才发现了。
疾病名称：下肢腘静脉血栓&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,我想咨询主任，目前，我每天穿弹力袜10小时，在家正常活动...
病情描述：11月10日因腿疼，肿胀在总医院查出右腿静脉血栓，股浅静脉腘静脉有，腿部症状明显，不能走路。做强化CT显示右肺叶起始端有栓塞，但无不适。医生要求住院呼吸科，因心理因素转至胸科医院，只做抗...
疾病名称：脑血栓，基底动脉狭窄&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,目前病情是否需要手术？
病情描述：患者在最近一个月内晚上有约5次突然左眼或右眼像撒了辣椒面一样难受，闭眼一会就好了，30号晚上9点多突然眼睛视力下降，看不清，说话困难，左侧肢体行动不变，进医院后CT结果变化不大，按脑梗塞...
疾病名称：下肢静脉血栓
希望得到的帮助：我现在才24岁得了这个病精神压力很大，现在已经休息五个月病情还是没有好完全所以很想...
病情描述：6月24号腿疼痛浮肿，胸痛到医院检查出左侧股静脉，大隐静脉近心段，股浅静脉，腘静脉，胫后静脉及左侧髂总静脉、髂外静脉血栓形成。肺栓塞。没有手术也没溶栓治疗就是皮下注射肝素和吃华法林抗凝...
疾病名称：颈椎手术后并发血栓&&
希望得到的帮助：住院治疗血栓期间，医生也拿不出什么好的方案，只说注射低分子肝素，然后三天后服用华...
病情描述：日，盐城市第一人民医院骨科做颈椎手术，术后情况良好，1月4日出院。回家后第六天开始左下脚疼痛，疼痛两天后突然肺部剧烈疼痛，呼吸困难，隔天去盐城市第一人民医院骨科治疗，医生...
疾病名称：脑血栓后发癫痫&&
希望得到的帮助：我想问医生 后天得的癫痫能治疗好吗 脑血栓已经五年没发作控制的很好 癫痫现在每天早晚...
病情描述：2010年突发脑血栓 之前高血压 冠心病 2011五月突发癫痫 之前没有 医生说由于血栓引发 后来服用成人开浦兰 早晚各一片 半年以后由于私自减量 2013年1月又突发癫痫小发作 发作时候血栓患肢不好用 ...
疾病名称：右颈内静脉置管术后伴置管壁血栓&&
希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,目前病情是否需要手术？,是否需要就诊？就诊前做哪些准备...
病情描述：在脖子上做的临时透析管 三个月了 一周前去广安门医院想拔管 结果有血栓 想咨询一下 如果去您那儿看 可以给拔管吗？我听说可以弄一个过滤网 把脱落的血栓接住 请问医生有这个必要吗？
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王永坤大夫的信息
擅长乳腺良恶性肿瘤的诊断，药物治疗及手术等综合治疗，甲状腺肿瘤诊治，腹壁疝的诊治等
普外科可通话专家
上海瑞金医院
南京军区总医院
副主任医师
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好大夫在线电话咨询服务请帮忙回答我的问题，诚谢！ - 实验交流 - 生物秀
标题: 请帮忙回答我的问题，诚谢！
摘要: 请帮忙回答我的问题，诚谢！相关疾病：休克Allen He 何小姐，颂安！我是武汉的一位生物学科研人员，上次在水生所参加过一次您主讲的pet系统讲座，及其相关的内容，并且获得了会上派送的资料，非常感谢，novagen的这本册子对我帮助很大，感谢merck生化组，还有您何小姐给中国生物学工作者所作的努力！那天我在会上问到一个关于kan抗性机理的问题，我说的是kan基因编码一种磷酸转移酶，此酶将磷酸基团转移给卡那霉素，而使之灭活 关键词:[信号肽 二硫键 亲水性 密码子 氨基酸残基]……
Allen He/何小姐，颂安！我是武汉的一位学科研人员，上次在水生所参加过一次您主讲的pet系统讲座，及其相关的内容，并且获得了会上派送的资料，非常感谢，novagen的这本册子对我帮助很大，感谢merck生化组，还有您何小姐给中国学工作者所作的努力！那天我在会上问到一个关于kan抗性机理的问题，我说的是kan基因编码一种磷酸转移酶，此酶将磷酸基团转移给卡那霉素，而使之灭活。我的问题是，这种磷酸转移酶是否像beta内酰胺酶一样，属于一种分泌性蛋白酶，在表达的全程中是否需要不断添加？我自己的资料很有限，这个问题无法得到解决，现在想请你们帮忙，不知道你们有什么好的见解，谢谢！此信还想向你们请教几个问题，烦请帮忙回答，感激不尽！是这样的，我现在做一个人的营养蛋白的表达，目的在于将来能够产业化。这个蛋白比较特殊，成熟蛋白136aa，有20％的密码子属于ecoli稀有密码子，该蛋白理论分子量15KD左右，pI9.5，亲水性较强。并且活性结构是同源二聚体，分子内有三对链内二硫键，两个分子之间靠一对分子间二硫键形成同源二聚体。利用pet的各种表达载体，这个蛋白在ecoli中实现了初步的表达，可是结果很不理想。pet28a（克隆于NcoI和BamHI之间）、pet32a（克隆于NdeI和BamHI之间）都实现了初步的表达，但是表达量非常低，SDS-PAGE中表达量不到5％，目标带几乎和对照没有区别，表达系统肯定没有问题，pet32a的对照表达了大量的trx标签。看见的弱表达带位于19kd的位置，与预期15kd有差别，此前在购买该蛋白抗体的时候，介绍中也提到了这个蛋白的分子量在19kd左右。后来做了western blot，初步证实19kd位置的带有明显现色，不过那一次的二抗用的比较多，出现了一些非特异的显色。再往后我做分泌表达，使用的是pet22b载体，pelB信号肽引导分泌，目的基因克隆于NcoI和BamHI之间。诱导表达后检测发现表达量明显上升，可是目标蛋白的分子量却变成了21kd左右，比单独表达带大2kd左右，正好是pelB 22aa的分子量大小，表明信号肽序列没有被切除，周质蛋白分析没有发现目标蛋白，这几乎证明了我的蛋白没有分泌出来。接下来，我作了表达条件的优化，包括iptg，温度（最低到了25度）,时间等，结果仍然没有改善。然后我换用一个热诱导的分泌表达载体，也是pelB引导分泌，结果与pet22b几乎一样！表达的蛋白量略高，大小与pet22b表达的带一样大，21kd左右。以上就是我的大致实验，下面是我的问题，烦帮忙回答，谢谢：1.我已经通过天源公司向novagen订购rosetta－gami（DE3）表达菌株，目的在于避开稀有密码子、二硫键丰富等问题。不知道这个菌在使用过程中有那些需要特别注意的地方？手册上说受体菌抗tet，kan，clm三种抗生素(antibiotic)(antibiotic)，在缺少tet和kan的情况下，两个还原酶的突变是否会回复？我如果在培养基中只加入clm和kan，利用pet28a进行单独表达，是否可行？为什么？2.对于分泌表达，希望您能给我一些建设性的意见，后面我把在网上和大家讨论的资料贴出来，必要时请参考一下，谢谢。如果在大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)种无法正确分泌，在酵母表达系统中，比如用pPIC9K分泌表达载体，是否有可能实现分泌表达？3.在rosetta－gami（DE3）中可否利用外源蛋白与Trx共表达达到促进二硫键形成的目的？比如从pet28a中利用XbaI位点将带有rbs，atg，外源基因和终止密码子taat的完整表达盒切下，插入pet32a载体XbaI位点，利用pet32a上面的启动子共表达外源蛋白和trx，这样是否可行？能否得到象融合表达同样的效果？************************************************粘贴开始如何让亲水性很强的蛋白在ecoli中实现分泌表达？ hxwuchina(就是我自己) 130多个氨基酸残基的外源蛋白，在ecoli中用pelB信号肽引导分泌，发现表达量比单独表达高很多，可是就是无法分泌：与单独表达相比，大出了信号肽20几个氨基酸残基的大小（2kd），做了很多的表达菌和载体，都是一样，真是ft！查阅文献说此蛋白ecoli中表达很困难（事实如此，单独表达两非常低，有众多20％左右的稀有密码子），而且借助软件分析发现其亲水性极高，所有位点都在treshold之上，“不分泌的蛋白很难实现成功分泌”，不知道还有没有办法让它分泌出来？低温诱导会不会凑效？还有改用其它的表达系统，比如酵母表达，是否也很难分泌？请赐教，多谢！ ------------------------------jasperxu （感谢jasperxu朋友！）pelB 序列是自己加的？换一个载体试试。我用XL1-Blue preparing M13, it is fine.I use pComb. -------------------------------yxiangmind （感谢yxiangmind朋友长期的帮忙）在ecoli中用pelB信号肽引导分泌，发现表达量比单独表达高很多?能否详细说明一下。所谓的单独表达是否为胞内非融合表达即ATG直接和目的基因连接？细胞质膜蛋白，周质蛋白和外膜蛋白以带有N-端信号肽的前体形式在细胞质中合成，随后穿膜运送到周质或定位到内外膜上。在穿膜的过程中，信号肽被信号肽酶切除，将外源蛋白的基因置于原核蛋白信号肽序列的下游有可能实现分泌表达。许多信号肽序列被应用于大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)表达系统并成功地使目的蛋白转运到周质空间中，如大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)的phoA ,OmpA,OmpT,OmpF,LamB,pelB,cex信号肽 ,金黄色葡萄球蛋白A信号肽，枯草杆菌内葡聚糖酶信号肽和人生长激素信号肽等。但是并不是任何蛋白加上信号肽序列都可以转运到周质中的。一些结构相似的蛋白有的可以顺利地转运到周质空间中；有的在同样的条件下却不能。人们认为这样的现象可能是由于这样一些原因，如变弱的外膜的自溶作用，目的蛋白的产量低和蛋白质的不完全加工，以及大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)中待分泌蛋白的特性差异。具体的原因有待进一步的研究。1. Ki Jun Jeong and Sang Yup Lee. Protein Expression and Purification 23. 311-318(2001)7. Pascal Belin and Paul Louis Boquet. Microbiology (7-3348影响实现分泌表达电荷的分布、转型氨基酸残基的含量、半胱氨酸的含量、脯氨酸的含量、亲水性和总氨基酸数量等等。有多种手段用于减少包涵体的形成以及促进蛋白质的折叠，如低温培养、宿主菌的选择、某些氨基酸残基的取代、共表达分子伴侣、硫氧还蛋白的融合表达或与目标蛋白共表达和利用硫氧还蛋白还原酶缺陷菌株作为宿主菌等。例如，除了选择合适的信号肽和融合子外，培养的条件的选择也是很重要的。因为它影响着目的蛋白的分泌速度和表达水平。一般来讲，培养温度影响着分泌的速度，分泌速度又与蛋白质的正确的折叠有关；启动子和诱导剂的浓度影响着表达的水平。而且在研究中发现，利用不同的菌种，分泌的效果也是不同的。目前普遍接受的观点是在低温下培养细胞.J.Winter等人在人proinsulin的分泌表达中将dsbA和目的蛋白融合表达。他们在实验中发现几个参数影响着融合蛋白的分泌，如宿主菌和培养条件 ，特别是它的培养基的组成。加入L-精氨酸或者乙醇到培养基中能够提高三倍融合蛋白的产量。他们认为乙醇能够影响周质空间中proinsulin的氧化折叠，而精氨酸能够提高正确折叠的重组蛋白。利用这个培养条件最终获得的目的蛋白占的1.8%。/zhishiruandi/2001/mindan.doc另外，选不同的表达系统对不同的蛋白结果可能不同。 yxiangmind 清华大学学报：为研究热休克蛋白Hsp16.3高度保守疏水片段中高度保守疏水亮氨酸残基（Leu121）对寡聚体结构和活性的影响，该残基被分别定点突变成天冬氨酸（Asp）、天冬酰胺（Asn）、缬氨酸（Val）和丙氨酸（Ala）等。意外的发现结果发现当Leu121被突变成Val和Ala时，通过SDS-PAGE凝胶电泳检测仍可见重组蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)中的高水平表达，而当被突变成Asp和Asn时，表达量低。为了确认究竟是什么原因引起Hsp16.3蛋白表达量的剧烈下降，重新构建了3个突变体，将Leu121分别突变成Asp， Ala和Val。 Leu，Val，Ala，Asp 和Asn的疏水系数分别为4.5， 3.8， 1.8， -3.5和-3.5　。如果是因为疏水性的破坏而导致Leu121Asn突变蛋白在E.coli细胞内的表达量急剧下降，那么当Leu121突变成疏水性的Val时，蛋白质表达量不会下降；而当Leu121突变成Asp时,蛋白质表达量将会象Leu121Asn 突变体一样急剧下降。在另外设计的3个突变引物中，除了突变位点121 残基的密码子不同外，其余碱基顺序均相同。这是为了排除引入E.coli细胞不喜欢密码子的可能。在选择Ala， Val和Asp的密码子时，都选用Hsp16.3基因中高频使用过的密码子。实验结果表明，当Leu突变成强疏水性的Val时Hsp16.3的高水平表达得到了维持。而当Leu121被亲水性的Asp替换后，突变蛋白的表达量急剧下降，几乎观察不到对应的蛋白带。这表明， Leu121被突变成高亲水性的氨基酸残基会破坏Hsp16.3的结构，导致突变蛋白被细胞内的水解。因此，“GVLTVTV”序列很可能是参与亚基之间相互作用的区域。究竟这一区域如何影响Hsp16.3的九聚体结构仍有待进一步深入研究。/power/library/qhdxxb/qhdx99/qhdx.htm另外，看一下我不久前的帖子：/bbs/post/view?bid=65&id=490447&sty=3&keywords=%B1%ED%B4%EF ------------------------------hxwuchina 感谢yxiangmind和jasperxu二位朋友热心相助！我的单独表达就是你所说的那样，表达两很低，全菌需要离心去除一半上清液，在SDS-PAGE中才可以看见弱的目标带。与pelB融合以后（使用过pET22b，pelB信号肽融合表达；另外还有一种热启动的表达载体，也是pelB），发现表达量明显上升，可就是比单独表达大2kd，周质空间分析没有发现目标蛋白，这表明蛋白没有分泌出来！软件分析发现，此蛋白有20％的稀有密码子。亲水性很强，下面这张图是在dnastar中的分析结果，几乎所有残基的亲水数值都为正值，并且高的数值占比较大的比重。请帮助分析一下，这样的蛋白在理论上，能否在ecoli和yeast中实现分泌？
-------------------------------hxwuchina 用bioedit分析的疏水曲线是这样的，坐标为疏水系数，与上面的分析大体一致，只不过数值正负相反。 --------------------------------hxwuchina 我弄不清楚，到底是亲水性强有利于分泌，还是疏水性强有利于分泌，请高手指点！ ------------------------------------hxwuchina 请问：你说的“硫氧还蛋白的融合表达或与目标蛋白共表达和利用硫氧还蛋白还原酶缺陷菌株作为宿主菌等”，自己有没有做过，请问效果怎么样？“转型氨基酸残基”是什么意思？ -------------------------------yxiangmind硫氧还蛋白是低分子量（MW＝11700）的氧化还原酶，在蛋白质折叠过程中可催化二硫键的正确形成。对大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)表达的重组蛋白正确折叠尤其有效。它做为一种有效的氧化还原剂用于蛋白质折叠中。l理论上利用硫氧还蛋白还原酶缺陷菌株作为宿主菌可以增加表达量。不过，我自己没有做过，呵呵~~，只是理论分析而已！转型氨基酸残基 我的理解是这样：肽链关键氨基酸残基，可能影响蛋白的空间折叠构象。例如很多蛋白肽链转角处的蛋白。我以前做分泌蛋白表达的时候，没有太多的考虑氨基酸亲水数值的影响。不过，理论上讲，疏水蛋白可作为折叠的核心，疏水的蛋白一般位于外部，因此应该更有利于分泌表达直接形成活性蛋白。 --------------------------------------------------------------------------------hxwuchina 谢谢你的回答！这里有一个不太容易理解的地方，那就是，Trx（硫氧还蛋白）作为氧化还原酶。其在外源蛋白折叠过程中的主要做用是不是“氧化”，而不是还原？在pet手册上没有写的很清楚，向这样的理论方面的知识一般很难自己找到答案，只有上网来求助象你这样在生化方面的高手了。手册上说，在trx还原酶（trxB）突变和谷胱甘肽还原酶（gor）突变的宿主菌内，可以增强二硫键的形成，前提是胞质中还必须有trx的存在。我的理解是，二硫键形成过程中，Trx作为，使两个巯基之间脱氢，形成二硫键，这时，由于trxB和gor的突变，这两个主要酶的“”特性没有发挥出来，所以不能威胁到已形成的二硫键的稳定性，也就稳定了外源蛋白的正确折叠，是这样的吗？请指教！ 谢谢你的回答！原来是这样的，酵母和ecoli的分泌机制应该大同小异，是不是？在ecoli中不能分泌的话，酵母会不会也分泌不了？你那里有没有一些关于蛋白质亲水、疏水方面的资料，可否传一点给我看看？谢谢！粘贴结束*********************************************************************这么多的问题，希望你能够有耐心帮助我，急切等待您及贵公司相关技术人员的帮助！祝商祺！
上面是我发给上海merck公司一位技术人员的询问信，现在还没有答复，请各位帮忙回答一下，多谢！
对于含有半胱氨酸knot的蛋白来讲，做分泌表达后的纯化仍然是一个很大的问题，建议做包涵体表达、变性、复性，这样最终活性产物的产量比较高。如果考虑稀有密码子的影响，可以利用Vector NTI的backtranslation功能进行优化，使用overlap extension PCR合成基因后进行表达测试。
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