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糖类硅胶G薄层层析实验方法
薄层层析是一种广泛应用于氨基酸,多肽,核苷酸,脂肪类,糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。由于层析是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的,所以称之为薄层层析。
薄层层析的主要原理是,根据样品组分与吸附剂的吸附力及其在展层溶剂中的分配系数的不同而使混合物分离。糖类硅胶G薄层层析实验方法
【目的和要求】
1、了解并初步掌握吸附层析的原理。
2、学习薄层层析的一般操作及定性与定量鉴定的方法。
薄层层析是一种广泛应用于氨基酸，多肽，核苷酸，脂肪类，糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。由于层析是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的，所以称之为薄层层析。
薄层层析的主要原理是，根据样品组分与吸附剂的吸附力及其在展层溶剂中的分配系数的不同而使混合物分离。当展层溶剂移动时，会带着混合样品中的各组分一起移动，并不断发生吸附与解吸作用以及反复分配作用。根据各组分在溶剂中溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列的斑点。如果把标准样品在同一层析薄板上一起展开，便可通过在同一薄板上的已知标准样品的Rf值和未知样品各组分的Rf值进行对照，就可初步鉴定未知样品各组分的成分。
薄层层析根据所支持物的性质和分离机制的不同包括吸附层析，离子交换层析和凝胶过滤等。糖的分离鉴定可用吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上，可使薄层粘牢在玻璃板(或涤沦片基)这类基底上。
硅胶G是一种已添加了黏合剂石膏(CaSO4)的硅胶粉，糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关，经适当的溶剂展开后，糖在硅胶G薄析上的移动距离为戊糖>已糖>双糖>三糖。若采用硼酸溶液代替水调制硅胶G制成的薄板可提高高糖的分离效果。如对已分开的斑点显色，而将与它位置相当的另一个未显色的斑点从薄层上与硅胶G一起刮下，以适当的溶液将糖从硅胶G上洗脱下来，就可用糖的定量测定方法测出样品中各组分的糖含量。
薄层层析的展层方式有上行，下行和近水平等。一般常采用上行法，即在具有密闭盖子的玻璃缸(即层析缸)中进行，将适量的展层溶液倒于缸底，把点有样品的薄层板放入缸中即可(如图1所示)。保证层析缸内有充分展层溶剂的饱和蒸气是实验成功的关键。与纸层析，柱层析等方法比较，薄层层析有明显的优点：操作方便，层析时间短，可分离各种化合物，样品用量少(0。1至几十向微克的样品均可分离)，比纸层析灵敏度高10～100倍，显色和观察结果方便，如薄层由无机物制成，可用浓硫酸，浓盐酸等腐蚀性显色剂。因此，薄层层析是一项实验常用的分离技术，其应用范围主要在生物化学，医药卫生，化学工业，家业生产，食品和毒理分析等领域，对于天然化合物的分离和鉴定也已广泛应用。
【操作方法】
1、硅胶G薄层板的制备将制备薄层用的玻璃板预先用洗液洗干净并烘干，玻璃板要求表面光滑。称取硅胶G粉6g，加入12mL 0.1mol/L硼酸溶液，用玻棒在烧杯中慢慢搅拌至硅胶浆液分散均匀，黏稠度适中，然后倾倒在干净，干燥的坡璃板上，倾斜玻璃或用玻棒将硅胶G由一端向另一端推动，使硅胶G铺成厚薄均匀的薄层。待薄板表面水分开干燥后置于烘箱内，待温度升至110℃后活化30min。冷却至室温后取出，置于干燥器中备用(注意：避免薄板骤热，骤冷使薄层断裂或在展层过程中脱落)。制成的薄层板，要求表面平整，厚薄均匀。
手工涂布薄板的方法：(1)玻棒涂布：选用一根直径为1～1.2cm的玻璃棒或玻璃管在两端绕几圈胶布，胶布的圈数视薄层的厚度而定，常用厚度为0.56～1.0mm，把吸附剂倒在玻璃板上，用这根玻璃棒在玻璃上将吸附剂向一个方向推动，即成薄板。(2)倾斜涂布：将吸附剂浆液倒在玻璃上，然后倾斜使吸附剂漫布于玻板上面成薄层。
2、点样取制备好的薄板一块，在距底边1.5cm处划一条直线，在直线上每隔1.5～2cm作为
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