各类操作系统安全基线配置及操作指南_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
各类操作系统安全基线配置及操作指南
上传于||暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用5下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩171页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢DNA剪切修复对MPTP/MPP~+致帕金森病模型DNA氧化损伤的作用研究--《复旦大学》2009年硕士论文
DNA剪切修复对MPTP/MPP~+致帕金森病模型DNA氧化损伤的作用研究
【摘要】：
帕金森病(Parkinson's disease, PD)是仅次于是阿尔茨海默病的第二大神经退行性疾病,其主要病理特征为黑质致密部大量多巴胺能神经元变性或丢失。研究显示,PD病人黑质多巴胺能神经元内DNA氧化损伤严重,若不被及时有效的修复,则可能导致神经元死亡。在多种DNA修复机制中,最主要和最重要的是DNA剪切修复,它可以分为碱基切除修复(base excision repair, BER)和核苷酸切除修复(nucleotide excision repair, NER)。BER和NER分别依赖于多种蛋白的相互作用,其中,8-氧基-鸟嘌玲DNA糖苷酶(8-oxoguanosine DNA glycosylase, OGG1)是BER的限速因子；而着色性于皮病蛋白A、B、F、G (xeroderma pigmentosum factor A, B, F, G, XPA, XPB, XPF, XPG)是NER不可或缺的蛋白因子；细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是BER和NER共同需要的蛋白因子；以上蛋白的表达变化分别反映了细胞内BER和NER的修复活性变化。
然而,在PD等神经退行性疾病病理情况下,DNA氧化损伤与DNA剪切修复的关系及其相关蛋白表达变化却仍未知。为探讨DNA氧化损伤与DNA剪切修复在PD病理机制中的作用,本论文在MPP+(1-methyl-4-phenyl-pyridinium)致PC12细胞的PD细胞模型上采用相差显微技术和MTT实验观察了细胞的形态和活力变化,并采用Hochest染色观察细胞的凋亡情况,随后采用Western-blot技术检测了BER相关蛋白OGG1和NER相关蛋白XPA、XPB、XPF、XPG以及BER和NER共同的蛋白因子PCNA的表达变化,最后用8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine (8-oxodG)免疫细胞化学染色技术研究了DNA氧化损伤情况；在MPTP(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine)致C57BL／6小鼠的PD动物模型上研究了黑质内BER和NER相关蛋白的表达变化情况,现将实验结果概述如下：
1.PC12细胞的形态和活力变化
相差显微技术的结果显示,MPP+处理不同时间对PC12细胞的形态影响不大,但是处理24h后,细胞贴壁能力降低；而MTT实验结果显示,MPP+处理PC12细胞18h和24h后,细胞活力显著下降,分别降至78.6%和70.8%。
2.PC12细胞的凋亡情况研究
我们进一步用Hochest染色来观察细胞的凋亡情况,结果显示,MPP+处理PC12细胞18h后,有凋亡细胞出现,24h后凋亡现象进一步发展,但是凋亡细胞增加并不显著,提示MPP+氧化损伤并不显著增加凋亡细胞的数目。
3.PC12细胞的BER和NER相关蛋白的表达变化
以上结果提示,MPP+氧化损伤对细胞形态和细胞的凋亡影响不大,但却时程依赖性地使细胞活力显著降低,这可能与细胞内应对损伤的DNA修复能力降低相关；已知MPP+是特异地介导细胞DNA氧化损伤的物质,而细胞应对DNA氧化损伤的修复机制主要是DNA剪切修复,因此,我们采用Western-blot技术结合光密度分析的方法检测了MPP+处理不同时间后,PC12细胞内BER和NER相关蛋白的表达变化。光密度分析及统计结果显示,BER限速因子OGG1的表达水平在处理1h后即显著升高,比对照升高5.0倍；3h后达到高峰,升高6.4倍；之后依次下降,24h低于对照。与之对应的是,NER的各相关蛋白表达水平变化显著，XPA、XPB、XPF、XPG和PCNA在MPP+处理1h后即显著上调,分别增加4.2倍、2.0倍、2.0倍、2.7倍和1.9倍；随着MPP+处理时间的延长,各因子的表达量继续上调,其中XPA和PCNA分别在12h和3h达到高峰,分别增加3.4倍和2.5倍,而XPB、XPF和XPG均在18h到达高峰,分别增加3.4倍、3.9倍和3.9倍；24h后,各蛋白表达水平均下降,其中PCNA显著低于对照。
4.PC12细胞的DNA氧化损伤情况研究
以上结果提示,MPP+氧化损伤能上调BER和NER相关蛋白的表达水平,提示细胞内DNA剪切修复能应对DNA氧化损伤,但随着MPP+处理时间的延长,BER和NER的修复能力均下降,且细胞活力下降显著,这可能与DNA氧化损伤严重有关,因此我们进一步用8-oxodG免疫细胞化学染色来观察细胞的DNA氧化损伤。结果显示,对照细胞的8-oxodG免疫阳性细胞主要分布于线粒体,含量低；18h后,同时分布于线粒体和核,含量增多；24h后,主要集中在细胞核,含量最多,损伤最严重。结果提示,MPP+氧化损伤引起PC12细胞的DNA氧化损伤程度加剧,随着处理时间的延长,氧化损伤的标志性产物8-oxodG的分布,从线粒体逐步过渡到细胞核。推测细胞内BER和NER蛋白表达水平下降进而导致DNA剪切修复能力降低的原因是DNA氧化损伤加剧。
5.C57BL／6小鼠黑质内BER和NER相关蛋白的表达变化
以上结果提示,在PD细胞模型上,随着DNA氧化损伤程度的改变,细胞内DNA剪切修复(BER和NER)相关蛋白表达变化显著,DNA氧化损伤加剧导致细胞BER和NER相关蛋白表达下降,DNA剪切修复能力降低。为了进一步探讨DNA氧化损伤加剧与DNA剪切修复相关蛋白的表达变化之间的关系,我们首先采用Western-blot结合光密度分析的方法检测了MPTP腹腔注射C57BL／6小鼠3d后黑质多巴胺能神经元的标志酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达,结果显示TH表达显著下降,与对照相比降低63%。随后检测了BER和NER相关蛋白的表达变化。光密度分析及统计结果显示,OGG1和PCNA表达水平降低不明显,但XPA、XPB和XPG均显著下降,与对照相比,分别降低47%、58%和68%；此外,正常情况下黑质内(SN)的BER和NER相关蛋白表达的基线水平也差异显著,OGG1比对照(中脑除黑质以外的其他部位,SN-)低16倍,而XPA、XPB和XPG比SN-高1倍。以上结果提示,正常情况下黑质内BER功能低下而NER相对要高；当DNA氧化损伤加剧导致NER能力降低,可能是PD发病的原因之一。
1)在PD的细胞模型上，MPP+氧化损伤对PC12细胞的形态和凋亡情况影响不大,但显著降低细胞活力。随着MPP+处理时间延长,细胞DNA氧化损伤加剧。
2)在PD的细胞模型上,随DNA氧化损伤程度的增加,PC12细胞BER和NER相关蛋白的蛋白表达水平变化显著；DNA氧化损伤加剧导致BER和NER相关蛋白表达水平下降。
3)在PD的动物模型上,MPTP氧化损伤导致C57BL／6小鼠黑质的NER相关蛋白表达水平显著下降。
结论及意义：
在PD的细胞和动物模型上,NER相关蛋白表达水平随DNA氧化损伤程度的加剧而显著下降。结果提示,DNA氧化损伤加剧引起DNA剪切修复能力尤其是NER修复能力下降,加重了神经元的损伤并导致其死亡,这可能是PD发病机制之一。该研究可能为阐明PD病理机制及寻找新的临床治疗靶点提供新的研究基础,具有重要的理论意义和临床应用价值。
【关键词】：
【学位授予单位】：复旦大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2009【分类号】：R742.5【目录】：
一、缩略语表5-7
二、中文摘要7-10
三、英文摘要10-14
四、正文14-57
(一) 前言14-17
(二) 材料与方法17-24
2.试剂来源17-18
3.仪器设备18
4.实验方法18-24
4.1 细胞培养与处理18-20
4.1.1 溶液配置18-19
4.1.2 细胞培养及MPP~+处理19-20
4.2 细胞活性检测(MTT实验)20
4.3 细胞损伤检测(Hochest染色和8-oxodG免疫细胞化学染色)20-21
4.3.1 溶液配置20
4.3.2 细胞培养用玻片的准备20
4.3.3 Hochest染色20
4.3.4 8-oxodG免疫细胞化学染色20-21
4.4 PD动物模型的制备及样品收集21
4.5 免疫印迹(Western blot)实验21-23
4.5.1 溶液配置21-22
4.5.2 PD细胞模型蛋白提取22
4.5.3 PD动物模型蛋白提取22
4.5.4 Western blot22-23
4.6 数据的统计与分析23-24
(三) 实验结果24-31
1. MPP~+对PC12细胞的形态影响研究24
2. MPP~+对PC12细胞的活力影响研究24
3. Hochest染色研究PC12细胞的凋亡情况24-25
4. PD细胞模型上BER和NER相关蛋白表达的变化25-28
4.1 OGG1的时程依赖性变化26
4.2 XPA的时程依赖性变化26
4.3 XPB的时程依赖性变化26-27
4.4 XPF的时程依赖性变化27
4.5 XPG的时程依赖性变化27
4.6 PCNA的时程依赖性变化27-28
5. 8-oxodG免疫细胞化学染色研究PC12细胞的DNA氧化损伤28-29
6. PD动物模型上BER和NER相关蛋白的表达变化29-31
6.1 PD动物模型上TH的表达变化29
6.2 PD动物模型上BER相关蛋白的表达变化29-30
6.3 PD动物模型上NER相关蛋白的表达变化30-31
(四) 讨论31-36
1.NER参与脑内的DNA氧化损伤的修复31-32
2.DNA氧化损伤修复通路之间的关系32-34
3.NER与神经退行性疾病34-36
(五) 小结36
(六) 结论及意义36-37
(七) 图版说明37-49
(八) 参考文献49-57
五、文献综述57-82
六、致谢82-83
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【共引文献】
中国期刊全文数据库
黄斌,王兴勇;[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2005年02期
王小波;张介眉;吴辉;郝建军;;[J];湖北中医杂志;2009年02期
顾桂国;林兆奋;杨兴易;李瑞东;;[J];内科理论与实践;2010年01期
任今鹏;孙晓江;蒋雨平;;[J];上海交通大学学报(医学版);2007年01期
肖成华,唐涌,张鹏;[J];徐州医学院学报;2004年06期
胡霞敏;周密妹;胡先敏;王君;曾繁典;;[J];中国药理学通报;2006年04期
胡霞敏,曾繁典;[J];中国药理学与毒理学杂志;2005年01期
胡霞敏;严常开;胡先敏;;[J];中国临床药理学与治疗学;2006年02期
胡霞敏,曾繁典;[J];药学学报;2004年06期
张颖;胡国华;;[J];中风与神经疾病杂志;2010年01期
中国博士学位论文全文数据库
王冰;[D];吉林大学;2006年
徐卉;[D];吉林大学;2007年
何昆燕;[D];复旦大学;2006年
秦晓凌;[D];苏州大学;2013年
严秀文;[D];南京农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库
朱婷鸽;[D];苏州大学;2011年
武耀光;[D];北京中医药大学;2005年
严建平;[D];浙江大学;2007年
张丽;[D];四川师范大学;2007年
高珊;[D];湖北中医学院;2008年
张华锋;[D];武汉科技大学;2008年
刘公安;[D];重庆医科大学;2008年
马开利;[D];中国协和医科大学;2008年
【相似文献】
中国期刊全文数据库
张遵真,衡正昌;[J];癌变.畸变.突变;2004年06期
郝卫东,尚兰琴,赵慧,王红伟,卢景芬,古力努尔;[J];中国环境科学;2000年02期
潘勤;陈吉海;叶小珍;杜宏;;[J];河北医药;2010年02期
钟进义,孙丰运,张燕滨;[J];中国公共卫生;1997年09期
朱茂祥,杨陟华,龚诒芬,陆颖,曹珍山;[J];辐射研究与辐射工艺学报;2001年04期
严亚平;[J];环境与职业医学;1993年01期
杨国宇,黄进,李宏基;[J];中国生化药物杂志;2005年04期
毕胜!150001,张昱,吴江,王德生!150001,赵庆杰!150001,潘尚哈!150001,林春艳!150001;[J];中华老年医学杂志;2001年01期
马爱国,ＡｎｄｒｅｗＲ．Ｃｏｌｌｉｎｓ,ＳｕｓａｎＪ．Ｄｕｔｈｉｅ;[J];癌变畸变突变;1997年03期
仲伟鉴,时胜利,杨隽,刘云利,张荣泉,郑方园,张国雄,周澄明;[J];癌变畸变突变;1998年02期
中国重要会议论文全文数据库
朱茂祥;杨陟华;龚诒芬;;[A];第五届全国自由基生物学与自由基医学学术讨论会论文摘要汇编[C];2000年
顾熊飞;张何;谢丽涛;骆晓枫;;[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
马爱国;刘四朝;;[A];中国营养学会第八次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2000年
袭著革;晁福寰;孙泳梅;;[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年
李学君;张玲妹;陆世铎;孙凤艳;;[A];中国药理学会第十届全国神经学术会议暨浙江省药理学会2002年年会论文摘要集[C];2002年
农清清;竹内亨;张志勇;何敏;;[A];中国毒理学会第五次全国学术大会论文集[C];2009年
梁惠;董春景;贺娟;马爱国;;[A];中国环境诱变剂学会抗诱变剂和抗癌剂专业委员会第三次全国学术会议、中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第五届学术交流会、贵州省环境诱变剂学会成立大会暨首届学术交流会论文集[C];2004年
王喆;严海东;;[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
赵勤;李雪竹;严海东;;[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
沈迪晗;陈留记;黄娅琳;孙凤艳;;[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库
张遵真;[D];四川大学;2005年
宋方方;[D];华中科技大学;2008年
郭磊;[D];沈阳药科大学;2008年
于珊珊;[D];山东大学;2009年
张辉珍;[D];青岛大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库
黄晓兰;[D];武汉大学;2004年
王喆;[D];中国医科大学;2003年
黄进;[D];河南农业大学;2005年
张勤;[D];四川大学;2005年
于文芳;[D];中国医科大学;2007年
廖德丰;[D];华东师范大学;2005年
贾文波;[D];华中科技大学;2006年
张静;[D];中国医科大学;2003年
车望军;[D];四川大学;2007年
Ketut Indra Djaja P.;[D];广西医科大学;2007年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 大众知识服务
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号