Evidence for a stepwise program of extrathymic T cell development within the human tonsil
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Evidence for a stepwise program of extrathymic T cell development within the human tonsil
1Medical Scientist Training Program and
2Integrated Biomedical Sciences Graduate Program, The Ohio State University, Columbus, Ohio, USA.
3Department of Pathology, Stanford University School of Medicine, Palo Alto, California, USA.
4Department of Molecular Genetics,
5Division of Hematology, Department of Internal Medicine,
6Comprehensive Cancer Center and Arthur G. James Cancer Hospital and Richard J. Solove Research Institute,
7Center for Biostatistics,
8Department of Molecular Virology, Immunology, and Medical Genetics, and
9Department of Pathology, The Ohio State University, Columbus, Ohio, USA.
Address correspondence to: Michael A. Caligiuri, 521B James Cancer Hospital, 300 W. 10th Ave., Columbus, Ohio 43210, USA. Phone: 614.293.7521; Fax: 614.293.3132; E-mail:
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Sign up for email alertsBD Pharmingen(TM) 562722 Human Lineage Cocktail 4 (lin 4) (CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11b, CD14, CD19, CD20等) 人血系混合物4_流式细胞分析抗体_抗体_华雅思创生物
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& BD Pharmingen(TM) 562722 Human Lineage Cocktail 4 (lin 4) (CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11b, CD14, CD19, CD20等) 人血系混合物4
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产品英文名称：Human Lineage Cocktail 4 (lin 4) (CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11b, CD14, CD19, CD20, CD56, CD235a)
产品中文名称：人血系混合物4(lin 4)( CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11b, CD14, CD19, CD20, CD56, CD235a)
Human Lineage Cocktail 4 (lin 4) (CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11b, CD14, CD19, CD20, CD56, CD235a)产品描述
FITC标记的人血系混合物4设计用于与来自主要造血谱系的细胞反应，比如T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞/巨噬细胞、NK细胞、红细胞和粒细胞等。这种预稀释的混合物由12个FITC标记的抗体构成，用于排除标记血系阳性标记细胞有助于流式细胞仪鉴定人脐带血和骨髓廇中的阴性标记造血干细胞。
包含成份：clone RPA-2.10, 识别CD2; HIT3a, 识别CD3; RPA-T4, 识别CD4; M-T701, 识别CD7; HIT8a, 识别CD8; HI10a, 识别CD10; ICRF44, 识别CD11b; M5E2, 识别CD14; SJ25-C1, 识别CD19; 2H7, 识别CD20; B159, 识别CD56和GA-R2(HIR2), 识别CD235a.额外荧光标记试剂可与FITC人血系混合物4, 比如CD34, CD38, CD90和CD45RA结合，以描述来自脐带血或骨髓廇造血干细胞群。
人血洗混合物4(lin 4)( CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11b, CD14, CD19, CD20, CD56, CD235a)的保存条件
Store undiluted at 4&C and protected from prolonged exposure to light. Do not freeze.The monoclonal antibody was purified from tissue culture supernatant or ascites by affinity chromatography.The antibody was conjugated with FITC under optimum conditions, and unreacted FITC was removed.
Human Lineage Cocktail 4 (lin 4) (CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11b, CD14, CD19, CD20, CD56, CD235a)的注意事项
1.This reagent has been pre-diluted for use at the recommended Volume per Test. We typically use 1 & 10^6 cells in a 100-&l experimental
sample (a test).
2. Please refer to /pharmingen/protocols for technical protocols.
3.For fluorochrome spectra and suitable instrument settings, please refer to our Multicolor Flow Cytometry web page at /colors.
4. Source of all serum proteins is from USDA inspected abattoirs located in the United States.
5.Caution: Sodium azide yields highly toxic hydrazoic acid under acidic conditions. Dilute azide compounds in running water before
discarding to avoid accumulation of potentially explosive deposits in plumbing.
6. Brilliant Violet& 421 is a trademark of Sirigen.
7. Brilliant Violet& 605 is a trademark of Sirigen.T细胞的发育与成熟在胸腺中完成。在这里它们会受到"阳性选择（positive&selection）"以及"阴性选择（negative&selection）"，从而发育形成特异性识别外源物质的成熟T细胞。同时，CD4与CD8的分化也在这里完成。一类表达CD8表面分子的T细胞将来发育为细胞毒性T细胞（cytotoxic&T&cell），负责下游的病原体杀伤作用。另一类表达CD4表面分子的T细胞将来发育为辅助性T细胞（helper&T&cell），负责信号传递的作用。一般认为，在成熟后离开胸腺时，CD8与CD4的标记已经固定，对于任意一个克隆来说都是不能更改的。然而，最近，迈阿密米勒大学医学院Zhibin&Chen研究组在《cell&report》发表了一篇文章，发现了在肠道特异性的环境中，会出现成熟的CD8阳性T细胞向CD4方向分化，而且这一分化对于调节免疫耐受具有积极的作用。
&
作者立足于这样一个问题：大肠表面富集了大量微生物，因而宿主对这些微生物进化出了相应的免疫耐受机制。然而由于微生物之间的差异十分有限，作者认为这种类型的免疫耐受一定要被控制在一定范围之内。因此，作者猜想是否在肠道复杂多变的环境中，T细胞的分工不再是"刚性"的策略，而是可以随环境变化而不断调整的"柔性"策略。
&
首先，作者繁育了整个后天免疫系统中只含有只能识别一类特定抗原的CD8+&T细胞的小鼠（A小鼠）。通过解剖成年的A小鼠，并取各组织淋巴结进行细胞特性分析（流式）。结果显示，虽然遗传上小鼠只含有CD8+&T细胞，但在大肠淋巴结中仍然看到了相当一部分的CD4+T细胞，有趣的是，这部分细胞与原有的CD8+T细胞识别相同的抗原。说明这部分"意外"出现的CD4+T细胞是从CD8+细胞分化过来的。之后，作者通过杂交的方法将A小鼠与缺失MHC-II的B小鼠进行杂交，得到了A&B小鼠。进行相同的检测后发现：A&B小鼠大肠淋巴结中CD4+T细胞不再出现了。说明这一现象依赖于细胞表面的MHC-II。另一方面，虽然作者发现从CD8向CD4的转变的事实，但是CD4却不能够向CD8转变。
&
之后，作者通过手术的方式将A小鼠的肠系膜淋巴结（MLN）摘除，结果显示：摘除后虽然与对照组相比大肠淋巴结内CD4+T细胞总量与比例没有收到影响，但其中Treg的比例发生了明显的下降。之后，通过遗传学手段作者也证实了CD8+T细胞在与胸腺外部的MHC-II相互作用能够促进其向CD4+T细胞的分化。胸腺则在此过程中没有作用。
&
作者还发现了肠道微生物对于CD8向CD4的转变有非常重要的作用，但缺失肠道微生物之后并能阻止这一转变。说明启动这一过程的因素并不是肠道微生物。另外，由于之前报道认为TGF-beta在调节T细胞分化中具有重要的作用，作者检测了TGF-beta是否影响了这一转变，结果显示：TGF-beta信号通路的阻断并不能抑制分化的进程，否定了这一猜想。
&
最后作者证明这一现象在生理条件下（T细胞健全）也一样存在，并且证明通过这一过程产生的特异性识别MHC-I的Treg对于调节免疫耐受具有积极的作用。
日期：日 - 来自[]栏目
为了保护机体免于遭受将来相同的病原体感染，CD4阳性T细胞能分化成记忆T细胞。于此相对的，还有一群名为自主活化的CD4阳性记忆T细胞会持续存在于组织中造成对身体的破坏。然而机体如何控制CD4阳性记忆T细胞种群稳定的详细机制还不清楚。
本文的研究者们发现Notch信号通路中的一个蛋白Rbpj（recombination&signal&biding&protein&for&immunoglobulin&k&J&region）受损后CD4阳性记忆T细胞的生存能力也受到遏制。对小鼠使用Notch信号通路的抑制剂也能减少CD4阳性记忆T细胞的种群数量，并能够预防实验性自身免疫型脑脊髓炎的复发。Pbpj缺陷的CD4阳性记忆T细胞表现出葡萄糖摄取减少，而背后的分子机制是由于Akt磷酸化的降低导致葡萄糖转运蛋白Glut1低表达造成的。
而通过给予Pbpj敲除小鼠丙酮酸（能够绕过葡萄糖摄取而作为底物直接供给三羧酸循环），可以抑制自助活化的CD4阳性记忆T细胞，说明CD4阳性记忆T细胞的存活依赖于葡萄糖代谢。
总的来说，文章阐释了Notch信号通路通过调节葡萄糖摄取来维持CD4阳性记忆T细胞的功能。
日期：日 - 来自[]栏目
胸腺来源的CD4+CD25+调节性T细胞在外周免疫耐受机制中发挥着重要作用。其表面表达多种分子标志，包括CD25(IL-2受体α链)、细胞毒T细胞相关抗原-4(CTLA-4)、肿瘤坏死因子受体家族相关基因(GITR)和程序性死亡1(PD-1)、叉头翼螺旋转录因子(Foxp3)等膜分子。然而这些细胞表面分子均非调节性T细胞的特征性标志，不能据以区分调节性T细胞与活化的T细胞。寻找合适的表面分子标记物将是对调节性T细胞进行深入研究的关键步骤。本文就近年来关于CD4+调节性T细胞的分子标记物及作用机理的研究做一综述。
【关键词】& CD4+调节性T细胞;分子标记物;Foxp3
　　调节性T细胞(regulatory T cell，Tr)能够阻止针对自身抗原的炎症反应，并能限制自身免疫病的发展。这些具有免疫调节作用的细胞以两种形式存在，一种是体内自然存在的细胞，另一种是经诱导后产生的细胞。本文就近年来关于CD4+调节性T细胞的分子标记物及作用机理的研究做一综述。
　　1 CD4+调节性T细胞的起源
　　CD4+ CD25+ Tr细胞是目前研究较多的亚型，其他还有Th3和Tr1[1]。CD4+ CD25+ Tr细胞在自身免疫耐受中起重要作用，它来源于胸腺的CD4+CD25-T细胞。在胸腺的自然选择过程中，T淋巴细胞受体(TCR)与低密度的MHC-lI类肽复合物或胸腺内皮细胞递呈的外周自身肽间高亲和力的反应介导CD4+CD25+Tr细胞的分化发育。此外，最近发现当未成熟淋巴细胞在胸腺中经历选择时，对自身MHC/抗原肽分子亲和力较高的一群CD4+T细胞被&部分活化&，并获得其他一些特性，发育成为具有免疫抑制功能的CD4+CD25+Tr细胞，这种选择途径被称为&另类阴性选择&。Tr1与 Th3是另外两类比较常见的调节性T细胞。Tr1的主要特征是：分泌高水平的IL-10，低水平的IL-2，中度水平的TGF-&、IFN和IL-5。Th3区别于 Tr1主要在于其分泌高水平的TGF-&。需要指出的是,CD25分子不能将CD4+CD25+Tr细胞与Tr1、Th3细胞区别开来。前者组成性表达CD25，后者在T细胞活化后也表达CD25，但CD4+CD25+Tr细胞是源于胸腺的一个独特的T细胞亚群，而Tr1、Th3细胞则是在外周生成的。多数情况下，Trl、Th3是通过抗原反复刺激诱导产生的。在IL-10存在的条件下，慢性激活CD4+T细胞可诱导Trl的产生,口服IL-4及MBP可诱导Th3的产生。
　　2 CD4+调节性T细胞的分子标记物
　　CD4+CD25+Tr细胞表面表达多种分子标志，包括CD25(IL-2受体&链)、细胞毒T细胞相关抗原-4(CTLA-4)、肿瘤坏死因子受体家族相关基因(GITR)和程序性死亡1(PD-1)等膜分子。然而这些细胞表面分子均非Tr的特征性标志，不能据以区分Tr与活化的T细胞。Hori等发现Foxp3(forkhead/winged helix transcription factor 叉头翼螺旋转录因子)在CD4+CD25+调节性T细胞中特异性表达，且对该群细胞的发育和功能起重要作用。Foxp3可在一定程度上反映CD4+CD25+Tr的水平和活性[2]。但也有学者发现Foxp3表达并非CD4+CD25+ Treg的激活信号。活化的CD4+CD25+Tr不表达Foxp3。Foxp3不仅在CD4+CD25+T细胞表达，也在激活的CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞表达。在小鼠中Foxp3只特异性地表达于胸腺和外周血的CD4+CD25+ Tr，可作为CD4+ CD25+ Tr的一个特异性标志。然而人类的Foxp3除在CD4+CD25+Tr上表达外，在TCR刺激时，其他非调节性T细胞也表达，因此Foxp3在人类 CD4+CD25+Tr上的表达并不具有特异性，Foxp3表达的量并不一定代表 Tr的量[3]。与人类不同，小鼠的T细胞在TCR刺激时Foxp3表达并不增加，但在TGF-&存在时Foxp3表达增加，而且与调节功能相关的表面标志，如CD25、CTLA-4、GITR均表达[4]。Foxp3缺陷的小鼠缺乏调节性T细胞，导致免疫调节障碍和自身免疫紊乱。在人类X连锁的Foxp3基因的突变可以导致免疫调节缺陷、多种内分泌病和X连锁自身免疫综合征。Foxp3可以封闭Rel家族转录因子NF-AT和NF-&B的作用，诱导他们的靶基因，从而发挥IL-2的转录抑制子的作用[5，6]。序列分析发现在Foxp3位点上有3个高度保守的非编码区：Foxp3启动子区、TGF-&传感器区、调节性细胞特异性脱甲基作用区(TSDR)[7]。天然的调节性细胞和诱导的调节性细胞的TSDR的甲基化作用是不同的。天然的调节性细胞TSDA是完全的甲基化，而诱导的TSDR甲基化作用与活化的传统的T细胞类似[8，9]。关于人类Foxp3+CD4+T细胞的基因表达、表现型、抑制功能的研究结果不尽相同。近来Sakaguchi等人[10]对CD45RA和CD45RO进行了研究，发现CD45RA可以作为Foxp3lowT细胞的表达标志，而Foxp3+CD45RO+ T细胞属于效应性调节性T细胞，具有很强的抑制功能。最近的研究[11～13]表明miRNA对Tr抑制具有重要的调节作用。miR-155和miR-146a 在鼠的Foxp3依赖的Tr上高表达，刺激后在效应性T细胞和骨髓细胞上暂时上调。miR-155和miR-146a抑制细胞因子信号转导抑制剂(SOCS)1的表达，他对STAT1具有关键的阴性调节作用。miR-146a主要是控制Tr调控Th1应答的能力[14]。研究发现Foxp3不仅表达在T细胞上，在胰腺癌细胞上也发现Foxp3的mRNA和蛋白。在体内胰腺癌细胞是T细胞增殖的有效抑制剂。Foxp3表达的减少部分地逆转了胰腺癌细胞的抑制活性[15]。Moo-Young等人[16]把新鲜分离的CD4+CD25-效应性T细胞和胰腺癌细胞(Panc89,Colo357)共同培养，TCR诱导的扩增被抑制。但是目前还不知道这种抑制是由Foxp3+肿瘤细胞直接作用的，还是由于某些效应性T细胞转化成了Tr1或Th3间接作用的。也有报道[17]认为CDl27可以作为调节性T细胞的一个特异性标志，在CD25表达时，CDl27(IL-7受体的&链)可以区别Tr和活化T细胞。Tr应为CDl27低表达(CDl27low)，而活化的效应T细胞为CDl27高表达(CDl27high)。Liu等[18]运用微点阵基因表达谱技术发现，CD4+CD25+细胞表面CD127表达下调，而大部分CD4+Foxp3+T细胞表面均为CD127低表达，且体外具有抑制活性。近来有研究[19，20]表明GARP 或LRRC32可能是调节性T细胞的特异性活化标志。GARP是TCR反复刺激产生的一种Toll样受体。它被认为是人类CD4+CD25highFoxp3high调节功能的补充。调节性T细胞上si-RNA介导的GARP的下调导致了抑制能力的下降;而非调节性T细胞上的过分表达也能发挥类似于调节性T细胞的抑制功能，因此提示GARP在活化的调节性T细胞上发挥重要的功能[21～23]。
　　3 调节性T细胞的作用机制
　　尽管付出了很大的努力，但是调节性T细胞抑制效应性T细胞的作用机制还不十分明确，可能涉及抑制性细胞表面分子和抑制性细胞因子。
　　3.1 抑制性细胞表面分子的调节作用
　　Tr细胞发挥抑制作用是细胞因子非依赖的，而主要依赖于细胞间直接接触，并通过TCR来激活抑制性细胞。参与Tr细胞接触抑制的重要分子之一为该细胞表达的CTLA-4。Tr细胞活化后CTLA-4的表达增加，并持续表达。CTLA-4分子胞浆区可与磷酸酶SHP-1及SHIP结合，对CD4+及CD8+T细胞活化均有负调节作用。CTLA-4与B7配接后，其胞内段携带的ITIM传递抑制信号，抑制T细胞的增殖和活化。用抗CTLA-4单抗可阻断Tr细胞的抑制作用。调节性T细胞上表达的CTLA-4可以刺激树突状细胞表达吲哚2，3-双加氧酶(IDO)，分解色氨酸 [24]。但CTLA-4缺陷小鼠的Tr细胞也能发挥某种程度的抑制作用[25]。因此，CTLA-4在Tr细胞功能中的作用还需进一步研究。LAG-3是CD4相关的蛋白，在调节性T细胞上高表达。LAG-3与APCs上的MHC II类分子结合，从而减弱活化的效应性T细胞的功能。因此，APCs或DC在抑制效应性T细胞功能上发挥重要作用[26]。CD4+CD25+Tr细胞所表达的膜型TGF-&也可能是其介导免疫抑制功能的重要分子之一，这不同于Tr细胞产生的分泌型TGF-&。TGF-&隐性相关肽(LAP)在活化的调节性T细胞表面表达并发挥抑制分子的作用。LAP的表达需要GARP，他们在调节性T细胞表面相互结合。GARP作为LAP的转运子，把LAP带到免疫应答的部位，释放TGF-&。CD28分子也是参与接触抑制作用的分子之一，例如，加入抗CD28抗体不仅能明显加强CD4+CD25-T细胞的反应，还可几乎完全消除CD4+CD25+Tr细胞的抑制作用。此外，GITR(glucoconicoid-inducedTNFR)也参与接触抑制机制。GITR是TNF受体超家族成员之一，抗GITR单抗能阻断CD4+CD25+Tr细胞的抑制功能。
　　3.2 细胞因子的调节作用
　　Tr细胞分泌的两个重要的细胞因子为IL-10和TGF-&。其中以IL-10对效应性T细胞的抑制作用占主导，通过IL-10对效应性T细胞的抑制作用强于通过TGF-&。IL-10是CTL分化因子及B细胞活化因子，在天然免疫过程中是重要的负调节因子。它抑制巨噬细胞分泌TNF、IL-1、IL-6和趋化因子，抑制巨噬细胞对T细胞的辅助作用。IL-10基因敲除的小鼠易发生炎症性损伤，其原因之一可能在于巨噬细胞的激活失去了控制。IL-10可直接抑制IL-2的产生。CD25分子即为IL-2R&链，CD25+T细胞介导抑制作用的机制之一就是被动地吸收由效应细胞产生的IL-2。有高浓度的IL-2存在时，Tr细胞可出现明显的经TCR介导的增殖反应。当其不依赖于TCR的刺激因素刺激时，Tr细胞的反应水平正常。IL-l0还具有抑制前炎症细胞因子的产生，抑制抗原特异性T细胞的激活，抑制单核细胞表达MHC-1I类抗原和辅助刺激分子，抑制单核细胞和巨噬细胞产生NO等功能。给予外源性IL-l0能够使双阴性Tr细胞对凋亡易感，并且使它们失去抑制功能。TGF-&在免疫调节与耐受中的重要性已经逐步被认识。TGF-&的作用主要有以下几方面：(1) TGF-&能够抑制包括T细胞、B细胞、巨噬细胞等在内的多种细胞，并且TGF-&产生量的增加与阻止自身免疫病的发展及自身免疫病的恢复有关;(2)TGF-&能与CTLA-4协同作用终止免疫反应;(3)Th0、Th1及Th2细胞亚群在与CTLA-4交叉连接的情况下都能分泌TGF-&;(4)Tr细胞分泌的TGF-&不仅能对效应细胞发挥抑制作用，也能对记忆性T细胞发挥抑制作用;(5)TGF-&可与其他抑制性分子一起作用，在免疫特赦部位维持一种稳定状态，在其他器官稳定状态的维持中可能也有重要作用;(6)TGF-&下调黏附分子，并且抑制白细胞向内皮细胞的黏附;(7)TGF-&还有一个明显的作用就是直接抑制IFN的产生。用TGF-&处理过的CD4+T细胞在葡萄球菌肠毒素(SEB)的刺激下，产生IFN的数量较之没有用TGF-&处理过的CD4+T细胞明显减少。此外，在实验中为了增加抗体的产生，需要在培养开始时加入抗TGF-&抗体，这表明TGF-&是调节早期T细胞的活性而不是B细胞的分化。大量Tr细胞产生的高水平的TGF-&能够抑制IgG的产生，少量Tr细胞产生的低水平的TGF-&只能在短距离以细胞接触的方式发挥抑制作用。另外，有研究表明IL-35(属于IL-12家族)主要由调节性T细胞产生。IL-35缺乏的调节性T细胞的抑制功能下降[27]。表达IL-2高亲和力受体&链的调节性T细胞可以和效应性T细胞产生的IL-2结合。细胞因子缺乏诱导的凋亡在调节性T细胞抑制免疫应答中也发挥重要作用[28]。高浓度的IL-2和IL-15可以完全消除调节性T细胞的免疫抑制作用，而IL-4和IL-7的结果不同。综上所述，CD4+调节性T细胞在正常人体稳态的维持，在肿瘤、器官移植、自身免疫性疾病及病毒感染等病理状态下都起着重要作用。因此，进一步深入研究CD4+调节性T细胞有重要意义，随着对Tr研究的深入，Tr也许会为人类疾病的治疗提供新的靶点。
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日期：日 - 来自[]栏目在艾滋这个狡猾的对手面前，人类曾屡战屡败。然而，刚刚过去的一年里，医学界不断突破，不再讳言“治愈”两个字了。无论对于存活了30年的感染者约瑟夫，还是中国最早被发现感染艾滋的孟林，这一天即将来到。
记者_&&美国舞蹈演员马修?夏普一度以为自己的生命走到了尽头，他在1990年代初期感染了HIV病毒和肺结核――其男友乔尼?弗兰克林正是在1990年死于艾滋病。夏普随后离开了舞蹈团，带着弗兰克林留给他的保险金搬到了旧金山。
在接下来的20年里,夏普持续不断参加新药的临床试验,因此他能在这些新药问世之前就得到治疗。“我一直在和这些狡猾的病毒斗争，当我开始出现HIV消瘦综合征时，我参加了一个生长荷尔蒙的研究项目，得到了胸腺移植手术。通过这些联合治疗，2008年我终于把病毒载量控制在极低的水平。”
但隐忧仍在，夏普的免疫细胞CD4徘徊在每毫升血液250个，而健康人的CD4细胞应该是每毫升血500至1500个。CD4细胞是一种极为重要的免疫细胞，也是HIV攻击的重要对象，它能协调人体抵抗细菌、病毒的攻击。CD4一旦低于200，免疫系统就会遭到致命的打击，一些在常人看来无足轻重的疾病和细菌都可能致命。
幸运的是，夏普被邀请参加一项基因疗法的试验。他先要被抽血，研究人员筛出血液中的CD4细胞，然后用基因疗法修改这些CD4细胞，以抵御HIV的入侵。艾滋病毒想要进入人体，必须通过CD4细胞表面上的某种蛋白质作为辅助受体，才能入侵免疫细胞，因此只需要删除CD4细胞表面的接收器就能阻止HIV。
这些被修改过的CD4细胞于2010年9月被重新注入夏普体内，几个星期后，研究人员发现夏普的CD4细胞在成倍地增长。“自从接受了基因疗法之后，我再也没有被肺结核困扰，我的CD4细胞也一直保持在400以上，”夏普说，“我已经&&55岁了，却感觉一天比一天好，我应该能等到艾滋病被彻底治愈的那天。”
隐匿的病毒库
治愈艾滋？彻底摧毁这个影响了330万成年人和25万孩子的病毒？在过去的30年里，科学家发现HIV病毒是导致艾滋病的元凶，看起来HIV病毒简直是无法战胜的――它藏匿在能杀死它的免疫细胞内；可以迅速变异；神秘而持续地分布在肠道、肾脏、肝脏、大脑中；迄今为止，任何一种疫苗都拿它没辙；停止服药后，它又能卷土重来。HIV病毒的发现者之一杰?利维将它比作“生物界的特洛伊木马”。30年来，甚至没有人敢谈起“治愈”二字。
上一个激动人心的突破出现在1996年――美国洛克菲勒大学艾伦?戴蒙德艾滋病研究中心的何大一博士发明了鸡尾酒疗法。
鸡尾酒疗法，当然不是指喝几杯鸡尾酒就能杀死这种狡猾又顽强的病毒，它又名“高效抗逆转录病毒治疗”（HAART），通过三种或三种以上的抗病毒药物联合使用，最大限度地抑制病毒的复制。
一夜之间，它使世纪绝症艾滋病变成了像高血压、糖尿病一样的慢性病，“它不能被治愈，但只要长期服药，病人可以长期生存下去，”北京协和医院感染内科副主任李太生教授说，“美国科学家2008年利用数学模型计算出，艾滋病人治疗后的平均寿命只比正常人少5-8年。”
根据何大一博士的测算，以当时药物抑制病毒的水平，大概4-5年之后艾滋病病毒就能被完全清除，也就是说艾滋病能被治愈。
15年过去了，艾滋病毒仍然在为害人间，药物能压制人体内的艾滋病毒，却无法完全清除它。
何大一漏算了一样东西――艾滋病有一个储存库。
对于艾滋这种狡猾的病毒，当强力的抗病毒药物进入体内后，99.99%的病毒碰到了克星，束手就擒。但仍然有千分之一的病毒不会被杀死，它们躲进那些正在休眠状态的细胞里，进入潜伏期，不活动，不复制，形成规模不大威力巨大的病毒储存库。
不妙的是，病毒储存库不止一个。最开始，科学家们认为储存库只存在于静止的CD4细胞内,&&但近年来研究发现,树突状细胞和巨噬细胞都可以作为病毒的潜伏储存库。
抗病毒药物固然很有用，但它却无法攻击进入休眠状态的病毒储存库。病人一旦停止使用药物，这些病毒即重新“苏醒”，进入疯狂的复制状态。
翻开各类医学杂志，你会发现，病毒库清除策略是艾滋病治疗领域最热门的话题，病毒储存库一旦被清除，那就意味着艾滋病被治愈。
考虑到目前的抗病毒药物确实能完全阻止艾滋病病毒复制，那么彻底消灭病毒就只需要找出病毒库的位置，激活静止的细胞，把钻入这些细胞里休眠的艾滋病毒“冲刷”到血液中，使其进入活动状态，现有的药物就可以发挥作用。
最初的病毒唤醒策略不那么乐观。上世纪90年代，研究人员希望利用炎症抗体唤醒HIV病毒藏身的静止的CD4细胞，但这些抗体非但没有唤醒CD4细胞，反而杀死了这些对付HIV病毒的最强大的武器。
美国北卡罗莱纳大学的临床医生大卫?马格利斯博士2005年&&在《柳叶刀》杂志上发表文章，一种常见的抗癫痫药丙戊酸可以“唤醒”休眠状态的病毒，而病毒激活后就可以采用常规的鸡尾酒疗法将其杀死。在参与这项实验的4名艾滋病感染者中，有3人体内潜伏的艾滋病毒减少了75%。
但问题在于，大卫?马格利斯博士的研究只能激活潜伏在血液中静止的免疫T细胞中的病毒库，而病毒库无处不在――淋巴结、肠道、大脑、骨髓、肝脏，甚至是眼泪。
丙戊酸并不是理想的药物，在马格利斯博士的一半病例中，丙戊酸能减少潜伏的病毒库数量，不会伤害免疫系统。但随着时间的推移，这种作用在减弱。
在已经发表的研究中，还没有一种方法能够将HIV所有的病毒库都激活，而且，还有另一重风险――除了HIV病毒，其他种类的休眠病毒也会被激活。
“我们希望找到一种能激活HIV病毒，但不会唤醒其他病毒，也不会伤害免疫细胞的方法，这可不是件容易完成的任务。”美国加州大学旧金山分校的病毒学家沃纳?格林说。
干细胞与基因疗法
在医学界绞尽脑汁寻找清除病毒库的方法的同时，一个艾滋病治疗的新希望又出现了――基因疗法。随着基因疗法的日趋成熟，医学界展开了一轮对HIV病毒的反击。
2011年6月，蒂莫西?雷?布朗，一个被艾滋病和白血病纠缠了长达10年的病人，在接受骨髓移植后，艾滋病被治愈了。
这是医学界第一次使用“治愈”这个词，但这只是一个极其罕见的巧合，布朗接受了一位具有CCR5―32型基因的人的骨髓捐献。
艾滋病毒想要进入人体，必须通过免疫细胞上的CCR5或CXCR4蛋白作为辅助受体，才能入侵免疫细胞。欧洲有1%的人天生具有CCR5蛋白免疫的基因，即CCR5―32型基因。有了这种基因之后，就会对受体是CCR5蛋白的艾滋毒株产生免疫，而布朗感染的恰恰CCR5蛋白作为受体的艾滋毒株。
为了治疗白血病，布朗体内的CD4细胞经过化疗和放射治疗被全部杀死之后，他接受了这种天生对HIV免疫的造血干细胞移植，几个月之后，布朗的的免疫细胞就被这种天生对HIV免疫的细胞所取代。
三年后，布朗回到旧金山接受检查，在他的血液、淋巴细胞、肠道和大脑内都没有发现HIV病毒――这时他已经停止了鸡尾酒疗法。
遗憾的是，这个巧合几乎不具备可复制性，先不考虑骨髓移植可能带来的巨大的风险，要在这1%的天生携带CCR5―32型基因的人中找到合适的骨髓，已经是天方夜谭。
受到布朗的启发，科学家开始思考是否能通过基因治疗改变病人自己的免疫细胞，破坏病人自身干细胞中的CCR5基因，把它们塑造成那种天生有对HIV病毒免疫的细胞。这样既不需要寻找合适的、蛋白几乎不存在的骨髓捐献者，也不用面对骨髓移植后的免疫排斥问题。
为了破坏CCR5蛋白，加拿大一家生物技术公司开发了一种“基因剪刀”――锌指核酸酶，这个手指形状的酶能帮研究人员随意“剪断”任何一个他们希望剪断的基因，这当然也包括HIV病毒的受体CCR5基因。
被修改过的细胞通过复制，数量成百倍地增加，创造出一个抵御HIV病毒的细胞库，然后重新注入病人体内，它们不会被免疫系统所排斥，要比骨髓移植安全多了。
第一个人类临床试验始于2009年，美国旧金山Quest临床研究中心的杰?拉里查瑞博士，招募了9名男性患者，马修?夏普正是其中之一。他们感染了HIV病毒超过20年，持续地使用鸡尾酒疗法，但CD4的浓度水平仍然很低。
研究人员成功去除了病人的CD4细胞中的CCR5基因，这些被改造过的CD4细胞重新被注入到病人体后，6个坚持到最后的病人中，有五位病人的CD4细胞有了非常显著的增长，平均多了200个。
尽管拉里查瑞的研究不像布朗接受骨髓移植那样，完全替换掉原有免疫细胞，拉里查瑞只是为病人注入一部分被修改过基因的免疫细胞，但临床上可行，而且风险更小。
2009年，宾夕法尼亚大学的一项类似的小型研究也有所进展。6个参与试验的病人暂停服用抗病毒药物，在注入了被修改过基因的免疫细胞之后，研究人员密切监视病人体内病毒含量的变化。遗憾的是，只有2个病人完成这项试验，其中一名病人在停止服用抗病毒药物12个星期之后，体内的HIV病毒并没有卷土重来，仍然处于探测不到的水平。
看起来更有前景的方式是，提取艾滋病人的干细胞，进行基因修改，如果这些细胞变得能抵抗HIV病毒，那么由它们衍生而来的新的免疫系统也一定能摧毁HIV病毒。
美国南加州大学的保拉?坎农正在进行一项耗资1450万美元的实验，保拉把小鼠分为两组，一组移植人类原始的干细胞，另一组的老鼠的体内被植入修改过的干细胞，然后在两组小鼠的体内注入艾滋病毒。12周过后，使用基因疗法的那一组小鼠，体内病毒数量大大下降，病毒虽然没有被完全清除，但在这个低浓度水平下，小鼠可以免于疾病带来的痛苦。如果美国药监局（FDA）允许，保拉计划在人体上试验基因疗法。目前看来，一切进展顺利。
理想的基因疗法应该是这样的：抽取病人体内的部分干细胞，进行基因修改的同时，给艾滋病人进行一些温和的化学疗法，摧毁他体内剩余的对HIV毫无抵抗力的干细胞。然后再让这些被修改过的干细胞回到病人的身体里。随着干细胞的增殖，迅速建立一个能抵御HIV病毒的免疫系统。
精英艾滋病人
在基因疗法普及之前，数以百万计的艾滋病人还要依赖于鸡尾酒疗法。但是，科学家惊奇地发现，在人群中，还存在着这么一群幸运儿，他们感染了HIV病毒,&&但强悍的免疫系统能把HIV病毒抑制在极低的水平上。他们可能终身都携带病毒，却不用采取任何疗法，也不会发病――这些人被称为精英艾滋病人。
精英艾滋病人并不多，在300个HIV病毒感染者中只有一个精英艾滋病人。布朗和那些天生CCR5基因缺失的人能打败HIV病毒，是因为HIV病毒根本无法进入他们的细胞内部。而精英艾滋病人则能直接打击HIV病毒，让其走投无路。
1992年，38岁的园林设计师洛伦?&&维伦伯格被诊断感染了HIV病毒，但奇怪的是，她的免疫细胞CD4的含量竟然出奇地高达1800。医生告诉她，“洛伦，你很特别，NIH（美国国立卫生研究院）正在研究一组像你一样的案例，你们感染了HIV病毒，但却不会发病。”20年过去了，她还很健康，有超高的CD4细胞的数量和极低的病毒载量。
最开始，科学家们推测像洛伦一样的病人感染了一种较弱的HIV病毒。事实证明这种推测错了，约翰霍普金斯大学的研究发现，一对已婚夫妇感染了相同的HIV病毒毒株，丈夫需要终身服用抗病毒药物，而妻子什么都不用做，仍然很健康。
随着近年来生物化学领域的发展，科学家开始发现精英艾滋病人的秘诀――拥有特殊的人类白细胞抗原类型――人类白细胞抗原B57基因（HLA-B57）。
麻省理工的阿鲁?查克拉博蒂教授和哈佛的布鲁斯?沃克尔率领的研究团队发现，HLA-B57基因可以促使人体分泌更多的免疫T细胞，而且这些免疫细胞更容易识别表达HIV蛋白的细胞――普通人的免疫细胞可做不到。
拥有HLA-B57基因的免疫T细胞，即使只发现了一处HIV病毒，它也会迅速被激活并复制，形成一股大军，攻击体内含有同一种蛋白的细胞，从而扫除大部分HIV病毒。即便狡猾的HIV病毒变异求生，他们一样可以识别并攻击已经变异的HIV病毒，因此拥有了这种特殊的基因，就能把HIV病毒压在五指山下。
研究人员希望利用HLA-B57基因开发新的疫苗，使那些天生没有HLA-B57基因的人也能产生这种特殊的强力免疫T细胞，从而对HIV病毒免疫。“人们也不是完全没有这些强力T细胞，”查克拉博蒂说，“只是数量非常少，我们希望疫苗能引导它们大量繁衍。”
存活30年的感染者
美国人约瑟夫?迈纳?希尔感染艾滋病的历史和人类发现艾滋病的历史一样长――30年。
14岁那年，约瑟夫在纽约街头的验血点得知自己成为了一名艾滋病毒携带者，但他不愿面对这个现实，一直拒绝治疗和药物。2004年，约瑟夫开始不适，他的CD4已经下降到4。于是约瑟夫参加了一个芬威医学中心的研究项目，免费领取药物。后来，他一直规律地服用各种抗病毒药物。
在2011年9月的例行检测中，约瑟夫的CD4指数达到了694，血液中的艾滋病毒载量及其低，已经检测不出。&&（致谢：上海交大附属第一人民医院的许琳博士）日期：日 - 来自[]栏目
探讨过敏性紫癜（HSP）病儿急性期免疫细胞功能变化及其意义。方法
以53例HSP急性期病儿为研究对象，并根据有无尿检异常分为肾炎（HSPN）组和非肾炎（NHSPN）组，以30例正常儿童作为对照组。采用流式细胞术检测3组外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值、CD4+CD25+细胞、NK细胞（CD16+CD56+）和B淋巴细胞（CD19+）水平。结果
HSPN组和NHSPN组外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值、CD4+CD25+ 细胞和NK细胞水平较对照组显著降低，CD8+细胞和B淋巴细胞水平较对照组显著增高(F=6.80～46.40，q=2.81～4.25,P0.05)。HSP病儿CD4+CD25+细胞水平与CD4+细胞、CD4+/CD8+比值呈正相关(r=0.369、0.285,P<0.01、0.05)，与CD19+细胞呈负相关(r=-0.279,P0.05)。结论
HSP病儿急性期存在免疫细胞功能异常，T细胞亚群紊乱，CD4+CD25+T细胞和NK细胞数量降低，导致B细胞呈多克隆活化，在HSP发病机制中具有重要作用。
【关键词】& 紫癜,过敏性　儿童　免疫,细胞　流式细胞术
　　FUNCTIONAL CHANGES OF IMMUNE CELLS IN CHILDREN WITH HENOCHSCHONLEIN PURPURA IN ACUTE STAGEBAI CUI,
　　ZONG JINBAO, ZHANG QIUYE
　　 (Department of& Pediatrics, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China);
　　［ABSTRACT］ Objective To investigate the functional changes of immune cells in children with HenochSchonlein Purpura（HSP） in acute stage and their significance. Methods Fiftythree children with HSP were involved in this study, who were divided into HenochSchonleinPurpuranephritis (HSPN) group and nonHSPN (NHSPN) based on whether the urine analysis was normal or not. Thirty healthy children were served as control. Flow cytometry was applied to detect the amounts of CD3+ cells, CD4+ cells and CD8+ cells, CD4+ /CD8+ ratio, and the levels of CD4+CD25+ cells, NK cells (CD16+CD56+) and B cells (CD19+) in peripheral blood.& Results The amounts of CD3+ cells, CD4+ cells, CD4+CD25+ cells, NK cells and the ratio of CD4+/CD8+ in the HSP and NHSPN children were significantly lower than those in the control children, while CD8+ cells and B cells were significantly higher (F=6.80-46.40;q=2.81-4.25;P0.05). The amount of CD4+CD25+ cells of the HSP was positively correlated with that of CD4+ cells and CD4+/CD8+ ratio (r=0.369,P<0.01;r=0.285,P<0.05), and negatively correlated with tthat of CD19+ cells (r=-0.279,P0.05).Conclusion Children with HSP in acute stage have a disordered cellmediated immunity, which mainly manifests as derangement of Tcell subsets, decrease of& CD4+CD25+ T cells and NK cells, resulting in polyclonal Bcell activities, which plays an important role in the pathogenesis of this condition.
　　［KEY WORDS］ purpura, SchoenleinH immunity, flow cytometry
　　过敏性紫癜(HSP)是儿童时期常见的血管炎性疾病，以广泛的小血管炎症为病理基础，肾脏损害是其常见表现和并发症，其病因和发病机制尚未完全明确。近年来的研究结果表明，HSP病儿存在免疫调节功能紊乱[1]。本文采用流式细胞术(FCM)检测HSP急性期病儿外周血T淋巴细胞及亚群（包括CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+CD25+细胞)、B淋巴细胞(CD19+)和NK细胞（自然杀伤细胞，CD16+CD56+）水平变化，进一步探讨HSP发病机制。现将结果报告如下。
　　1& 资料与方法
　　1.1& 一般资料
　　1.1.1& HSP组&
　　选取2008年1月&2009年4月在我院儿内科住院的HSP急性期病儿53例，男31例，女22例，年龄2～12岁，平均8.65岁，均符合《诸福棠实用儿科学》HSP的诊断标准。依据有无尿检异常[血尿和（或）蛋白尿]将HSP组病儿分为肾炎（HSPN）组和非肾炎（NHSPN）组。肾炎组18例，男10例，女8例，年龄3～12岁，平均7.33岁；非肾炎组35例，男21例，女14例，年龄2～12岁，平均9.97岁。采血前均未接受糖皮质激素或免疫调节剂治疗。
　　1.1.2& 对照组&
　　选取同期我院儿童保健门诊健康体检儿童30例，男16例，女14例，年龄1～12岁，平均8.30岁，均无近期感染及个人或家庭过敏史、系统性疾病史。
　　1.2& 检测方法
　　采用直接免疫荧光标记全血溶血方法，在流式细胞仪(美国Coulter公司)上测定外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+、CD19+、CD16+CD56+细胞数，并计算CD4+/CD8+比值。取肝素抗凝外周血100 &L, 分别加CD3FITC/CD16+56PEz、CD4FITC/CD8PE、CD3FITC/CD19PE、CD4FITC/CD25PE及FITC/PE Mouse IgG1双标记荧光抗体20 &L(抗体均购于法国Immunotech公司),混匀，室温避光孵育20 min，然后加入红细胞裂解液1 mL，混匀，室温避光孵育20 min，用PBS洗涤2次后上机检测。
　　1.3& 统计学处理
　　应用SPSS 17.0及PPMS 1.5[2]统计软件进行统计处理。实验数据呈正态分布，以&s表示。各组间比较采用单因素方差分析及q检验，两变量间相关分析采用直线相关分析法。
　　2& 结果
　　2.1& HSP病儿急性期外周血淋巴细胞及其亚群水平变化
　　HSPN组和NHSPN组病儿外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值、CD4+CD25+ 细胞、CD16+CD56+细胞水平较对照组显著降低，CD8+细胞、CD19+细胞水平较对照组显著增高(F=6.80～46.40，q=2.81～4.25,P0.05)。见表1。表1& 各组外周血淋巴细胞及其亚群检测结果比较(略)
　　2.2& HSP病儿CD4+CD25+细胞计数与其他淋巴细胞水平变化的相关性
　　HSP病儿CD4+CD25+细胞水平与CD4+细胞、CD4+/CD8+比值呈正相关(r=0.369、0.285,P<0.01、0.05)，与CD19+细胞水平呈负相关(r=-0.279,P0.05)。
　　3& 讨论
　　HSP是一种主要累及毛细血管的变态反应性疾病，以非血小板减少性紫癜、关节炎或关节痛、腹痛、胃肠道出血及肾炎为主要临床表现，其中肾损害的严重程度直接影响到该病的预后。其发病机制尚不完全清楚。多数研究表明，HSP与免疫调节功能紊乱有关。在免疫应答过程中，CD4与CD8淋巴细胞起着十分重要的调节作用。在正常情况下，CD4和CD8相互诱导，相互制约形成T细胞网络，从而调节正常免疫功能和维持免疫的自稳性。本文结果显示，HSPN组和NHSPN组急性期病儿CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值显著降低，CD8+细胞明显升高，与WIERCINSKI等[3]报道结果相符，表明HSP病儿存在细胞免疫功能失调，主要表现为辅助T淋巴细胞(CD4+)数量降低，效应T淋巴细胞(CD8+)数量增高，CD4+/CD8+比值下降。但有研究指出，HSP病儿急性期T细胞亚群变化与HSP是否并发早发性肾损害无明显相关性[4]。本文结果亦显示，HSP病儿急性期B淋巴细胞（CD19+）显著升高，而NK细胞（CD16+CD56+）显著下降。CD19是成熟B淋巴细胞特异性标志，CD19显著升高，说明B淋巴细胞活化增殖增多，体液免疫反应增强。有研究指出，病毒或细菌感染和动物性食物蛋白过敏是HSP最主要诱因[5]，在抗原物质刺激下可使B细胞数量增加。B细胞增殖与Th2细胞功能亢进有关，研究发现HSP病儿Th2类细胞因子如IL4和IL6显著增高，Thl类细胞因子如IL2水平降低[67]。结合本实验结果，考虑B细胞增高与T细胞亚群紊乱及其分泌的细胞因子异常有关。CD16+CD56+是鉴别NK细胞的特征性标志。NK细胞是一类重要的免疫调节细胞，对T细胞、B细胞等均有调节作用。本研究结果与有关文献报道一致[8]。NK细胞的降低对B淋巴细胞增长分化的抑制力减弱，导致B淋巴细胞数量及活性升高，分泌免疫球蛋白增加，参与免疫复合物形成而引起毛细血管壁的损伤[9]。本文结果显示，HSPN组与NHSPN组相比较外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值、CD4+CD25+细胞、NK细胞和B淋巴细胞水平差异均无显著性，提示HSP急性期有无肾脏损害病儿间外周血淋巴细胞数量变化并无差异。齐鲁医学杂志2010年4月第25卷第２期& Med J Qilu, April 2010, Vol.25, No.２
　　调节性T淋巴细胞（Tregs）是T淋巴细胞的重要亚群，依据其产生部位和生成方式分为自然产生的Tregs和适应性Tregs，CD4+CD25+T细胞即自然产生的Tregs，是机体内Tregs的主要类型,占人外周血CD4+T细胞总数的5%～10%。CD4+CD25+ Tregs具有免疫无能和免疫抑制两大功能特征，主要通过细胞接触机制抑制CD4+细胞、CD8+细胞的免疫反应[10]。越来越多的证据表明，CD4+CD25+ Tregs在抑制自身反应T细胞的活化和增殖方面起着不可或缺的作用。去除CD4+CD25+ Tregs的动物会出现各种自身免疫病如甲状腺炎、胃炎、结肠炎和1型糖尿病，而重新被动输注正常的CD4+CD25+ Tregs可预防这些疾病的发生[11]。此外，CD4+CD25+ Tregs对肿瘤免疫、微生物免疫、抑制变态反应以及骨髓移植排异反应均有重要的调控作用。本研究结果显示，HSP病儿急性期CD4+CD25+细胞显著下降，与有关文献报道一致[1213]。HSP病儿CD4+CD25+细胞与CD4+细胞、CD4+/CD8+比值呈正相关，而与CD19+细胞呈负相关，提示CD4+CD25+ Tregs异常在HSP的发病机制中具有重要的意义。其机制可能涉及以下几个方面。①CD4+CD25+ Tregs表面表达的CD25、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA4)、膜性TGF&等与效应T细胞接触后,抑制T细胞生长因子IL2的基因表达,抑制抗原特异性CD4+及CD8+T细胞增生,或使其转变为无能或反应低下的T细胞,使机体产生免疫耐受[1415]。当该类细胞减少或功能降低时,免疫耐受平衡破坏,机体接受抗原刺激后,发生变态反应,产生免疫复合物沉积, 则可能引起HSP。②CD4+CD25+ Tregs使专职抗原提呈细胞(APC)表面的协同刺激分子减少,抗原提呈功能减弱,不能有效激发特异或非特异性免疫应答[16]。当CD4+CD25+ Tregs减少或功能降低时,APC抗原提呈功能增强,使机体对变应原发生超敏反应。③CD4+CD25+ Tregs可产生较多抑制性细胞因子IL10, IL10在体内外能调节抗原特异性B细胞,调节抗体类别转换,抑制变态反应。当该细胞数量或功能降低时, IL10减少,则可能发生变态反应性疾病。
　　综上所述，HSP病儿急性期存在免疫细胞功能异常，主要表现为T细胞亚群紊乱（CD4+/CD8+比值降低）、CD4+CD25+T细胞和NK细胞数量降低，导致B细胞呈多克隆活化，在HSP发病机制中具有重要作用，提示免疫调节疗法在HSP治疗中有重要价值。
【参考文献】
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目的 对37例儿童川崎病(KD)的T细胞亚群进行分析总结，旨在提高对本病的免疫情况的认识。方法 回顾分析我院37例川崎病的T细胞功能状态。结果 川崎病急性期存在T淋巴细胞调控网络失衡。CD4细胞数目增多，CD8细胞数目减少，CD4/CD8比值明显增高，提示机体免疫系统处于活化状态。结论 T细胞异常活化是KD患儿免疫系统激活导致血管炎性损伤的始动环节和关键步骤，积极检测KD患儿急性期T细胞亚群的变化，对了解KD患儿免疫情况具有一定价值。
【关键词】& 川崎病;小儿;T细胞亚群
川崎病(KD)是以全身血管炎为主要病变的急性热性出疹性疾病，其临床特征表现为发热、双侧非渗出性结膜炎、唇和口腔黏膜发红、四肢末端改变、皮疹和颈部淋巴结病变。未经治疗者大约15%~25%发生冠状动脉瘤或冠状动脉扩张，甚至可引起缺血性心脏病或猝死[1]，已成为儿童后天性心脏病的主要原因，但其病因、发病机制尚不明确。从流行病学推测与病原体感染或毒素超抗原引起的免疫学异常有关[2]，认为超抗原有强大的激活T细胞的功能，能通过T细胞介导血管炎性反应[3]。我院测定了37例急性期KD患儿外周血中CD4、CD8、CD4/CD8、CD3细胞的水平变化，以观察急性期KD患儿T细胞功能状态。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料 2005年4月至2009年6月在我院儿科住院的KD患儿共37例作为观察组，男23例，占62.2%，女14例，占37.8%。年龄3个月~10岁，其中1岁以下17例，占45.9%，1~3岁9例，占24.3%，3~6岁5例，占13.5%，6岁以上6例，占16.3%。患儿均为体温38.5℃以上，病程7天内的急性发热期。诊断标准依照第7版儿科学进行[4]，同时符合日本MCLS研究会标准。
　　另同一时期体检健康儿童35例作为对照组，男19例，占54.3%，女16例，占45.7%。年龄4个月~14岁，其中1岁以下15例，占43.9%，1~3岁8例，占22.8%，3~6岁6例，占17.1%，6岁以上6例，占17.1%。
　　1.2 检测方法 于病程第一周用美国BD公司的FACS Calibur流式细胞检测仪测定。
　　1.3 统计学处理 检测数据以均数&标准差(x&s)表示，两样本比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有显著统计学意义。
　　2 结果
　　KD患儿急性期与正常对照组T细胞亚群比较见表1。表1 KD患儿急性期与正常对照组T细胞亚群比较
　　3 讨论
　　KD的发病机制尚未完全清楚，近年研究表明本病在急性期存在明显的系统性免疫激活，与感染介导的免疫系统高度活化密切相关。本研究结果显示KD组病程1周CD4百分率显著增高(P<0.05)、CD3、CD8百分率显著下降(P<0.05)、CD4/CD8较正常组增高，差异有显著统计学意义(P<0.01)，与国内外文献报道基本一致[5]，提示KD患儿急性期细胞免疫功能紊乱。
　　血液中的T细胞是机体免疫系统的重要组成部分，按其功能和表面标志可分为4个主要亚群，即诱导-辅助性T细胞(Ti/Th)、杀伤性T细胞(Tc)、抑制性T细胞(Ts)及迟发型超敏反应T细胞。CD3是所有T细胞表面的共同标志，CD4是Ti/Th的表面标志，CD8代表Ts，CD3存在于Ts/Th细胞表面，CD4/CD8 比值反映Th与Ts之间的功能平衡状况，T淋巴细胞调控网络失衡与疾病的发生发展有关。当CD4或CD8细胞的数量或功能异常时，T淋巴细胞调节就失去平衡而导致机体发病。
　　KD急性期存在T淋巴细胞调控网络失衡。CD4细胞数目增多，CD8细胞数目减少，CD4/CD8比值明显增高，提示机体免疫系统处于活化状态。T细胞和单核细胞的异常活化及多克隆激活的B细胞释放大量细胞因子和炎性介质，既可直接损伤血管内皮，又可诱导内皮细胞产生新抗原或血管内皮损伤致主要组织相容性复合物抗原暴露，激活B细胞产生抗体，损伤内皮，可见T细胞异常活化是KD患儿免疫系统激活导致血管炎性损伤的始动环节和关键步骤。
　　因此积极检测KD患儿急性期T细胞亚群的变化，对了解KD患儿免疫情况，为免疫调节剂的治疗提供一定的理论依据。
【参考文献】
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中医药治疗可减缓无症状期CD4下降速度，中西医结合治疗可增加CD4细胞数本报讯 （记者陈斐然）12月1日是第23个世界艾滋病日，中国中医科学院中医药防治艾滋病研究中心常务副主任、科技部中医治疗艾滋病课题组负责人王健表示，中医药有减缓无症状期CD4免疫功能下降的作用，中西药合用对艾滋病期CD4有稳定或逐渐上升的作用。中医药可阶段性地提高和稳定艾滋病患者的免疫功能，改善症状体征，提高生存质量。王健介绍，截至2010年10月，中医药治疗艾滋病试点项目累计治疗14244例，其中正在接受治疗9561例。针对其中8946例临床总结发现，经过48个月的中医药治疗，无症状期感染者CD4免疫细胞计数下降幅度减慢，中位数降幅为49个/mm3，平均每年下降约12个/mm3；艾滋病期患者，其CD4计数上升，中位数增幅为59个/mm3。此结果表明，中医药治疗可减缓无症状期CD4下降速度，中西医结合治疗可增加CD4细胞数，但对病情进展的影响还需进一步观察。针对目前中医药参与艾滋病防治工作的情况，王健介绍说，首先，中医药对艾滋病的参与度大大提高，中医药治疗艾滋病的范围从2004年的5个省扩大到今年的19个省（区、市）。社会各界对中医药参与防治艾滋病工作的认可度也在不断提高。其次，已明确找到中医药防治艾滋病的切入点，今后将更有针对性地开展治疗、研究工作。最后，目前参与中医药防治艾滋病研究工作的机构和科研人才队伍不断壮大，强强联合，逐步完善评价标准体系，科研水平逐步提高。
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探讨宫颈上皮内瘤变（CIN）不同级别的患者外周血T淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+细胞数量的变化及与临床意义。
采用流式细胞术分析128名CINⅠ～Ⅲ级的患者与30例正常人静脉血CD4+、CD8+、以及CD4+/CD8+比值以及之间相关性,并对36例CIN治疗后随访。
CINⅠ组与正常组之间CD8值(P>0.05) 无显著差别；CINⅠ、CINⅡ与正常组CD4，CINⅠ与CINⅡ，CINⅡ与CINⅢ的CD8差别有显著性（P<0.05）；其他组之间都有高度显著的差异（P<0. 01）。且随CD4数量减低CD8相对增加，CD4/CD8减低；随访结果疗效显著的，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值都有明显增加，疗效差的CD4+，CD4+/CD8+比值较治疗前减少，预后不佳。
CD4+、CD8+细胞表达的数量随CIN患者病情变化而改变，对临床调节免疫力，提高疗效及预后的判断有重要的指导意义。
【关键词】& 宫颈上皮内瘤变； T淋巴细胞亚群；CD4+ CD8+； CD4+/CD8+比值
宫颈上皮内瘤变（CIN）为浸润癌的前驱病变，分为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ三级，即使是CINⅢ也不一定都发展成癌，CIN与HPV感染有关。近年许多报道表明，多种病毒感染人体后可造成CD4+ T淋巴细胞的减少，损害细胞免疫功能，导致各种感染和肿瘤的发生［1］。为了解HPV感染对机体的T淋巴细胞亚群分布的影响，本文采用流式细胞术分析了128例CIN患者的外周血CD4、CD8T淋巴细胞的表达情况，分析报告如下。
　　1& 材料与方法
　　1.1& 资料来源& 从2006年8月～2007年6月在我院妇科门诊经宫颈活检诊断为CIN患者128例（CIN诊断标准： CINⅠ异型性细胞局限在鳞状上皮细胞层的下1/3；CINⅡ异型性细胞占鳞状上皮细胞层的下2/3； CINⅢ异型性细胞几乎累及全部上皮细胞层［2］。），年龄在21～69岁之间，中位数年龄38.6岁。其中CINⅠ 58例，CINⅡ 47例，CINⅢ 23例。正常对照组30例，为健康体检的妇女，年龄在25～40岁之间，中位数年龄为35岁。
　　1.2& 试验方法& 采集静脉血2ml，EDTA钾盐抗凝，用美国BECRMAM-COULTER公司生产的EPICS-XI型流式细胞仪检测淋巴细胞中的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+标记百分率，使用Couter公司配套的SystemⅡ系统软件数据处理系统。
　　1.3& 治疗方法& CINⅠ行宫颈电灼术，CINⅡ以上患者行宫颈电环切除术（LEEP）。术后3个月随访，未发现宫颈病变为痊愈；CIN级别减轻的为好转；CIN级别不减轻的甚至加重的为无好转。
　　1.4& 统计学分析& 测定结果用x&s，统计学处理采用t检验。
　　2& 结果
　　2.1& CINⅠ～Ⅲ患者与正常对照者淋巴细胞亚群分布比较& CINⅠ组与正常组之间CD8+值(P>0.05) 无显著差别；CINⅠ与正常组CD4+，CINⅡ与正常组的CD8+差别有显著性（P<0.05），其他组之间CD4+、CD8+、CD4+/CD8+都有高度显著的差异（P<0. 01），见表1。
　　2.2& CIN患者之间的淋巴细胞亚群分布比较& CINⅠ与CINⅡ、CINⅡ与CINⅢ的CD8+差别有显著性（P<0.05）；其他组之间都有高度显著的差异（P<0.01），见表1。
　　2.3& 追踪在我院接受治疗的CINⅠ～Ⅲ患者36例，其中25例为痊愈； 8例为好转；3例CIN级别为无好转，有加重趋势。治疗前后淋巴细胞亚群分布有明显差异（P<0.05），见表2。
　　表1& 宫颈内瘤变患者T淋巴细胞亚群的检测结果（略）
　　注:各组与对照比较,P>0.05，P<0.05，其他P<0.01; CIN各组间比较,&D#P<0.05，其他P<0.01。
　　表2& 36例CIN治疗前后T淋巴细胞亚群的检测结果（略）
　　注:3组治疗前后比较,*P>0.05,&DP<0.01,其他P<0.05。
　　3& 讨论
　　研究表明本淋巴细胞亚群分布改变与CIN的不同发展阶段有着密切关系。在肿瘤发生前期淋巴细胞亚群也在悄然发生着变化，因此外周血CD4、CD8 T淋巴细胞的计数对评价CIN患者细胞免疫变化以及病变程度和预后有着极其重要的作用。
　　T细胞分CD4+和CD8+两种，参与细胞免疫和免疫调节并在机体抗肿瘤免疫中起重要作用，其中CD4作为辅助性T细胞能产生淋巴因子增强作CD8杀伤肿瘤的功能，具有辅助细胞免疫和体液免疫应答作用，CD8+为细胞毒性T细胞和抑制性T细胞，是重要的效应细胞，CD4+/CD8+比值可直接反应细胞免疫状态和两者之间相互平衡关系［3,5］。有报道表明［1,4］感染HIV后CD4+、CD4+/CD8+比值进行性下降，CD8+早期增加，晚期明显减少。从本研究结果看，宫颈癌及其前驱病变的主要病因是HPV感染，说明HPV感染T淋巴细胞后，也导致CD4+细胞破坏而减少， CD4+/CD8+比值相对减低，细胞免疫功能受抑，抗感染能力随之降低。在宫颈内瘤变早期CINⅠ，CD4+减少不明显，CD8+是控制感染的效应细胞，CD8+略有增加并通过细胞毒作用抑制HPV的感染，leep术治疗效果明显，约70%基本能痊愈。治疗效果好的病例CD4+增加、CD8+、CD4+/CD8+比值都有不同程度恢复或本身的T细胞亚群分布正常； CINⅡ、CINⅢ随病程加重，CD4+减少明显， CD8+数量变化不明显但病毒杀伤作用活性降低，CD4+/CD8+比值下降显著，治疗效果及预后不佳，效果差的患者的主要表现为治疗前后CD4+比值在23％～27％之间，CD4+/CD8+比值<1。说明随CIN级别增加CD4+分布减少宫颈恶变程度加重，CD4+/CD8+比值逐渐下降甚至倒置，免疫状态失衡，最终可导致癌变，需要选择进一步治疗方案以防病情恶化。
　　因此，研究表明在作好宫颈癌前普查的同时，要作好CIN患者的外周血T淋巴细胞亚群的检测，可根据患者病程情况选择合理治疗措施提高治愈率。
【参考文献】
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作者单位：深圳市宝安区西乡人民医院检验科，广东 深圳
黄石市中心医院检验科，湖北 黄石
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