应用RT-PCR对新城疫病毒分离株毒力的快速鉴定--《中国兽医学报》2004年04期
应用RT-PCR对新城疫病毒分离株毒力的快速鉴定
【摘要】：根据新城疫病毒 (NDV)强、弱毒株在 F蛋白裂解位点氨基酸组成和序列上的差异 ,参照有关文献 ,设计了 3对引物 (A+B,A+C,A+D)。引物 A+B能从 L a Sota、B1 、 系和强毒 F4 8E8的含毒尿囊液中扩增出 36 2 bp的核酸片段 ,引物 A+C仅能从强毒 F4 8E8的含毒尿囊液中扩增出 2 5 4 bp的片段 ,引物 A+D仅能从 L a Sota、B1 、 系的含毒尿囊液中扩增出 2 5 4 bp片段。 3对引物均不能从 IB、IBD、AI的含毒尿囊液和正常鸡胚尿囊液中扩增出特异片段。从发病鸡群中分离的 3株 NDV毒株均被 A+C引物扩出 ,它们的鸡胚平均死亡时间 (MDT)分别为 5 1.8、5 3.2、5 2 .6 h,1日龄雏鸡脑内接种指数 (ICPI)为 1.6 5、1.6 3、1.6 0 ,证明是 NDV强毒。利用 RT- PCR对 NDV人工感染鸡最早可于攻毒后第 2天从病鸡气管中检测到 NDV,其次为泄殖腔和脾、肾。利用 RT- PCR对 NDV毒力的鉴定结果与传统生物学试验的测定结果完全吻合 ,但前者可在 2 4 h内直接对组织匀浆进行诊断 ,具有快速、简便和敏感的特点
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：S852.65【正文快照】：
长期以来,防制新城疫(ND)的最有效的方法是疫苗接种,但免疫失败屡见不鲜,免疫鸡群中的非典型新城疫仍时有发生,造成的损失十分严重。实验室诊断ND,通常采用鸡胚传代的方法分离病毒,用HA、HI试验来初步鉴定NDV,然后用生物学试验区分NDV毒力强弱,但这一过程需要较长时间、较多
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白鹭源新城疫病毒的分离与鉴定
从1只患病的白鹭的咽喉、泄殖腔棉拭子中分离到1株病毒,经血凝、血凝抑制试验和RT-PCR法鉴定为新城疫病毒.根据该毒株对鸡胚平均致死时间、鸡胚半数致死量、鸡胚半数感染量的测定和新城疫强弱毒鉴别的RT-PCR检测,表明该分离株为新城疫强毒株.
CHEN An-li
XIE Zhi-xun
LIU Jia-bo
PANG Yao-shan
DNG Xian-wen
XIE Zhi-qin
作者单位：
广西大学动物科学技术学院,广西南宁,530004
广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁,530001
年，卷(期)：
S852.659.5
机标分类号：
在线出版日期：
基金项目：
广西特聘专家专项经费，国家百千万人才工程入选专项费金
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万方数据电子出版社新城疫病毒在鸡胚中增殖影响因素探讨
新城疫病毒(newcstlediseasevirus,NDV)是引起鸡瘟病的重要病原体[1,2]。目前NDV有弱毒株、强毒株、C30克隆和lasota株等主要是用来制备鸡瘟疫苗的[3,4],同时NDV也是诱导全血产生细胞因子的重要诱导剂如NDV诱导生产血源性干扰素[5],也是治疗早期癌症的试用疫苗。因此制备高效价的血凝素(HA)是生产疫苗和诱生细胞产生干扰素的前提,本研究主要以NDV弱毒株为实验对象探讨了几种培养因素对鸡胚尿囊液血凝效价的影响,现报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1病毒培养新城疫病毒弱毒株和新城疫强毒株,购自安徽省生物制药厂;鸡新城疫C30克隆株和lasota株均由中国兽医药品监察所提供。该病毒通过9日胚龄鸡胚传代,每个鸡胚接种1∶血凝单位的病毒尿囊液0.2ml,于36℃温箱内培养72h,收获鸡胚尿囊液,进行无菌试验。鸡胚尿囊液低速离心,除去血细胞及其他细胞。取上清液分装塑料小管0.5ml...&
(本文共4页)
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新城疫是由副赫病毒科副赫病毒属的新城疫病毒引起的一种高度接触性、急性、败血性传染性疾病l’),主要侵害鸡和火鸡,其特征是呼吸困难、下痢和神经症状,死亡率极高,严重危害了世界各国养鸡业的发展,在目前使用的化学药物药效不确定、合成周期长、成本高、毒副作用大、疫苗免疫还不能完全起到保护作用的情况下,人们又把目光转向了中草药。中草药作为天然产物,具有残毒较低或无残毒、副作用小、不易产生耐药性等优点,应用中草药防治鸡病毒性疾病,前景极为广阔。因此,研究抗病毒中草药的作用机理,具有重要的理论和实际意义。 板蓝根和黄茂为临床常用中药。板蓝根为中国传统中药,《中华人民共和国药典》(2 005年版)规定为十字花科植物落蓝的干燥根,始载于《神农本草经》,有清热解毒、凉血利咽功能,用于瘟毒发斑、喉痹、烂喉、大头瘟疫、丹毒、痈肿等症,临床上常用于病毒性及细菌性感染疾病l2]。有研究表明,抗病毒感染的单味中药大多为清热解毒药,具有抑制病毒增殖或灭活、阻止...&
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新城疫(Newcastle disease,ND)是危害家禽的重要疫病,其病毒属副黏病毒科,腮腺炎病毒属。虽只有一个血清型,但有多个基因型,不同毒株之间在毒力方面有很大差异。鸡胚培养是增殖新城疫病毒(NDV)最简便、有效的方法之一。OIE规定应使用SPF鸡胚,但SPF鸡胚成本高、来源少,主要用于科研和种毒增殖C普通鸡胚来源广、价格便宜,适于NDV灭活苗的大量生产。但普通鸡胚都有一定的NDV母源抗体,疫苗毒的生产能否用普通鸡胚,关键取决于鸡胚母源抗体对NDV增殖的影响程度。该试验就是通过鸡新城疫病毒La Sota两种不同毒株分别在SPF鸡胚和普通鸡胚上的增殖与培养来探明鸡胚母源抗体对其病毒增殖的影响程度,为生产出较高效价的疫苗提供依据。1材料与方法1.1鸡胚SPF鸡胚(SPF种蛋购自北京梅里亚实验动物中心SPF种禽实验室)由河南农业大学兽医微生物实验室孵化;9～11日龄普通鸡胚购自中牟一孵化场。1.2病毒株鸡新城疫病毒La Sot...&
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鸡胚培养是增殖新城疫病毒（ＮＤＶ）最简便、有效的方法之一。ＳＰＦ鸡胚成本高、来源少，主要用于科研和种毒增殖；普通鸡胚来源广、价格便宜，适于ＮＤＶ灭活苗的大量生产。但普通鸡胚都有一定的ＮＤＶ母源抗体，疫苗毒的生产能否用普通鸡胚，关键在于鸡胚母源抗体对ＮＤＶ增殖的影响。１材料与方法１．１种蛋ＳＰＦ种蛋：购自山东省农业科学院家禽研究所ＳＰＦ鸡场；ＮＤＶ非免疫种蛋：购自本所某特定ＮＤＶ非免疫鸡场；普通种蛋：共４批，分别为３个种鸡场的１８０，２１０和３５０日龄种鸡所产。各场种鸡均于开产前用ＮＤＶ油乳剂灭活苗进行了免疫。１．２种毒ＮＤＶＬａＳｏｔａ株，ｃｌｏｎｅ?３０株，Ⅰ系株和Ｆ４８Ｅ９株均购自中国兽药监察所。１．３种蛋分组及孵化将上述种蛋分为６组，每组１０００枚。Ａ组为ＳＰＦ蛋，Ｂ组为ＮＤＶ非免疫蛋，Ｃ组为１８０日龄种鸡蛋，Ｄ组为２１０日龄种鸡蛋，Ｅ组为２４０日龄种鸡蛋，Ｆ组为３５０日龄种鸡蛋，均在相同条件下孵化。１．４ＮＤＶ抗体检测分...&
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鸡新城疫(ND)又名亚洲鸡瘟,是由新城疫病毒(NDV)引起的烈性传染病,是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一,是目前危害我国养鸡业的头号传染病,所造成的经济损失十分惨重。目前由于ND免疫程序混乱,采用临床诊断方法较难确诊,易发生误诊。应用经典的病毒分离、鉴定和毒力试验相结合的诊断方法,不仅花费昂贵,而且确诊时间至少7天,延误了有效防制措施的实施,往往造成很大的损失。因此,做好诊断对防制本病非常重要。近年来,随着现代生物技术的发展,分子生物学技术已被大量应用于ND的快速诊断。PCR技术是一种离体扩增特定靶核苷酸片段的方法。可在数小时内将仅有的几个拷贝的基因扩大数百万倍,使其在凝胶电泳后形成明显可见的带。但传统的PCR检测易污染,假阳性率高,应用有一定的局限性。为了发挥它早期、快速诊断的优点,近年发展了多种将传统PCR技术与其他技术结合起来的新型PCR技术。其中荧光PCR技术(FluorescentPCR)是以标记特异性荧光探针为...&
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新城疫(ND)是对鸡危害最大的传染病之一,其对鸭、鹅的致病性如何?是否表现临床症状?以前的观点是鸭、鹅可以感染此病,但呈亚临床感染,无明显的临床症状。经人工致病试验证明,新城疫病毒对鸭、鹅均具有致病性,鸭、鹅感染新城疫病毒后,均表现临床症状并具有一定的死亡率,现报告如下。1材料和方法1.1材料1.1.1新城疫病毒F48E9毒株由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供。1.1.2ND H(I血凝抑制试验)抗原及阳性血清,由中国兽药监察所生产。1.1.3禽流感HI抗原与阳性血清,由哈尔滨兽医研究所生产。1.1.447日龄非免疫鸭15只,由某饲养户购入。1.1.550日龄免疫鹅10只,非免疫鹅15只。由某孵化厂购入1日龄鹅雏,其中10只于15日龄时检测NDHI抗体为0,用复合ND蜂胶佐剂疫苗进行免疫接种,每只0.4ml,同时用Lasota苗1羽份滴鼻,15只不免疫作为对照。1.1.6SPF鸡胚由辽宁益康生物制品厂购入,64枚分8组,测得N...&
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新城疫(N D)是新城疫病毒(N D V)引起的禽类急性、高度接触性和致死性的传染病,对养禽业的危害极其严重[1]。自1997年以来,我国家养水禽鹅广泛发生新城疫,引起很高的发病率和死亡率[3],从而改变了N D V对水禽不致病的观点。最近几年我国也有几例家鸭感染N D V的病例报道,但并没有在家鸭中引起更严重的流行性和致病性。在对健康家鸭病毒感染的调查中,我们分离到1株N D V,并对其生物学特性进行了研究,现报道如下。1材料和方法1.1病毒和特异性血清的制备新城疫病毒F48E8和减蛋综合征病毒ED S-76购自中国兽药监测所。将F48E8毒株分别接种10日龄SPF鸡胚,减蛋综合征病毒ED S-76接种14日龄鸭胚,分别扩增病毒。制备这两种病毒的特异性抗血清按文献[4]的方法进行。1.2禽流感琼扩试验阳性血清和抗原禽流感琼脂扩散试验阳性血清和阳性抗原购自哈尔滨兽医研究所。1.3鸡胚、鸭胚和试验鸡9～10日龄SPF鸡胚购自山东省...&
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