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三种方法检测抗线粒体抗体Ⅱ型（AMA-M2）的比较及临床意义
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抗线粒体抗体Ⅱ型又简称为AMA-M2，是原发胆汁性肝硬化(primary biliary crrhosis ,PBC)的早期特异性诊断指标，其诊断PBC的敏感性和特异性分别超过90%和95%，为PBC最突出的免疫学异常指标，也是PBC最重要的诊断手段，因此，被列为PBC的诊断标准之一[1]。 PBC由Ahrens等，于1950年命名，是一种原因未明的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病，其病理特点为：肝内胆管非化脓性炎症，伴有胆管破坏、门脉周围炎症及肝实质碎屑状坏死，最终进展为肝硬化。PBC预后不良，激素和其它免疫抑制剂疗效不确定，熊去氧胆酸是唯一可以长期使用的有效治疗药物，早期应用可延缓肝硬化和改善高胆红素血症，至晚期则效果甚微，终末期PBC唯一有效的治疗是肝移植[2]。 因此，针对该病，最好的诊疗方案是早期诊断，早期治疗，及早给药，改善预后。抗线粒体抗体Ⅱ型作为PBC的早期特异性诊断指标，可在患者出现临床症状、生化指标和组织学特征变化之前几年甚至十几年即出现阳性，还有研究认为：AMA-M2抗体阳性者,即使无相应的临床症状和生化指标改变,也应考虑为PBC[3-5]，因此，近些年来，关于AMA-M2用在易感人群，如PBC患者直系亲属[6] 及健康人群体检中的研究越来越多，结果表明：AMA-M2的阳性检出率远远高于预期，约为0.36%-0.5%，这提示：PBC的潜在发病率可能并不低，普遍筛查，及早检出是最重要的预防手段[7]。 鉴于此，用于AMA-M2初筛的检测方法也成为一个重要的研究课题。 目前，市场上已有多种检测抗线粒体抗体Ⅱ型的商品试剂盒，如间接免疫荧光法、免疫印迹法、酶联免疫吸附法以及新出现的胶体金免疫层析法等。由于免疫印迹法常采用相关指标组合的方法，导致特异性较低，检测费用高，因而使用率低；本研究选择各临床实验室较常用的间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法，以及新出现的胶体金免疫层析法对抗线粒体抗体Ⅱ型进行研究，通过比较其在确诊PBC患者中的敏感性和特异性，实验室操作方便性，医疗机构普及性等方面，以探究出最适合PBC普筛的检测方法学。 一、对象与方法 1. 对象：PBC组108例，均为来自本院2007年12月至2010年7月间，经住院检查确诊的PBC患 者，诊断标准：2000年美国肝脏病学会（AASLD）推荐的PBC诊断指南：有胆汁淤积的生化改变「主要是指碱性磷酸酶（ALP）、γ2谷氨酰转移酶（GGT）升高」且无其他解释（B超检查胆道系统正常），同时AMA≥1∶40 ，则诊断为PBC；其中女性96例，男性12例，男女比例为1：8，年龄35到72岁；200例正常对照均为本院的健康体检者，100例其他肝病患者和自身免疫病患者100例(系统性红斑狼疮42例，类风湿性关节炎37例，强直性脊柱炎21例，均符合国际诊断标准)为疾病对照组，均为本院住院患者。 2. 检测方法：（1）间接免疫荧光法：试剂盒购自北京欧蒙公司，血清按1：10稀释，如抗AMA抗体阳性，继续血清倍比稀释，测定其最终稀释度，严格按说明书操作（2）酶联免疫吸附法：试剂盒购自上海富莼科芯生物技术股份有限公司，血清按1：50稀释，用四参数回归计算出待测样本浓度值，25RU/ml及以上判定为阳性，严格按说明书操作（3）胶体金免疫层析法：试剂购自上海富莼科芯生物技术股份有限公司，全血离心后直接将血清滴加在金标板上，5分钟后根据T线颜色判读实验结果。 3. 统计学分析：比较采用χ2 检验，用描述性统计方法及统计分析。P & 0.01为差异有统计学意义。 二、研究结果： 1. 三种检测方法学操作步骤主要指标比较如下：
定量或定性
间接免疫荧光法
荧光显微镜
75分钟，阳性样本稀释重测
总抗AMA抗体
定性或半定量
酶联免疫吸附法 酶标仪
抗线粒体抗体Ⅱ型
胶体金免疫层析法
抗线粒体抗体Ⅱ型
2. 三种检测方法在PBC组，疾病对照组和健康人群的敏感性、特异性比较如下： 表2 　三种检测方法在PBC及疾病对照组中AMA-M2（AMA）的阳性率
酶联免疫吸附法
胶体金免疫层析法
阳性数( n)
百分率( %)
阳性数( n)
百分率( %)
阳性数( n)
百分率( %)
健康志愿者
注: PBC组中AMA-M2的阳性率与各组比较，P 值均＜0.01 。
三、讨论 原发胆汁性肝硬化作为自身免疫性疾病，一直被划分为自身免疫性肝病的一种，与自身免疫性肝炎，原发硬化性胆管炎相提并论，并被认为是一种罕见病而淡出临床医生，尤其是肝科医生的视线。
然而，随着这一两年来AMA-M2检测的普及力度加大，PBC的新发病例大幅增加，从而提醒我们：PBC可能并非少见病。尤其在病毒性肝炎患者及病毒感染人群的临床研究中发现：伴发PBC的概率较高[8] ，因此在肝炎传染科中，此疾病应受到关注与重视。北京佑安医院数据显示：近半数PBC患者伴有乙肝病毒感染，疾病还同时伴发各类型肝炎（甲、乙、丙、戊肝炎，伴发乙型肝炎最常见）。 本院风湿科实验室自2006年12月开展抗线粒体抗体Ⅱ型的检测以来，坚持对全院医生，尤其是肝科与消化科医生进行原发胆汁性肝硬化的临床宣传与推广，结果发现：随着医生对PBC与M2了解的不断深入，M2的检测基数不断增加，阳性检出率逐步上升，被确诊为PBC的患者也逐渐增多。据本院今年1-7月份M2抗体检测数据显示：521例标本中，40例（7.7%）阳性，19例（3.6%）中强阳，21例（4.1%）弱阳性，其中肝病科中强阳11例（占总数57.9%），弱阳7例；风湿科中强阳2例（占总数10.5%），弱阳4例；胃肠道科中强阳1例（5.3%），弱阳2例；血液科中强阳2例（占总数10.5%），弱阳1例；其他内科中强阳3例（15.8%），弱阳7例。 以上数据表明：原发胆汁性肝硬化并非罕见病，而是临床医生，尤其是肝科医生缺乏应有的诊断意识导致PBC的发现率受限，患者易被误诊漏诊，因此，对肝科医生展开PBC与其检测指标AMA-M2的宣传，对PBC展开广泛的AMA-M2筛查是很有必要的，而选择敏感性高，特异性强，简便易操作，易普及的筛查工具就显得弥足轻重。 本研究结果表明：在现有的AMA-M2实验室检测方法中，间接免疫荧光法尽管是最常用的检测方法，但是其检测总抗线粒体抗体，敏感性只有68.3%，特异性为94.5%，较之酶联免疫吸附法的敏感性93.5%，特异性97%和胶体金免疫层析法的敏感性94.5%，特异性96.5%偏低，且酶联免疫吸附法与胶体金免疫层析法符合性极高，这可能与本研究选用的两种试剂盒抗原来源相同有关；从操作方法上来看，AMA-M2间接免疫荧光法需采用荧光显微镜，并需要专业的操作经验方能对结果进行分析和判读，中小医院较难开展，操作时间较长，样本量大时工作量繁重，且难以精确定量；AMA-M2酶联免疫吸附法需采用酶标仪，由于该方法学较成熟，一般免疫室工作人员均能操作，实验结果易判读，操作时间偏长，但适合大样本量操作，可精确定量，对判读中强阳与弱阳有明显优势，但样本量少时，试剂成本偏高，不适合中小医院开展；AMA-M2胶体金免疫层析法无需任何实验室设备与耗材，操作方法简便易学，全程操作只需5分钟，能满足随到随检随取结果的检测要求，适合列为常规检测项目，并可在中小医院广泛开展。 因此，在中国这样一个肝病大国，PBC作为一种并不罕见的肝硬化，其早期诊断，及时治疗便能大大改善预后的特点使得大力加强对PBC的宣传，广泛开展AMA-M2的检测，提高对PBC的诊疗意识非常有意义。而现有的AMA-M2检测方法中，AMA-M2胶体金免疫层析法最为简便快捷，并具有很高的敏感性特异性，是最适合广泛开展，在中小医院普及的检测方法，值得大力推广。
参　考　文　献 [1] 姜小华,仲人前,孔宪涛等. 原发性胆汁性肝硬化发病机制研究进展. 中国免疫学杂志,-589. [2] 张煊，林进，唐福林等. 原发胆汁性肝硬化的临床及病理分析. 中华风湿病学杂志,-103. [3] Metcalf JV, Mitchison HC,Palmer J , et al . Natural history of early primary biliary cirrhosis.Lancet, :. [4] Koizumi H , Onozuka Y, Shibata M, et al . Positive rate of anti-mitochondrial antibody in Japanese corporate workers. Rinsho Byori ,6-970. [5] Kisand KE ,Metskula K,Kisand KV ,et al . The follow-up of asymptomatic persons with antibodies to pyruvate dehydrogenase in adult population samples. J Gastroenterol ,8-254. [6] 姜小华,仲人前,方晓云等, 中国原发性胆汁性肝硬化患者的免疫遗传易感性研究, 中华中西医杂志,-188. [7] 姜小华,仲人前,方晓云等, 原发性胆汁性肝硬化特异性AMAM2 抗体在5 011名体检者中的筛查分析, 中华检验医学杂志,-555. [8] 牛英,王志光,俞岚, 54 例原发性胆汁性肝硬化临床分析, 云南医药-47.
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检查报告 AMA-M2,阳性，HEP2/猴肝胞浆型能好吗？
病情描述：
自身免疫性肝病
曾经的治疗情况和效果：
仍保持原剂量2片一天吗？药物会不会引起胆固醇和甘油三脂增高啊？
想得到怎样的帮助：
检查报告 AMA-M2,阳性，HEP2/猴肝胞浆型能好吗？
共2条医生回复
因不能面诊，医生的建议仅供参考，具体诊疗请一定到正规医院在医生指导下进行。
病情分析：你描述的考虑是肝炎可能，中医属于肝经湿热，可以考虑用茵陈蒿汤治疗，严重的考虑住院保肝治疗。饮食宜清淡，不能喝酒。
本回答来自： 求医网& | &
& | & 17:08
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病情分析：你好，抗核抗体HEP2猴肝着丝点型1:300阳性从你的描述来看，抗核抗体着丝点型阳性（1：320）常见于局限性硬皮病。
本回答来自： 求医网
& | & 11:24
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& 技术专栏 & 正文
关于AMA-M2筛查替代AMA荧光法筛查的建议
　　原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种自身免疫性疾病，多数病例明确诊断时并无临床症状。尽管PBC通常进展缓慢，但其生存率较同性别及同龄人群为低。临床上可表现为乏力、皮肤瘙痒、门脉高压、骨质疏松、皮肤黄疣、脂溶性维生素缺乏，以及复发性无症状尿路感染。此外，尚可伴有非肝源性自身免疫异常。近年来PBC检出率越来越高，但其发病机制至今仍末完全阐明，临床表现典型者，诊断多无困难，但此时病情多属晚期，故早期诊断是决定治疗成败的关键。
　　提及早期诊断，特异性高，敏感性强，可在疾病早期出现的自身抗体的检测是首选。自身免疫性疾病相关自身抗体检测作为非常重要的辅助手段，逐步得到临床医生的认可与广泛应用。目前比较常见的自身抗体检测方法包含了免疫荧光法，免疫印记法，蛋白印记法，酶联免疫法等等。不同抗体单独或组合检测常常需要一种或几种检测方法学联合应用，以求达到不错检、不漏检、及早提示、监测病程进展等目的。使用原则往往是首先通过免疫组化（荧光免疫）的方法进行抗体的筛查，筛查阳性的会利用免疫印记、酶联免疫法进行靶抗原的确认。但是在实际应用中，常常会有使用荧光法初筛结果为阴性，但是靶抗原确认实验为阳性的问题。究竟是荧光法初筛漏检还是确认实验特异性不够成了实验人员和科研人员迫切想弄清的问题！
　　一组来自北京协和医院500例常规检测标本的数据：
　　500例常规检测标本，
　　其中15例标本荧光筛查阴性（－），确认靶抗原实验阳性（＋）
　　阳性标本分布：SSA+/11例，Histone+/1例，Scl-70+/1例，Jo-1+/1例，M2+/1例
　　进一步随访这15例患者，确诊8例是自身免疫性疾病。
　　这一例证中：单纯使用荧光法作为初筛实验导致多种标记性抗体漏检，直接导致自身免疫性疾病患者漏诊或误诊！
　　在诸多已被公认的自身免疫标记性抗体中，具备早期诊断价值自身抗体的及早、准确检测不仅能够为临床医生提供客观可靠的诊疗信息，更能够为患者争取到更多的治疗时间。因此具备早期诊断价值自身抗体的及早、准确检测尤为重要！然而在实际应用中，是否也存在像上面北京协和医院数据表明的自身抗体荧光初筛漏检呢？
　　抗线粒体抗体（AMA）作为原发性胆汁性肝硬化（PBC）的初筛抗体，包含M1-M9共9个亚型，其中已经公认的M2型对PBC特异性最高（95%），敏感性最强（90%）。目前，不少医院采用了免疫荧光法检测AMA初筛，AMA阳性后再确认M2是否阳性的方法辅助诊断PBC。这一荧光初筛AMA，靶抗原确认M2的方法在以上协和的研究数据中已经出现了1例的初筛阴性而靶抗原确认阳性的情况。在HIROSHI MIYAKAWA等《使用重组抗原对荧光法AMA阴性的PBC患者的检测》（HEPATOLOGY -248.）研究中，30例荧光法检测AMA为阴性的PBC患者有22例M2靶抗原确认为阳性（73%）。这一结果表明：对于PBC，与使用重组M2的ELISA进行靶抗原确认相比，使用荧光法筛查AMA容易导致严重的漏检。因此，使用更为直接的M2靶抗原确认实验代替荧光法AMA对于PBC的早期筛查更为有效。
　　上海富莼科芯生物技术股份有限公司，自成立以来，一直专注于自身免疫体外诊断试剂的研发、生产与销售。2007年率先推出了使用更加特异的重组M2抗原建立的M2抗体ELISA检测试剂盒，临床验证结果表明该试剂盒针对PBC敏感性达90%，特异性达95%。2010年7月，基于重组M2抗原上海富莼科芯又推出了操作更加简便，应用更加广泛的胶体金免疫层析法（GICA）AMA-M2检测试剂盒。临床验证数据表明，该胶体金免疫层析法检测AMA-M2的性能与其ELISA法检测性能相当。
　　由于PBC起病隐匿，患者确诊常常以至疾病晚期，国内越来越多的专家、学者呼吁我们提高对PBC早期诊断的重视。近年来，包括有病毒性肝炎、干燥综合征等疾病合并PBC的报道屡见不鲜，甚至在健康献血员中亦有发现PBC病例的报道。
　　这些都传达给我们一个非常重要的信息：PBC的发病在我们中国这个肝病大国并不罕见。迄今为止，针对PBC的特异性抗体除了前面提及的AMA-M2，又有sp100、gp210等抗体检测相继得到应用。因此，我们呼吁医院肝科、传染科、消化科、风湿科、皮肤科等临床科室重视PBC早期筛查，同时倡导对健康及亚健康人群、肝病患者进行AMA-M2筛查或AMA-M2联合sp100、gp210筛查。这一努力将对我们及早准确的发现PBC，战胜PBC提供更加强劲有力的保障！
　　上海富莼科芯生物技术股份有限公司& 供稿AMA及其M2亚型对PBC诊断价值的Meta分析--《重庆医科大学》2014年硕士论文
AMA及其M2亚型对PBC诊断价值的Meta分析
【摘要】：背景：原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis, PBC）是一种自身免疫性疾病，病因尚不清楚，其发病率呈上升趋势。PBC患者的诊断对其预后至关重要。而抗线粒体抗体（anti-mitochondrial antibody,AMA）阳性被美国肝病研究学会(AASLD)列为PBC的诊断标准之一。
目的：系统评价AMA及其M2亚型对PBC的诊断价值。
方法：建立检索策略，搜索PubMed (Medline)、Cochrane图书馆、中国知网和维普中文科技期刊数据库，收集所有与AMA及其M2亚型对PBC诊断相关的研究文献与资料。根据纳入和排除标准筛选原始研究文献，并用QUADAS质量评价量表对纳入文献进行严格评估；收集、提取、总结必要的数据信息，使用Review Manger5.2和MetaDiSc1.4软件对纳入文献进行汇总与统计描述；根据异质性检验结果选择合适的合并效应量估计模型与方法，进行统计推断。敏感性分析评估Meta分析结果的真实性与稳健性。
结果：纳入文献24篇：包括19篇英文文献，5篇中文文献；病例组样本量为2992例。异质性检验结果提示存在异质性（非阈值效应），故采用随机效应模型合并统计量。Meta分析结果显示：不同方法检测AMA的汇总灵敏度为84.5%(95%CI,83.3%–85.6%)，汇总特异度为97.8%(95%CI,97.6%–98.0%)，汇总阳性似然比为25.201(95%CI,17.583–36.118)，汇总阴性似然比为0.162(95%CI,0.131–0.199)。
结论：AMA和AMA-M2亚型对PBC的诊断具有较高诊断价值，但相对于AMA-M2亚型来说，AMA具有更全面更高的诊断效能。
【关键词】：
【学位授予单位】：重庆医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：R575.2【目录】：
符号说明5-6中文摘要6-8ABSTRACT8-10前言10-111 资料与方法11-132 结果13-213 讨论21-23结论23-24参考文献24-31文献综述31-38 参考文献36-38致谢38-39攻读硕士期间发表的论文39-40
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