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&教你如何用IPP分析免疫组化图片
教你如何用IPP分析免疫组化图片
简介：Image-Pro Plus是世界最顶级的图像分析软件包，广泛应用于多项科研、医学与工业应用。对于免疫组化的图片分析，Image-Pro
Plus软件同样在行。那么，具体方法请看下文。
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提示信息_生物产品通
MySQL Query:SELECT company,linkurl,thumb,groupid,business from [pre]company where groupid=6 AND username='keeii' LIMIT 0,1
MySQL Error:You have an error in your SQL check the manual that corresponds to your MariaDB server version for the right syntax to use near 'e groupid=6 AND username='keeii' LIMIT 0,1' at line 1 MySQL Errno:0 Message:MySQL Query Error关注今日：3 | 主题：276465
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【原创】（分享）使用专业图像分析软件—IPP 6.0 快速计算免疫组化染色不均的阳性细胞&[精华]
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这个帖子发布于5年零356天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做免疫组化的过程中，遇到一些问题：乳腺肿瘤的Ki-67和Ph-3的阳性细胞如何计数？
手动计数我是不考虑的，主要是懒惰。一番google后，结果搜到了image pro plus 6.0这个专业图像分析软件，接着又在丁香园坛里搜到了作 者 hbchendl，编辑 doctor_li制作的《手把手教你使用image pro plus》的PDF教程，受益匪浅！（在此先向两位前辈老师表示敬意！）很快我就学会了如何使用细胞计数功能，每张图片只需要用滴管取好标准，几个键一按，阳性细胞的数量就出来了。不过很快问题就出现了，象Ki-67和Ph-3这种染色深浅不一的阳性细胞，深浅如何界定？如何在几百张图片中统一计数标准、减少人为计数的误差？而且能自动统计？（真是懒到家了，嘿嘿！）我曾尝试使用本软件的宏功能，结果发现根本行不通！那我就退而求此次——半自动也可以！最后终于摸索到了方法，能够在同一批次制作、同等照相条件下的免疫组化切片中，用本软件快速地把这些染色不均的阳性细胞统计出来！
以下是具体的步骤：
不知道邀请谁？试试他们
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打开图片，点击count and measure objects 图标2. 点击measure3. 点击select measurement4. 选中area。这里指的是你选择细胞的大小，太大的比如背景染色不能要，太小的杂点也不能要，会导致重复计数。我是20X的照片，这里选择的是60-1000，然后点击OK。
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轩辕xuanyuan edited on
5. 选择histogram based6. 这时片子上细胞部分就会大片发红，不要紧。7. 点击“X”图标，红色就消失了。8. 这时，点击滴管图标，选取你认为阳性的细胞，这是选择颜色的重要步骤，一定要选准，建议从较深的细胞开始选择。选错了，可以点击滴管隔壁的返回图标，反悔一次，嘿嘿！这时就可以看到，同样颜色的细胞已经上色了。9. 这时要进一步把图片里颜色最深、最黑的细胞涂上，因为它们是强阳性的细胞。到此，颜色就有了界定范围了。
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10. 现在需要把我们选择的颜色范围，保存为一个文件，作为后面取色的标准。点击左下方的file图标，然后save file。11.
取一个文件名。我这里是rgb25.rge.点击保存，然后close。12. 点击count。13. 这时计数结果就出来了，in range 62，表明符合要求的细胞有62个。
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14.我们现在就可以打开下一张图片了。点击select colors。15. 同样选择histogram based，细胞又成片变红。16. 点击左下角file，然后是load file。17. 选中我们上次保存的rgb25.rge文件。18. 这时会弹出一个对话框，问你是不是用选中的文件替换已选的(染红的)范围?毫不犹豫地选“是”!（怪了，整个软件通篇都是英文，这时竟然弹出一个“是”？不可思议呀！）
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19. 这时会看到，这张图中的一些细胞变红了，这些细胞的选择范围，和上一张图是绝对一致的，这就避免了再次人为选色带来的误差，做到所有图都是一个标准。20. close， 点击count，计数就出来了。这张图是32个阳性细胞。然后就可以推而广之，把余下的图中的阳性细胞统计出来了。我本人无论在免疫组化还是统计方面都是个新手，这次贸然发帖，无非是本着愚者千虑或有一得的心态，抛砖引玉，把自己的小小心得给大家分享。各种方法肯定存在多种局限和不足，比起手工计数来说，还是省了不少事了。希望各位前辈老师多多批评指正！或者教给我更好的办法！谢谢！
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谢谢分享，好样的
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呵呵，看来楼主没有深刻了解IPP。
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谢谢楼主！计数问题一直是个很棘手的问题。有没有说现在最科学的是哪种？
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好贴啊，感谢分享！楼主能不能把这个软件发给我，找了半天也没有找到可下载的！邮箱：
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谢谢，辛苦了！你是个谦虚的好同志
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想要请问楼主：统计出来的Total数目代表的是什么？
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qian0036 想要请问楼主：统计出来的Total数目代表的是什么？我想total可能代表的是软件默认的可见的细胞总数，in range是在我们设定范围内的细胞数。
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楼主能不能把这个软件发给我，万分感激QQ邮箱
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多谢楼主，讲的很详细，太好了这个软件！
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谢谢楼主，学习啦还有辛苦啦哈哈
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看楼主帖子，受益匪浅啊！可否将ipp6.0不吝相赠！QQ!手头有要处理的片子，谢谢喽!
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请问楼主，40X的照片，area 应该选择哪个范围？谢谢！
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猩猩胡 看楼主帖子，受益匪浅啊！可否将ipp6.0不吝相赠！QQ!手头有要处理的片子，谢谢喽!谢谢你的鼓励！IPP软件太大了，用QQ传比较困难，你到外网google一下吧，应该不难找到的！
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zmx88 请问楼主，40X的照片，area 应该选择哪个范围？谢谢！你好！我想还是选择hot spot区域，哪里阳性多就选择哪里。并且一张片子尽量能照3-5张照片，分别用IPP计算后平均，这样要准确一些。
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轩辕xuanyuan 你好！我想还是选择hot spot区域，哪里阳性多就选择哪里。并且一张片子尽量能照3-5张照片，分别用IPP计算后平均，这样要准确一些。我一张片子在40X物镜下选择高表达的区域照了10张，不重复。在第四步中“ 选中area。这里指的是你选择细胞的大小，太大的比如背景染色不能要，太小的杂点也不能要，会导致重复计数。我是20X的照片，这里选择的是60-1000，然后点击OK。”我用40X照的细胞大小&area&选择大概是多少呢？是扩大两倍120-2000这样算吗？谢谢前辈。。。
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zmx88 我一张片子在40X物镜下选择高表达的区域照了10张，不重复。在第四步中“ 选中area。这里指的是你选择细胞的大小，太大的比如背景染色不能要，太小的杂点也不能要，会导致重复计数。我是20X的照片，这里选择的是60-1000，然后点击OK。”我用40X照的细胞大小&area&选择大概是多少呢？是扩大两倍120-2000这样算吗？谢谢前辈。。。你好，我一般使用20X照片，我想如果你用40X的，应该范围在100-3000左右是可以的，你可以调整尝试一下。祝顺利！
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很有用，谢谢楼主
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很有用的帖子啊！！学习了！不过想请教楼主一个问题，按照您的方法还是不能精确的比较片子的不同染色强度啊，好像只能将阳性细胞的数目计数出来，求教啊？？？谢谢
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学习了！楼主，如果拍的片子曝光率不同是不是就不能使用这个软件了呢？另外如果认为哪个细胞不是阳性细胞，怎么去掉计数呢？
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楼主好人，可不可以发个软件啊？
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因为有些时候疾病状态不同，细胞体积大小会有变化，那这样同样视野下总的细胞数会不同，那可以取阳性细胞数和总的细胞数的比例作为数据吗？
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。求哪位好心人发给我一份吧！我急用呀！
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很好，学会了……
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谁有IPP使用教程啊
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两个指标，鉴定同一种肿瘤，一个在细胞核表达，一个在细胞质表达，能否用这个软件。@
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好帖子，感谢楼主！
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qian0036想要请问楼主：统计出来的Total数目代表的是什么？我想total可能代表的是软件默认的可见的细胞总数，in range是在我们设定范围内的细胞数。那阳性率就是两者相除吗
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学习了，谢谢楼主！
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