phusion flash high-fidelity pcr mix 怎么连tpcr2.1载体图谱

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DXY All Rights Reserved.3700bp大片段PCR的问题。。。急 - 实验交流 - 生物秀
标题: 3700bp大片段PCR的问题。。。急
摘要: [3700bp大片段PCR的问题。。。急] 如题,3700bp的片段做PCR,一直无法正确P出,请问选择什么酶和相应体系可以p出这种大片段。。。望解答。。谢谢啦 关键词:[大片段 保真 突变 载体 退火温度 克隆 高保真酶]……
如题,3700bp的片段做PCR,一直无法正确P出,请问选择什么酶和相应体系可以p出这种大片段。。。望解答。。谢谢啦回复takara 的lataq 是不错的选择我的4K左右效果不错回复片段较大,最好用高保真酶,我通常用phusion,速度快,15-30s/kb回复
takara 的lataq 是不错的选择我的4K左右效果不错 保真性也好吗?回复phusion 还是不错的,就是退火温度比较高,条件比较苛刻,需要摸索条件。LA Tag 扩长片段还是可以的,就是速度会比较慢。但是容易出现突变,还是建议用高保真的酶。回复不知道你的模板是什么我用的是一个phanta的高保真酶前几天扩一个6k的都扩出来了回复phusion很好用,保真性也还好。HF buffer扩不出来,可以换GC buffer试一下。
对于不好扩增的片段,延伸时间可以给到1kb/min。回复fastpfu 刚用 8000都没有问题回复
fastpfu 刚用 8000都没有问题 谢谢回复艾德莱的taq酶不错,便宜效果好。回复3700bp不是很大的,我普通克的都在4KB,如果就是亚克隆的话takara的LA Taq酶足够了,如果是克隆的话可以再选保真度高的酶。回复TOYOBO的 KOD FX NEO效果很好,曾经扩过8kb的,没有突变,循环数要少一点回复扩不出来就先不要用高保真的,用lataq就不错,如果再出不来,就加倍镁离子浓度回复Fast PFU很好用,又高效,连T载体记得加A.回复ltakara 的lataq还行,如果还是pcr不出来的话可以做拼接pcr回复
ltakara 的lataq还行,如果还是pcr不出来的话可以做拼接pcr 谢谢回复
Fast PFU很好用,又高效,连T载体记得加A. 谢谢回复我们用KOD Fx 克隆一个8Kb的水稻(Rice)基因构建互补载体,送3个测序,有一个没有完全没有突变。回复3700的片段不算短,但也不是特别长,根据我的经验普通taq,extaq,lataq都可以,如果你需要序列准确的话可以考虑后两种(个人推荐extaq),phusion也可以但是这酶对条件要求比较严格。另外,P不出来不一定是酶的问题,退火温度、延伸时间不合适都有可能P不出来,前者可以做touchdown解决,后者一般按1k 1min的速度计算一般不会出问题。
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