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硝酸纤维素膜(NC膜；膜孔径0.45um)
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信息内容：英文名称：NC；Nitroate cellulose sheets其他名称：硝酸纤维素膜 硝酸纤维素薄膜,硝酸纤维素膜,NC,Nitroate cellulose sheets
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信息内容：硝酸纤维素薄膜/硝酸纤维素膜/NC/Nitroate cellulose sheets
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Trans-Blot& Turbo 全能型蛋白转印系统
Trans-Blot& Turbo& 全能型蛋白转印系统
Trans-Blot Turbo 是快速、高效、可重复的蛋白转印系统，可在短短 3 分钟内将蛋白质从凝胶转印到膜上。
印迹膜会以卷、预制片或方便使用的膜/滤纸三明治提供。
Western 杂交
DNA/RNA 印迹
点/槽印迹筛选
菌落/斑块筛选&
结合载量 (&g/cm2)
硝酸纤维素
支持的硝化纤维素
Immun-Blot& PVDF
Immun-Blot& 低荧光 PVDF
荧光免疫印迹
Sequi-Blot& PVDF
蛋白质测序
Zeta-Probe&
DNA/RNA 杂交
Zeta-Probe GT
DNA/RNA 杂交
菌落/斑块筛选
预切割膜尺寸
预切割滤纸尺寸
膜/滤纸三明治
Mini Trans-Blot& 槽
7 x 8.4 厘米
7.5 x 10.5 厘米
7 x 8.5 厘米
Criterion& 转印设备
8.5 x 13.5 厘米
9.5 x 15.2 厘米
8.5 x 3.5 厘米
Trans-Blot& 槽
13.5 x 16.5 厘米
15 x 20 厘米
Trans-Blot& Plus 槽
25 x 28 厘米
26.5 x 28 厘米
26.5 x 28 厘米
Trans-Blot& SD 槽
7 x 8.5 厘米
14 x 16 厘米
7 x 8.5 厘米
11.5 x 16 厘米
7 x 8.4 厘米
8.5 x 13.5 厘米
15 x 15 厘米
8 x 13.5 厘米
15 x 9.2 厘米
18 x 18.5 厘米
20 x 20 厘米
Mini-PROTEAN& II 多道筛选仪
7 x 8.4 厘米
7 x 8.4 厘米
7 x 8.5 厘米
7 x 8.5 厘米
Bio-Dot& 仪
9 x 12 厘米
Bio-Dot& SF 仪
9 x 12 厘米
7.7 x 11.3 厘米
有关更多信息，请参见公告
硝酸纤维素（NC）膜是蛋白和核酸杂交最常用的印迹膜。Bio-Rad 0.2 &m 孔径的NC膜是致密的 100% 硝化纤维素，已被验证是用于Western、Northern和Southern杂交的优良介质。它具有简单易用，可快速在水溶液中润湿，并且没有普通NC膜常见的脆性。 孔径为 0.45 &m 的硝酸纤维素膜推荐用于大多数分析型印迹，包括蛋白ssDNA 和 RNA 转印。
功能和优点
兼容所有标准免疫印迹和核酸检测方法
具有优异的结合载量，而不会产生背景干扰
孔径产生了极好的信噪比印迹结果
有三种式样可供使用：
方便使用的 0.45 &m 滤纸/膜三明治形式
裁剪成适合凝胶尺寸的片状形式
经济实惠的卷状形式
蛋白质从 SDS-PAGE 凝胶转印到膜，以进行Western杂交
适用蛋白质分子量范围宽，并可用于 &500 bp 的核酸
核酸转印，以进行 northern 或Southern杂交
目标蛋白质的免疫检测和核酸的探针杂交
有关根据凝胶类型选择不同膜类型和尺寸的更多信息，请参见。
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Pkg of 1 roll, 0.45 μm, 30 cm x 3.5 m, bulk blotting membrane for protei can be used for custom sizing
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Pkg of 5, 0.45 &m, 20 x 20 cm, precut blotting membrane for proteins and nucleic acids
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Pkg of 10, 0.45 &m, 15 x 15 cm, precut blotting membrane for proteins and nucleic acids
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Pkg of 10, 0.45 &m, 15 x 9.2 cm, precut blotting membrane for proteins and nucleic acids
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Pkg of 10, 0.45 &m, 11.5 x 16 cm, precut blotting membrane for proteins and nucleic acids
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Pkg of 10, 0.45 &m, 9 x 12 cm, precut blotting membrane for proteins and nucleic acids
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Pkg of 10, 0.45 &m, 7 x 8.5 cm, precut blotting membrane for proteins and nucleic acids
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Pkg of 10, 0.45 &m, 8.5 x 13.5 cm, precut blotting membrane for proteins and nucleic acids
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Pkg of 10, 0.45 &m, 26.5 x 28 cm, precut blotting membrane for proteins and nucleic acids
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Pkg of 20, 0.45 μm, 8.5 x 13.5 cm, precut preassembled blotting membrane/f fits Criterion and Criterion XT gels
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Pkg of 50, 0.45 μm, 8.5 x 13.5 cm, precut preassembled blotting membrane/f fits Criterion and Criterion XT gels
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Pkg of 20, 0.45 &m, 7 x 8.5 cm, precut preassembled blotting membrane/f fits Mini-PROTEAN& and Ready Gel& precast gels
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Pkg of 50, 0.45 &m, 7 x 8.5 cm, precut preassembled blotting membrane/f fits Mini-PROTEAN& and Ready Gel& precast gels
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Protein Blotting Guide, Interactive PDF, Rev B
Blotting Membrane Brochure, Rev G
产品 > 电泳和印迹 > 蛋白质电泳和印迹 > Western 杂交 > 蛋白质印迹膜和滤纸 > 硝酸纤维素膜，0.45 um"/>
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添加个人讯息或意见:Blot&（以下简称WB）简介：o印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。o1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。o而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。WB 基本原理：WB 间接法基本原理：首先利用SDS-PAGE对蛋白质样品进行分离，然后转移到固相载体（例如NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的NC膜就称为一个印迹（blot）,用于对蛋白质的进一步检测。印迹首先用蛋白溶液（如5%的BSA或脱脂奶粉溶液）处理以封闭NC膜上剩余的疏水结合位点，而后用所要研究的蛋白质的抗体（一抗）处理，印迹中只有待研究的蛋白质与一抗特异结合形成抗原抗体复合物，而其它的蛋白质不能与一抗结合，这样清洗除去未结合的一抗后，印迹中只有待研究的蛋白质的位置上结合着一抗。处理过的印迹进一步用适当标记的二抗处理，二抗是指一抗的抗体，如一抗是从鼠中获得的，则二抗就是抗鼠IgG的抗体。处理后，带有标记的二抗与一抗结合形成抗体复合物可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白质的位置。目前有结合各种标记物的抗特定IgG的抗体可以直接购买作为二抗，最常用的一种是酶连的二抗，印迹用酶连二抗处理后，再用适当的底物溶液处理，当酶催化底物生成有颜色的产物时，就会产生可见的区带，指示所要研究的蛋白质位置。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。在ＷＢ实验中，还有另一种方法，就是直接标记一抗，再用底物显色，这种方法叫直接法。与用二抗的间接法相比有诸多不足，标记二抗可用于很多种不同特异性的一抗，避免了标记很多一抗的需要，同时因为一抗结合不止一个二抗分子，所以二抗可以增强信号。所以一般情况下都釆用间接法进行检测。WB主要包括以下&4&个主要的步骤：n&&&&&&样品制备n&&& &电泳分离n&&& &蛋白的膜转移n&&& &免疫杂交与显色WB实验中用到的溶液和试剂n&&& 1X 磷酸盐缓冲液(PBS)n&&& Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ;EDTA: 1 mM ;PMSF: 1 mM ;Aprotinin, leupeptin, pepstatin: 1 microgram/Na3VO4: 1 mM ;NaF: 1 mMn&&& 1X SDS 样品缓冲液62.5 mM Tris-HCl (pH 6.8 于 25°C), 2% w/v SDS, 10%甘油,50 mM DTT, 0.01% w/v溴酚蓝n&&& 转移缓冲液25 mM Tris base, 0.2 M 甘氨酸, 20%甲醇 (pH 8.3)n&&& 10X Tris缓冲盐 (TBS)准备1L 10X TBS: 24.2 g Tris base, 80 g NaCl;用1N HCl调pH为 7.6n&&& 脱脂奶粉或BSAn&&& 甲醇n&&& TBS/T缓冲液1X TBS, 0.1% Tween-20n&&& 封闭缓冲液（TBS/T）1X TBS, 0.1% Tween-20加5% w/v脱脂奶粉或BSAn&&& 一抗的稀释1X TBS, 0.1% Tween-20 加 5% BSA (多抗)或 5%脱脂奶粉(单抗)Note:&一般来说, BSA被推荐用于多克隆抗体，脱脂奶粉用于单克隆抗体，这样可得到较高的信噪比。抗体的稀释度参考抗体说明书或根据实验确定。n&&& 预染的蛋白质Marker，可用于监测转膜的效率样品制备原始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白（组织蛋白提取的时候一定要清洗彻底，减少血浆蛋白对组织样的影响，笔者就深受其害）。1．培养细胞或药物处理。2．弃培养基，用1X PBS漂洗细胞2次，去尽残留培养基。3．加入complete RIPA(6-well plate, 100 ul /w或 75 cm2&plate, 500-1000 ul/瓶)，刮落细胞，转移到Ep管。注意：&冰上操作。4．超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。5．冰上裂解15mins。6．12000g，5mins。7．加入6×SDS loading buffer，样品煮沸5 mins。8．离心12000×g, 5 mins，取上清。9．电泳分离：上样15ul~20 ul 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。如要定量检测某蛋白的表达水平，应用RIPA裂解液(1 ml per 107&cells/100 mm dish/150 cm2&flask)裂解细胞，收集裂解液至离心管中，在振荡器上混匀4～15min，14000g离心15min（4℃），弃沉淀，用Bradford法或其它蛋白质测定方法测定上清中蛋白浓度以调整上样体积和上样量，进行Western杂交时还需设置内或外参照，通常用beta-actin。注意：&一般上样20~30 ug已足够，如待检蛋白为低丰度蛋白，可加大上样量至100ug，但电泳条带易拖尾，可制备亚细胞组份或采用更敏感的检测方法。电泳分离（参照&SDS-PAGE&电泳方法）转膜杂交膜的选择是决定Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种：硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜。NC膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物，在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，但在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔径的NC膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。通常用0.45um和0.2um两种规格的NC膜。大于20kD的蛋白可用0.45um的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2um的膜了，如用0.45um的膜就会发生“Blowthrough”的现象。PVDF膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低分子量蛋白的检测。但PVDF膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和1-5秒钟。蛋白质常用的转移方法主要有两种：槽式湿转和半干转移。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白转移，所用缓冲液少。以下为槽式湿转的操作步骤。1.&&&&& 将胶浸于转移缓冲液中平衡10min。注意：&如检测小分子蛋白，可省略此步，因小分子蛋白容易扩散出胶。2.&&&&& 依据胶的大小剪取膜和滤纸6片，放入转移缓冲液中平衡10min。如用PVDF膜需用纯甲醇浸泡饱和3-5秒钟。3.&&&&& 装配转移三明治：海绵(R)3层滤纸(R)胶(R)膜(R)3层滤纸(R)海绵，每层放好后，用试管赶去气泡。切记：胶放于负极面（黑色面）。4.&&&&&&将转移槽置于冰浴中，放入三明治（黑色面对黑色面），加转移缓冲液，插上电极，100V，1h（电流约为0.3A）。注意：应再次检查三明治和电极是否装配正确，电源是否接通。5.&&&&& 转膜结束后，切断电源，取出杂交膜&免疫杂交与显色1．&用25 ml TBS 洗膜5min，室温，摇动。2．&置膜于25 ml 封闭缓冲液中1h, 室温，摇动。3．&15ml TBS/T洗3次（5 min/T）。4．&加入合适稀释度的一抗，室温孵育1-2h或4°C过夜，缓慢摇动。5．&15 ml TBS/T洗3次（5 min/T）。6．&加入合适稀释度的碱性磷酸酶（AP）或辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗，室温孵育1h，缓慢摇动。7．&15 ml TBS/T洗3次（5 min/T）。8．&15 ml TBS洗1次。9．&蛋白检测(显色法或发光法，按相应试剂说明操作)。注意事项：1．操作中戴手套，不要用手触膜。2．PVDF膜在甲醇中浸泡时间不要超过5秒。3．如检测小于20kD的蛋白应用0.2um的膜，并可省略转移时的平衡步骤。4．某些抗原和抗体可被Tween-20 洗脱，此时可用1.0% BSA代替Tween-20。5．关于封闭剂的选择：5%脱脂奶/TBS or PBS: 能和某些抗原相互作用，掩盖抗体结合能力；0.3~3% BSA in PBS：低的内源性交叉反应性。6．如用0. 1% Tween 20、0.02% NaN3&in PBS or TBS作封闭剂和抗体稀释液，抗体检测后可进行蛋白染色。如要同时检测大分子量和小分子蛋白，最好用梯度胶分离蛋白。纳川科技Lifescience(gh_e490de3f3d46)　
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上海市徐汇区钦江路15号
86-021--021-
Western Blot杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别
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杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别&&&&&&杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别1. *纤维素膜*纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了；比如NC膜很容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间，不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆，又容易卷，操作要小心，不适合用于需要多次重复清洗的用途--因为经不起多次&折磨&。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择0.2um的，如果小于7KD的话最好选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜--混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。另外提醒一句：由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时最好使用较温和的Tween20，而且浓度不要超过0.3%(据说0.05%效果最好)。一般而言，NC膜越纯，其蛋白结合能力就越高，所以要增加WB的灵敏度和分辨率，提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。如果NC膜搀杂一些醋化纤维素--这在前面已经提到，会影响蛋白质结合。Protran由于是纯NC膜，比较脆，机械耐受力欠佳，需要小心操作，如果担心自己&粗手粗脚&，那么就可以考虑一下Optitran或者Pall公司的以耐受力著称的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。卷膜肯定是最实惠的选择，只不过要自己动手裁剪--切记，必须带手套操作。*纤维素膜生产商：GE WHATMAN BA83 BA85& 价格& 1950.00/卷& 有现货WHATMAN转印迹膜转印膜01196WHATMAN*纤维素膜(NC膜)转印迹膜转印膜01196其它的*纤维素杂交膜可能含有大量的醋酸纤维素，这会降低蛋白的结合能力。Protran杂交膜采用纯*纤维素制成，具有最好的操作强度，兼容多种检测方法，包括同位素法，化学发光法(以luminol为基础)，比色法和荧光法等。与PVDF膜相比，Protran*纤维素膜在使用中不需要甲醇预湿步骤，这使它可以用于那些需要亲水性环境的蛋白质的转移，在转移之前，膜仅需要在水中简单润湿，然后置于转移缓冲液中，而不再需要其它预湿步骤。&高结合力，低背景除了具有高结合能力以外，Protran*纤维素膜本身产生的背景非常低，膜特有的表面性质保证了优异的信噪比，而同时却不需要严格的清洗条件。小分子蛋白的高保留率Protran*纤维素膜有多种孔径大小可供选择，使不同的应用都可以获得最佳的效果。0.2&m孔径的Protran BA83*纤维素膜通过减少小分子&下漏&来保留分子量小于20KD的蛋白质分子。0.45&m孔径的Protran BA85*纤维素膜是较大分子量样品和常规核酸研究的理想选择。0.1&m孔径的Protran BA79则用于分子量低于7kD的小分子蛋白转移。&Protran*纤维素膜的一个主要优势在于，经实验证明，结合在Protran膜上的蛋白能够保持分子识别活性长达5年。&Protran杂交三明治组合由1张预切的*纤维素膜和2张3MM层析杂交纸组成的三明治包装，帮您节省更多的时间。这些膜都是用于杂交的质量最好的NC膜&&Protran BA83或者BA85。Protran *纤维素膜的结合能力为80~150&g/cm2，可高压灭菌(液体冷循环)GE RPN303CPALL 66485 最常用的NC膜 30cm*3m/卷超低特价：1250.00/卷现货&2. PVDF膜与*纤维素膜相比，PVDF膜在蛋白质截留能力，机械强度和化学相容性上都更优越的性能。市售*纤维素膜的典型结合量是80-100&g/cm2,而PVDF膜结合量是100-200&g/cm2(而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍！)。但是PVDF膜最大的优点不仅于此：更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择；而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，特别是需要做N端蛋白测序，在相当&严酷&的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择。但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理(不超过15秒)再用缓冲液平衡，才能用，而且适用过程中万一干了也要同样程序再处理(不过要真出现这种问题也是自己欠扁，谁要你不小心呢，转膜前处理也就罢了，转膜后再这样处理可能会影响后继的抗体识别呢)。PVDF膜同样分0.45um和0.2um的，后者孔径小，对小分子蛋白有较好的拦截吸附，背景可能会比前者稍高。pvdf膜生产商：MILLIPORE 特价 常年 现货IPVH0um& 1650.00/卷ISEQ0um&& 2050.00/卷&PALL 66543&&&&& 2150.00/卷&卷膜经济实惠，裁剪剩下的边角料还可以用来做点杂交。再次强调的是，疏水PVDF膜在用前必须经过50%或以上体积比的甲醇或者乙醇溶液处理几分钟，待膜变成半透明后用纯水漂洗一下，转入电泳缓冲液平衡才能用上海索宝生物科技有限公司 宣&& 订货热线：021-61506&&&&& QQ:&& 急电：
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标题: 关于ＮＣ膜(孔径,免疫,层析)
摘要: [关于ＮＣ膜(孔径,免疫,层析)] 我是做免疫层析试纸条用的，我查的文献是需要流速为１３５s的ＮＣ膜，可厂家都是孔径，而且０ ４５微米的多，请问大家我的应该买多大孔径的？ 关键词:[孔径 免疫 层析]……
我是做免疫层析试纸条用的，我查的文献是需要流速为１３５s的ＮＣ膜，可厂家都是孔径，而且０.４５微米的多，请问大家我的应该买多大孔径的？
回复ＮＣ膜大都是以每4cm膜水的层析流速多少秒来定义孔径的，根据流速的快慢常用的有90，120，135，180，240等膜，流速时间越大，孔径越小。最普遍使用的是135s的膜，根据你的需要，你直接告诉厂家订135s的膜就可以了。回复135是millipore的规格回复请教：看网上的资料，用于免疫层析的NC膜一般有130s与180s两种，请问是不是金标蛋白的大小决定选择NC膜的流速呢？回复请教：看网上的资料，用于免疫层析的NC膜一般有130s与180s两种，请问是不是金标蛋白的大小决定选择NC膜的流速呢？ 不是。蛋白远远小于膜的孔径。选择膜的孔径是看整个试纸条需要多快的层析速度，因为层析速度很大程度决定抗原抗体反应的时间，反应时间越多，固定抗体捕获标记了信号的结合物就越多，信号越多，灵敏度越高，同时非特异性也增强。这是最基本的，取决与主要活性原料（抗原性能）。然后还得考虑样品粘稠度，市场对产品判读结果时间的要求，等等。回复你可以参考我写的文章，同时135s的膜是应用最多的膜。回复这里涉及到一个膜的分类标准问题，一个供应商可能提供这个膜是8um，但另一个供应商告诉你膜是135s的。这之间的区别与联系是什么？　　um指的是膜孔径，而从上面膜的生产过程，我们可以看出，膜的孔径实际上是没有办法界定的。由于干燥成型等过程的非绝对均一，膜的孔径也是非均一的.膜孔径的说法实际上是沿用了一直以来的一个形象称呼.而以秒为单位的定义为，每4cm膜，水的层析时间是***s.该单位已经越来越被各大厂商所接受，成为了一个通用的比较标准.以下我们将采用s单位来进行交流。　　换算情况大致为：8um=135s；6um=180s回复135s除了millipore的，还有没有其他的？回复还有Satorusu whatman pall 都有孔径从大到小都有
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