求个gai的《gai 垃圾话mp3下载》mp3百度云下载，谢谢

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-10-14 07:34 标签： gai爷垃圾话的歌词
后使用快捷导航没有帐号？
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自由球员, 积分 25, 距离下一级还需 25 积分
本帖最后由 始终如一.. 于
16:43 编辑
从昨天下午就开始这种情况，今天又重新下载，还是这种情况。网络连接明明好着呢
求助啊！急！
16:42 上传
重下了个迷你版也不行
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不作就不会死
A级球员, 积分 25859, 距离下一级还需 14141 积分
请上图说明下，，，
智商是硬伤
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板凳球员, 积分 1475, 距离下一级还需 1025 积分
唉，我从前几天开始就这样，发了贴，也没人说出什么情况的，没有用，自己想办法弄吧。我刚才有掉了，真尼玛坑，台式电脑，算是高配了，4M宽带，我之前以为是无线路由器的问题，然后把线拔了直接连接摩登，还是一个鸟样。。。。。。
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NBA新秀, 积分 65, 距离下一级还需 85 积分
哎，果然不只我出现这种情况，TX这个坑货也不给个说法
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NBA新秀, 积分 115, 距离下一级还需 35 积分
游戏真心牛逼啊！我打着球不说网络错误，每次打完以后出来个网络错误，这游戏太坑了。网络有问题不会早点提示网络错误，偏偏打完以后再说，妈的，赢了球最后来个网络错误！这游戏真心牛鼻 啊
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不作就不会死
A级球员, 积分 25859, 距离下一级还需 14141 积分
还是服务器网络问题吧，我上周也出现了一次这样的情况，这周没维护，不知道下周会不会修复
智商是硬伤
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自由球员, 积分 25, 距离下一级还需 25 积分
今天还是这情况，TX真心坑啊
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饮水机员, 积分 1015, 距离下一级还需 185 积分
tx 抽风&&尼玛 之前锦标赛一点都不卡& &突然有一天 就开始 网络错误。。。。等好几次 才能登上去& &信号一直是黄色的 一直到现在俱乐部 卡的都不显示 我擦 TX是不嫌我们不花钱的 不充钱了！1黑我们啊！？ 我就服了&&服务器都一年了&&你们忙啥呢每天？游戏商城倒是更新挺勤！！
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自由球员, 积分 15, 距离下一级还需 35 积分
同样的问题，玩一会儿就他妈掉~~说网络错误 明明没问题的，TX 也没个说法！还算逃跑·cao
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潜力替补, 积分 3460, 距离下一级还需 1540 积分
xdxiaodu 发表于
游戏真心牛逼啊！我打着球不说网络错误，每次打完以后出来个网络错误，这游戏太坑了。网络有问题不会早点提 ...
不用管这个，后面程序一样会运行，如果组队的话，出来还可以玩
个人宣言：恶心人的给我滚的越远越好。
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最佳新人, 积分 180, 距离下一级还需 420 积分
都一样&&我今天都掉了四五次了&&气死我了&&tx赶紧出来管一管&&
世间无绝对
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自由球员, 积分 15, 距离下一级还需 35 积分
真心说坑爹啊。。。& &&&我是每次登陆的时候出现这现象的&&哎& &，。。。。。。。。。
那位高手的& &求解释啊
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自由球员, 积分 25, 距离下一级还需 25 积分
真恶心&&草 登了一周都登不上啊
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自由球员, 积分 40, 距离下一级还需 10 积分
你这个问题怎么解决的
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自由球员, 积分 5, 距离下一级还需 45 积分
我也一样&&都重新下载也没用
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自由球员, 积分 15, 距离下一级还需 35 积分
我也是啊 草 今天一直这样 急死咯
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NBA新秀, 积分 145, 距离下一级还需 5 积分
一直这样，从装还是没用，问客服客服说你网有问题，我就呵呵了，排位各种掉，都要打完了咔咔就是网络错误，今儿匹配热火雷霆，匹配6把，掉了6把，这机率100%，我就*了！！！
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最佳新人, 积分 425, 距离下一级还需 175 积分
xdxiaodu 发表于
游戏真心牛逼啊！我打着球不说网络错误，每次打完以后出来个网络错误，这游戏太坑了。网络有问题不会早点提 ...
这游戏略屌，游戏问题找客服，随便忽悠一下就说网络问题，20m光纤基本没试过断网，也是网络错误，服务器不行怪我咯
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自由球员, 积分 10, 距离下一级还需 40 积分
这一天掉10多次&&受不了啊
最后登录QQ注册时间阅读权限10精华0积分10帖子
自由球员, 积分 10, 距离下一级还需 40 积分
最近nba2k online登录后经常性的网络错误，连接用的是CMCC-EDU，没办法设置静态IP，不知道游戏官方给出什么解释，为何网络好好的但总是出现网络错误？
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重组质粒一直连接不上，求助。。。。
我最近构建一个质粒，将目的基因片段（250bp）,连接到表达载体上（1 5000 bp）。但是连接后涂扳一直没上出想要的菌落来。方法如下：
先将目的基因连接于T载体，然后同时用kpn 1 和 sac 1 双酶切 T载体 和表达载体，并凝胶电泳回收目的片段及双酶切后的表达载体，然后进行重组连接。
连接用的TAKARA T4酶 10ul体系。1ul 酶，1ul buffer,其余加载体和片段，试了很多比例（载体：片段=1:1,3:1,10:1,20:1 1:10 都没有成功），连接16℃过夜12-14h。
涂扳后16小时内基本不长什么菌落，或者长的话也很小根本不好挑，长大了挑做PCR要么阴性要么假阳性。做了快2个月了，一直不知道问题出在哪啊，都要崩溃了。特在此求助各位虫友啦。谢谢啦
附上我胶回收的2张图片，请大家帮忙分析一下啊，不胜感激。:)
左边为双酶切的表达载体质粒，右边是目的片段.jpg
胶回收后的电泳.jpg
T4酶换的是新的，培养基也是新的，做另一个克隆的时候也没有问题呢。
blunt end切的话最具怎么操作呢？
之前用这个表达载体也重组过了个质粒。而且抗生素已经减量了，但还是一样的结果。 我之前用的感受态是全式金的Trans1-T1 和Trans10，但是结果都这样。怎么知道插入片段是否有毒性呢？
谢谢。这些因素都考虑过了的，我已经加大回收量多次过柱来提高浓度了，但一直没获得我要的阳性克隆啊。
我建议你先将连接产物跑电泳，看看有没有连上。
如果连上了说明是转化的问题。一般50ul的感受态细胞加入2~5ul的连接产物，这样不会改变感受态细胞的生存环境，如果连接产物用多了的话也有可能不长菌落。
如果没有连接上的话，很可能是因为你的15000bp载体并没有切干净，所以连接效果不好。建议你重新酶切
我的载体是20Ul酶切4-5个小时.是否可以考虑换成10ul体系切2小时然后一起回收呢？
连接产物跑电泳是看不出来的，因为连接的效率本来就很低，所以还得做转化筛选阳性克隆。
我换了NEB的T4酶，结果还是和以前一样，没有连接上呢。你的是什么情况？可以说出来大家一起讨论哈
我第一次做的时候，只长了一个菌，然后酶切、PCR都对，去测序，目的蛋白也没问题，但是后来发现载体突变， 所以失败。
第二次长了很多很多，但是都是假阳性的。所以失败。
第三次一个也没长。
今天在做一批试试。。。。。。只能是试试
你们做连接的时候是怎么算U值，然后确定加多少样连的？我老师让我重新算好再确定比例连接。:jok:
你连接体系和比例怎么样，我是16℃过夜连的。
我们一般10ul体系加1ul，mbi的t4，5u/ul。摩尔比3:1。buffer用自带buffer和自带peg4000作连接液。都算做10倍，都加1ul
现在，怎么样了:)
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本帖最后由 edisionmao 于
11:53 编辑
电视连不上网，之前可以连接wifi，后来突然不行了，现在路由器放电视旁边，还是连不上，但手机可以正常上网，求助，急急急
固件版本号 ZLM65HiS2-V1.00035-EMMC
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1.路由器重启下，在重新连接。
2.电视回复下出厂设置重新连接。
3.电视试下用有线连接看看。
英雄不问出处，流氓不看岁数
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电视断电1分钟后再通电开机就ok了
长虹社区 | 综合2群
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四川长虹电器股份有限公司 &查看: 49|回复: 2
初心者, 积分 2, 距离下一级还需 123 积分
发表于 昨天&14:30
我都能上网站发帖，不是我家网络问题。实在更新还是维护吗？维护要有公告啊
发表于 昨天&14:34
您好建议您切换网络尝试下麻烦了
初心者, 积分 2, 距离下一级还需 123 积分
发表于 昨天&14:38
不会游泳的海神 发表于
您好建议您切换网络尝试下麻烦了
谢谢回复，但是我在店上和在家里都不行啊，而且还用了4G网络 ，还是不行.....账号aironghuxp1

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