美国及欧洲药典系统适应性要求-土地公文库
美国及欧洲药典系统适应性要求
美国及欧洲药典系统适应性要求
是溶剂前沿到基线的距离 峰谷比( ) 峰谷比(p/v) 做有关物质的系统适应性测试时, 如果两峰 之间的基线分离效果不好, 可以用峰谷比作 为评价依据(图
系统适应性——美国药典系统适应性是气相和液相色谱分析方法的重要组成部分，用于证明色谱系统的分离度和重现性能满足样品的分析要求。测试基于这样的原理：仪器、电路、方法和样品组成一个整体系统，我们可以对这个系统进行测试评估。 影响色谱系统的因素包括：? 流动相的组成、离子强度、温度和pH值? 柱子大小、流速、柱温和压力 ? 固定相特点，包括填料类型，载体形状、粒径、孔径、表面积等。 ? 常用固定相为反相硅胶，以十八碳烷基健合硅胶最常用，其它经过化学修饰的硅胶也有使用。分离度Rs是理论塔板数n的函数（也叫柱效），α是分离因子，k是容量因子（所有符号的意义见前文“色谱定义和说明”部分）。在规定的色谱条件下，n表示洗脱物中相邻化合物的分离程度，可作为衡量色谱系统柱效能的指标，但是不如直接测试的结果可靠。峰的尖锐程度部分反映柱效，这个参数对检查微量物质至关重要。标准品或者标准溶液需要重复进样以确保精密度。除非个论中有规定, 系统适用性五针的数据的相对标准偏差不超过如果超过的话, 需要进样六针。在含量测定中，如果纯品含量100%，则相对标准偏差没有最大值限制，这个值可根据多次进样对照溶液来计算：%RSD=KB 90%，n-1K为常数由公式k=(时六次进样的相对标准偏差。B是个案中规定的上限。n是对照溶液的进样次数（3≤n≤6），t90%,n-1是自由度为n-1、置信水平为90%，双侧检验时的t值。除非另有规定，RSD不能超过下表中的值。此规定不适用于相关物质检测。对称因子AS，用于衡量峰的对称性，完全对称时值为1。拖尾越严重，AS的值越大（见图4）。偶尔也会有值小于1的情况。如果对称因子与1的差值越大，则积分的精密度越差。信噪比（S/N）是系统适应性的一个重要参数，计算公式如下（图5）：S/N = 2H/hH是峰高，即峰最高点到基线的距离；h是噪音最大值和最小值之间的差值。系统适应性测试的数据通过重复进样标准品或者特定文件中规定的对照溶液而得到，此文件中对相关参数的定义同样适用于其它操作条件，以下情况可做相应调整： ? 标准品（包括参考物质）对适应性测试中的所有化合物均适用?在系统适应性测试中为改进色谱系统性能而作适当调整对色谱系统的调整不能弥补柱子和系统本身的缺陷。第1 / 9页
全文分9页阅读高效液相色谱法习题；一、思考题；1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相；7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱；10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色；13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？；14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何；16．以液相色谱进行制备有什么优点？17．在毛细；二、选择题；1．液相色谱适宜
高效液相色谱法习题
一、思考题
1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么?
4．液相色谱有几种类型? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么?
10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？
12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？ 13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理
14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？ 16．以液相色谱进行制备有什么优点？ 17．在毛细管中实现电泳分离有什么优点？ 18．试述CZE的基本原理 19．试述CGE的基本原理 20．试述MECC的基本原理 二、选择题
1．液相色谱适宜的分析对象是（
低沸点小分子有机化合物
高沸点大分子有机化合物
所有有机化合物
所有化合物 2．HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为（
柱前压力高
流速比GC的快
流动相钻度较小
柱温低 3．组分在固定相中的质量为MA(g)，在流动相中的质量为MB（g），而该组分在固定相中的浓度为CA（g?mL－1－1），在流动相中浓度为CB（g?mL），则此组分的分配系数是(
CA/CB。 4．液相色谱定量分析时，不要求混合物中每一个组分都出峰的是＿。
外标标准曲线法
面积归一化法
5．在液相色谱中，为了改善分离的选择性，下列措施（
）是有效的？
改变流动相种类
改变固定相类型
改变填料的粒度
6．在分配色谱法与化学键合相色谱法中，选择不同类别的溶剂（分子间作用力不同），以改善分离度，主要是（
提高分配系数比
容量因子增大
保留时间增长
色谱柱柱效提高 7．分离结构异构体，在下述四种方法中最适当的选择是（
反离子对色谱
空间排阻色谱 8．分离糖类化合物，选以下的柱子（
）最合适。 A
氨基键合相柱
氰基键合相柱
9．在液相色谱中，梯度洗脱适用于分离（
沸点相近，官能团相同的化合物
沸点相差大的试样
极性变化范围宽的试样 10．在高效液相色谱中，采用254 nm紫外控制器，下述溶剂的使用极限为（
甲醇210 nm
乙酸乙醋260 nm
丙酮330 nm 11吸附作用在下面哪种色谱方法中起主要作用（
液一液色谱法
液一固色谱法
键合相色谱法
离子交换法 12．当用硅胶为基质的填料作固定相时，流动相的pH范围应为（
在中性区域
2一8 13．在液相色谱中，提高色谱柱柱效的最有效途径是（
减小填料粒度
适当升高柱温
降低流动相的流速
增大流动相的流速 14．在正相色谱中，若适当增大流动相极性则（
样品的k降低，tR降低
样品的k增加，tR增加
相邻组分的?增加
对?基本无影响 15．用ODS柱分析一有机弱酸混合物样品，以某一比例甲醇一水为流动相时，样品容量因子较小，若想使容量因子适当增加，较好的办法是（
增加流动相中甲醇的比例
增加流动相中的水的比例
流动相中加人少量HAc
流动相中加人少量的氨水 16．如果样品比较复杂，相邻两峰间距离太近或操作条件不易控制稳定，要准确测量保留值有一定困难时，可选择以下方法（
利用相对保留值定性
加人已知物增加峰高的办法定性
利用文献保留值数据定性
与化学方法配合进行定性 17．液相色谱中通用型检测器是（
紫外吸收检测器
示差折光检测器
热导池检测器
荧光检测器 18．离子色谱的主要特点是（
高压、高效、高速、高分辨率、高灵敏度
采用柱后抑制技术和电导检测，特别适合离子分析
采用了阴离子专用检测器，对阴离子分析有高灵敏度
采用紫外检测器合柱压衍生装置，对离子分析有高效 19．高压、高效、高速是现代液相色谱的特点，采用高压主要是由于（
可加快流速，缩短分析时间
高压可使分离效率显著提高 C
采用了细粒度固定相所致
采用了填充毛细管柱 20．液相色谱的H一u曲线（
与气相色谱的一样，存在着Hmin
H随流动相的流速增加而下降
H随流动相的流速增加而上升
H受u影响很小 21与气相色谱相比，在液相色谱中（
分子扩散项很小，可忽略不计，速率方程式由两项构成
涡流扩散项很小，可忽略不计，速率方程式由两项构成
传质阻力项很小，可忽略不计，速率方程式由两项构成
速率方程式同样由三项构成，两者相同 22．在液相色谱中，下列检测器可在获得色谱流出曲线的基础上，同时获得被分离组分的三维彩色图形的是（
光电二极管阵列检测器
示差折光检测器
荧光检测器
电化学检测器
23．不同类型的有机物，在极性吸附剂上的保留顺序是（
饱和烃、烯烃、芳烃、醚
醚、烯烃、芳烃、饱和烃
烯烃、醚、饱和烃、芳烃
醚、芳烃、烯烃、饱和烃 24．氧化铝固定相色谱柱不适合选哪种物质作流动相（
环烷酸 25．液相色谱中不影响色谱峰扩展的因素是（
涡流扩散项
分子扩散项
传质扩散项
柱压效应 26．在液相色谱中，常用作固定相又可用作键合相基体的物质是（
27．样品中各组分的出柱顺序与流动相的性质无关的色谱是（
离子交换色谱
环糊精色谱
28．在液相色谱中，固体吸附剂适用于分离（
沸点相近，官能团相同的颗粒
沸点相差大的试样
极性变换范围
29．为测定邻氨基苯酸中微量杂质苯胺，选择下面哪种条件（
硅胶固定相，异丙醚一己烷流动相
硅胶固定相，水一甲醇流动相；
ODS键合相，水一甲醇流动相
ODS键合相，异丙醚一己烷流动相。 30．在以硅胶为固定相的吸附柱色谱中，错误的说法是（
组分的极性越强，被固定相吸附的作用越强
物质的相对分子质量越大，越有利于吸附
流动相的极性越强，组分越容易被固定相所吸附
吸附剂的活度系数越小，对组分的吸附力越大
31．键合相的键合基团的碳链长度增长后（
载样量增大
载样量减小 32．在反相色谱法中，若以甲醇一水为流动相，增加甲醇的比例时，组分的容量因子k与保留时间tR的变化为（
k增大，tR减小 33水在下述色谱中，洗脱能力最弱（作为底剂）的是（
正相色谱法
反相色谱法
吸附色谱法
空间排斥色谱法 34．在下列方法中，组分的纵向扩散可忽略不计的是（
毛细管气相色谱法
高效液相色谱法
气相色谱法
超临界色谱法 三、填空题
1．高效液相色谱仪一般可分为
梯度淋洗系统
高压输液泵
、 流量控制系统
、进样系统
分离柱及检测器
等部分。 2．常用的高效液相色谱检测器主要是
、 示差折光
检测器等。 3．高效液相色谱中的
技术类似于气相色谱中的程序升温，不过前者连续改变的是流动相的
组成与极性
，而不是温度。 4．高效液相色谱柱按内径大小大致可分为三种类型：内径小于
mm的称为细管
或微管径柱；内径在
mm范围内的是常规高效液相色谱柱；内径大于
mm的一般成为半制备柱或制备柱。 5．高效液相色谱固定相的性质和结构的差异，使分离机理不同而构成各种色谱类型，主要有
液-固吸附色谱
、 液-液分配色谱
离子交换色谱
等。 6．在液－液分配色谱中，对于亲水固定液采用
流动相，即流动相的极性
_______________固定相的极性称为正相分配色谱。 7．正相分配色谱适用于分离
化合物、极性
的先流出、极性
的后流出。 8．流动相常用的脱气方法有
。 9．高压输液泵是高效液相色谱仪的关键部件之一，按其工作原理分为
两大类。 10．离子对色谱分配容量（k）与萃取平衡常数（KRP）关系：正相离子对色谱
；反相离子对色谱
。 11．离子对色谱法是把
加人流动相中，被分析样品离子与
生成中性离子对，从而增加了样品离子在非极性固定相中的
增加，从而改善分离效果。 12．无抑制离子色谱法的固定相采用离子交换树脂，流动相是
溶液，采用
检测器。 13．在液相色谱中，溶质分子与极性吸附中心的相互作用，会随溶质分子上官能团极性的__________或官能团数目的
而增加，这会使溶质在固定相上的保留值______。 14．色谱操作时，如果超载，即进样量超过柱容量，则柱效迅速_______，峰变________。 15．
是现代液相色谱的显著特点，其固定相多采用
。 16．高效液相色谱的发展趋势是减小
以提高柱效。 17．在液相色谱中，为改善分离度并调整出峰时间，可通过改变流动相
和______的方法达到。 18．在液相色谱中，速率理论方程中的
项很小，可忽略不计，van Deemter方程式可写成
。 19．通过化学反应，将
表面，此固定相称为化学键合固定相。 20．与液一液分配色谱相比，键合相色谱的主要优点是化学键合固定相稳定，在使用过程中
；适合于k范围宽的样品分析。 21．液相色谱流动相应使用
黏度溶剂，可减小溶质的
，有利于提高柱效。 22．在液相色谱中，
色谱特别适合于分离异构体，
洗脱方式适用于分离极性变化范围宽的试样。
23．以ODS键合固定相，甲醇一
为流动相时，该色谱条件为
色谱。 24．用凝胶为固定相，利用凝胶的
与被分离组分分子
间的相对大小关系，而分离、分析的色谱法，称为空间排阻（凝胶）色谱法。凝胶色谱的选择性只能通过选择合适的
来实现。 25．在正相色谱中，极性的
组分先出峰，极性的
组分后出峰。 四、正误判断
1．液一液色谱流动相与被分离物质相互作用，流动相极性的微小变化，都会使组分的保留值出现较大的改变。
） 2．利用离子交换剂作固定相的色谱法称为离子交换色谱法。
） 3．紫外吸收检测器是离子交换色谱法通用型检测器。
） 4．检测器性能好坏将对组分分离产生直接影响。
） 5．色谱归一化法只能适用于检测器对所有组分均有响应的情况。
） 6．高效液相色谱适用于大分子，热不稳定及生物试样的分析。
） 7．高效液相色谱中通常采用调节分离温度和流动相流速来改善分离效果。
） 8．离子交换键合固定相具有机械性能稳定，可使用小粒度固定相和高柱压来实现快速分离。
） 9．离子色谱中，在分析柱和检测器之间增加了一个“抑制柱”，以增加洗脱液本底电导。 （
） 10．在液相色谱中为避免固定相的流失，流动相与固定相的极性差别越大越好。 （
） 11．正相分配色谱的流动相极性大于固定相极性。
） 12．反相分配色谱适于非极性化合物的分离。
） 13．高效液相色谱法采用梯度洗脱，是为了改变被测组分的保留值，提高分离度。（
） 14．液相色谱柱一般采用不锈钢柱、玻璃填充柱。
） 15．液相色谱固定相通常为粒度5～ 10 m。
16．示差折光检测器是属于通用型检测器，适于梯度淋洗色谱。
） 17．离子交换色谱主要选用有机物作流动相。
） 18．体积排阻色谱所用的溶剂应与凝胶相似，主要是防止溶剂吸附。
） 19．在液一液色谱中，为改善分离效果，可采用梯度洗脱。
） 20．化学键合固定相具有良好的热稳定性，不易吸水，不易流失，可用梯度洗脱。（
） 21．液相色谱的流动相又称为淋洗液，改变淋洗液的组成、极性可显著改变组分分离效果。（
） 22．液相色谱指的是流动相是液体，固定相也是液体的色谱。
） 23．高效液相色谱柱柱效高，凡是能用液相色谱分析的样品不用气相色谱法分析。（
） 24．在液相色谱中，流动相的流速变化对柱效影响不大。
） 25．液相色谱的H一u曲线与气相色谱的H一u一样，流速都存在一个最低点。 （
） 26．液相色谱的中引起色谱扩展的主要原因是分子扩散项。
） 27．正相键合色谱的固定相为非（弱）极性固定相，反相色谱的固定相为极性固定相。 （
） 28．某人用凝胶色谱分离易高聚物样品，分离情况很差，他改变流动相的组成后，分离情况大为改进，这种说法对吗？
） 29．在离子交换色谱中使用的固定相也属于一种键合固定相。
） 30．离子对色谱也可分为正相离子和反相离子对色谱，反相离子对色谱，通常采用极性固定相。
?高效液项色谱法习题解答
一、思考题
1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。 答：二者都是根据样品组分与流动相和固定相相互作用力的差别进行分离的。
从仪器构造上看，液相色谱需要增加高压泵以提高流动相的流动速度，克服阻力。同时液相色谱所采用的固定相种类要比气相色谱丰富的多，分离方式也比较多样。气相色谱的检测器主要采用热导检测器、氢焰检测器和火焰光度检测器等。而液相色谱则多使用紫外检测器、荧光检测器及电化学检测器等。但是二者均可与MS等联用。
二者均具分离能力高、灵敏度高、分析速度快，操作方便等优点，但沸点太高的物质或热稳定性差的物质难以用气相色谱进行分析。而只要试样能够制成溶液，既可用于HPLC分析，而不受沸点高、热稳定性差、相对分子量大的限制。
2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处?
答：液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动的流动相传质、滞留的流动相传质以及柱外效应。
在气相色谱中径向扩散往往比较显著，而液相色谱中径向扩散的影响较弱，往往可以忽略。另外，在液相色谱中还存在比较显著的滞留流动相传质及柱外效应。
3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么?
答：液相色谱中提高柱效的途径主要有：
（1）提高柱内填料装填的均匀性；
（2）改进固定相：
（3）粒度; 选择薄壳形担体; 选用低粘度的流动相;
（4）适当提高柱温
其中，减小粒度是最有效的途径。.
4．液相色谱有几种类型?
答：液相色谱有以下几种类型：液-液分配色谱；液-固吸附色谱；化学键合色谱；离子交换色谱；离子对色谱；空间排阻色谱等。 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 答：液－液分配色谱的保留机理是通过组分在固定相和流动相间的多次分配进行分离的。可以分离各种无机、有机化合物。 6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 答：液-固吸附色谱是通过组分在两相间的多次吸附与解吸平衡实现分离的。最适宜分离的物质为中等相对分子质量的油溶性试样，凡是能够用薄层色谱分离的物质均可用此法分离。 7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
答：化学键合色谱中由于键合基团不能全部覆盖具有吸附能力的载体，所以同时遵循吸附和分配的机理，最适宜分离的物质为与液-液色谱相同。
8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？
答：离子交换色谱和离子色谱是通过组分与固定相间亲合力差别而实现分离的。各种离子及在溶液中能够离解的物质均可实现分离，包括无机化合物、有机物及生物分子，如氨基酸、核酸及蛋白质等。
9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么?
答：在离子对色谱色谱中，样品组分进入色谱柱后，组分的离子与对离子相互作用生成中性化合物，从而被固定相分配或吸附进而实现分离的。各种有机酸碱特别是核酸、核苷、生物碱等的分离是离子对色谱的特点。
10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？ 答：空间排阻色谱是利用凝胶固定相的孔径与被分离组分分子间的相对大小关系，而分离、分析的方法。最适宜分离的物质是：
另外，尚有手性色谱、胶束色谱、环糊精色谱及亲合色谱等机理。
11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？
答：采用正相及反相色谱是为了降低固定液在流动相中的溶解度从而避免固定液的流失。
12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？ 答：利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面形成的固定相称为化学键合固定相。
优点：固定相表面没有液坑,比一般液体固定相传质快的多；无固定相流失，增加了色谱柱的稳定性及寿命；可以键合不同的官能团，能灵活地改变选择性，可应用与多种色谱类型及样品的分析；有利于梯度洗提，也有利于配用灵敏的检测器和馏分的收集。 13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理
答：在离子色谱中检测器为电导检测器，以电解质溶液作为流动相，为了消除强电解质背景对电导检测器R?H??Na?OH??R?Na??H2OR?H??Na?X??R?Na??H?X?的干扰，通常除了分析柱外，还增加一根抑制柱，这种双柱型离子色谱法称为化学抑制型离子色谱法。
例如，为了分离阴离子，常使用NaOH溶液为流动相，钠离子的干扰非常严重，这时可在分析柱后加一+根抑制柱，其中装填高容量H型阳离子交换树脂，通过离子交换，使NaOH转化为电导值很小的H2O，从而消除了背景电导的影响。
-４-4但是如果选用低电导的流动相（如１×10~ 5 ×10M的苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐），则由于背景电导较低，不干扰样品的检测，这时候不必加抑制柱，只使用分析柱，称为非抑制型离子色谱法。
14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？ 答：在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗提，是改进液相色谱分离的重要手段。
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