社会化媒体
了解更多>>
桂ICP备 号
桂公网安备 36号
阅读下一篇
Hi，在你登录以后，就可以永久免费的收藏任何您感兴趣的内容，关注感兴趣的作者！
请输入正确的邮箱
已有帐号请点击
帐号创建成功！
我们刚刚给你发送了一封验证邮件
请在48小时内查收邮件,并按照提示验证邮箱
感谢你对微口网的信任与支持
如果你没有收到邮件，请留意垃圾箱 或 重新发送
你输入的邮箱还未注册
还没有帐号请点击
你输入的邮箱还未注册
又想起来了？
邮件发送成功！
我们刚刚给你发送了一封邮件
请在5分钟内查收邮件,并按照提示重置密码
感谢你对微口网的信任与支持
如果你没有收到邮件，请留意垃圾箱 或 重新发送
对不起，你的帐号尚未验证
如果你没有收到邮件，请留意垃圾箱 或
意见与建议
请留下您的联系方式
* 留下您正确的联系方式，以便工作人员尽快与你取得联系上传用户：byxeefoqij资料价格：5财富值&&『』文档下载 ：『』&&『』学位专业：&关 键 词 ：&&&&&&&权力声明：若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请点击。摘要:（摘要内容经过系统自动伪原创处理以避免复制，下载原文正常，内容请直接查看目录。）本文环绕微生物代谢进程展开研讨，起首构建年夜肠杆菌中间碳代谢收集，然后以代谢均衡剖析(Flux BalanceAnalysis，FBA)办法为基本，拔取E。coli1。1566及有代表性的中间碳代谢门路单基因敲除年夜肠杆菌停止考核，包含△sdhAB、△ackA一pta基因敲除年夜肠杆菌。在MATLAB6。1情况下，运用CellNetAnalyzer软件盘算，以最年夜比发展速度(μ)为优化目的函数求解。通量值以胞外碳水化合物进入胞内的速度为尺度停止归一化，获得野生型年夜肠杆菌胞内里心碳代谢门路的通量散布，和敲除分歧基因年夜肠杆菌与野生型的代谢通量比较。并经由过程代谢通量剖析考核了这些单基因敲除对年夜肠杆菌代谢的影响，借以懂得各菌株的重要代谢特点。为客不雅反应微生物细胞代谢物组的真实情形，树立疾速微生物代谢淬灭(quenching)办法和尺度化胞内代谢物提取办法，同时树立基于气相色谱和质谱联用的细菌胞内代谢物剖析办法。研讨应用分歧无机溶剂疾速淬灭细胞代谢运动的才能，挑选分歧萃取计划对微生物细胞代谢物提取效力的差别，经由过程析因剖析挑选出对细胞淬灭后果有明显影响的无机溶剂冷乙腈，同时为了进步硅烷化衍失效率，对GC一MS衍生前提也作了进一步的优化，成果注解：冻干后的胞内代谢物中参加50μL吡啶，超生10min消融后，再参加60μL BSTFA+1%TMS，75℃水浴45min，使提取到的代谢物品种较多且总量较年夜。为“全组分”指纹剖析供给靠得住的条件前提，为进一步代谢门路剖析打下了基本。对苯二甲酸(PTA)是一种主要的化工原料，为了研讨生物催化对二甲苯(PX)生成对苯二甲酸(PTA)的代谢门路，树立了对苯二甲酸、对甲基苯甲醛、对甲基苯甲醇、对甲基苯甲酸的高效液相色谱剖析办法。采取Hypersil SAX阴离子交流柱，活动相为2。5mol/LNH4H2PO4含10%的乙腈溶液，pH4。32，流速0。8mL/min，柱温30℃，紫外检测波长为254nm。在此色谱前提下，各组分在7min内获得很好的分别，收受接管率相符含量测定请求。应用该办法测定睾丸酮丛毛单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌生物催化生成对苯二甲酸分歧发酵时光发酵液中重要代谢物含量，并联合GC一MS办法检测胞内代谢物，包含无机酸、氨基酸、糖及长链脂肪酸等，剖析了睾丸酮丛毛单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌协同感化催化对二甲苯生成对苯二甲酸的代谢门路。Abstract:In this paper, we study the metabolic process of microorganisms, and construct the intermediate carbon metabolism of Flux, and then take the BalanceAnalysis E (FBA) method as the basic. Coli1. 1566 and representative intermediate carbon metabolism opportunities single gene knock in large intestine Bacillus examination, contains] sdhAB,] acka PTA gene knock in addition to the eve of the Enterobacteriaceae. At MATLAB6. 1 case, the use of CellNetAnalyzer software to calculate, with the most of the speed of development (MU) for the optimization objective function to solve. The flux values were normalized by the rate at which the extracellular carbohydrates were entered into the cell, and the flux distribution, and the metabolic flux of the wild type, were obtained by the addition of different genes. And through metabolic flux analysis, the effect of these single gene knock on the metabolism of the gut bacteria, so as to understand the important metabolic characteristics of the strains. For the real situation of the microbial cell metabolite group, establish the rapid microbial metabolic quenching (quenching) method and the scale of the intracellular metabolite extraction method, and establish the analysis method based on gas chromatography and mass spectrometry. Research using different inorganic solvent rapid quenching arc motion of cell metabolism to, choose different extraction plan difference effect on Extraction of the metabolites of microbial cells, via condensate process for analysis of selected of quenching in cells destroy the consequences of a significant effect of inorganic solvent cold acetonitrile. At the same time, in order to improve the silylated derivatives loss of efficiency, of GC MS derived premise for further optimization, results notes: the lyophilized after intracellular metabolites in 50 mu l pyridine. After 10min ultrasonic ablation, to participate in a 60 mu L BSTFA+1%TMS, 75 DEG C water bath for 45 min, the extracted metabolic goods species and more than the total of the eve of the. As the &components& fingerprint analysis provides reliable conditions, lay the foundation for further analysis of the metabolic way. Terephthalic acid (PTA) is a main chemical raw material, in order to study the biological catalytic paraxylene (PX) generate metabolic channels of the terephthalic acid (PTA) and establish the terephthalic acid, methyl benzaldehyde, methyl benzene methanol, methyl benzoic acid by high performance liquid chromatography analysis method. Take SAX Hypersil anion exchange column, the activity is 2. 5mol/LNH4H2PO4 containing 10% acetonitrile solution, pH4. 32, flow rate 0. 8mL/min, column temperature 30, UV detection wavelength was 254nm. Under the premise of the above, the 7min were obtained from the good, the acceptance rate of the acceptance rate was consistent with the content of the request. Application the way Comamonas testosterone and determination of malt narrow food single cell bacteria catalyzes the formation of terephthalic acid differences of be addicted to fermentation time in fermentation liquid metabolites content, and in combination with GC MS detection of intracellular metabolites, contains inorganic acid, amino acids, sugars and long chain fatty acids, analyzes the Comamonas testosterone and Aeromonas malt narrow food single cell bacteria synergistic effect catalytic p-xylene form terephthalic acid metabolism opportunities.目录:摘要4-5Abstract5-6目录7-11第一章 文献综述11-27&&&&1.1 代谢组学及其在微生物领域的研究进展11-16&&&&&&&&1.1.1 代谢组学11-14&&&&&&&&&&&&1.1.1.1 代谢组学研究的几个层次11-12&&&&&&&&&&&&1.1.1.2 代谢组学技术平台12-13&&&&&&&&&&&&1.1.1.3 代谢组学解析流程13&&&&&&&&&&&&1.1.1.4 代谢组学的生物分析策略13-14&&&&&&&&1.1.2 代谢组学在微生物研究中的应用14-16&&&&&&&&&&&&1.1.2.1 微生物代谢组学15&&&&&&&&&&&&1.1.2.2 代谢途径研究及发酵过程中细胞生理生化状态测定方面的应用15-16&&&&&&&&&&&&1.1.2.3 代谢组学在微生物代谢工程学中的应用16&&&&&&&&&&&&1.1.2.4 环境微生物研究16&&&&1.2 微生物代谢物的提取16-18&&&&&&&&1.2.1 具有代表性的生物样品的获得16-17&&&&&&&&1.2.2 快速样品制备和淬灭17&&&&&&&&1.2.3 实验设计17-18&&&&1.3 代谢网络定量分析18-23&&&&&&&&1.3.1 代谢控制分析18-20&&&&&&&&&&&&1.3.1.1 基本理论19-20&&&&&&&&&&&&1.3.1.2 应用20&&&&&&&&1.3.2 代谢通量分析20-23&&&&&&&&&&&&1.3.2.1 基本理论20-21&&&&&&&&&&&&1.3.2.2 应用21-22&&&&&&&&&&&&1.3.2.3 代谢平衡分析22-23&&&&1.4 微生物代谢网络数据库23-24&&&&&&&&1.4.1 参考生化数据库23-24&&&&&&&&1.4.2 代谢途径数据库24&&&&1.5 工业微生物技术和应用24-26&&&&&&&&1.5.1 微生物催化合成25&&&&&&&&1.5.2 重要工业微生物的代谢工程25-26&&&&1.6 本论文的研究意义与内容26-27第二章 不同遗传背景的大肠杆菌代谢通量分析27-40&&&&2.1 前言27&&&&2.2 实验材料27-28&&&&&&&&2.2.1 仪器和试剂27-28&&&&&&&&2.2.2 菌株28&&&&&&&&2.2.3 培养基28&&&&2.3 实验方法28-30&&&&&&&&2.3.1 样品制备28&&&&&&&&&&&&2.3.1.1 细胞培养条件28&&&&&&&&&&&&2.3.1.2 发酵液制备28&&&&&&&&2.3.2 生长曲线的绘制28-29&&&&&&&&2.3.3 细胞浓度测定29&&&&&&&&2.3.4 残糖测定29&&&&&&&&2.3.5 标准溶液的配制29&&&&&&&&2.3.6 HPLC 条件29&&&&&&&&2.3.7 代谢平衡分析方法29-30&&&&2.4 结果与讨论30-39&&&&&&&&2.4.1 三株大肠杆菌生长曲线及葡萄糖残余浓度曲线30-31&&&&&&&&2.4.2 细胞浓度测定结果31&&&&&&&&2.4.3 大肠杆菌发酵液中有机酸的测定31-33&&&&&&&&&&&&2.4.3.1 有机酸标准品分析31&&&&&&&&&&&&2.4.3.2 有机酸外标工作曲线和线性范围的确定31-33&&&&&&&&&&&&2.4.3.3 发酵不同时间大肠肝菌发酵液中有机酸含量的测定33&&&&&&&&2.4.4 大肠杆菌代谢通量分析33-39&&&&&&&&&&&&2.4.4.1 大肠杆菌代谢反应方程34&&&&&&&&&&&&2.4.4.2 不同遗传背景的大肠杆菌代谢通量比较34-39&&&&2.5 本章小结39-40第三章 GC-MS 分析细菌胞内代谢物的代谢组学研究方法的建立40-55&&&&3.1 前言40&&&&3.2 实验材料40-41&&&&&&&&3.2.1 仪器和试剂40-41&&&&&&&&3.2.2 试验菌株41&&&&&&&&3.2.3 培养基及培养条件41&&&&3.3 实验方法41-45&&&&&&&&3.3.1 实验设计41-44&&&&&&&&&&&&3.3.1.1 大肠肝菌快速淬灭有机溶剂选择的实验设计42-43&&&&&&&&&&&&3.3.1.2 气相色谱衍生条件优化的实验设计43-44&&&&&&&&3.3.2 胞内代谢物的提取方法44&&&&&&&&3.3.3 衍生方法44&&&&&&&&3.3.4 标准溶液的配制44&&&&&&&&3.3.5 GC-MS 分析方法44&&&&&&&&3.3.6 数据处理44-45&&&&3.4 结果与讨论45-54&&&&&&&&3.4.1 微生物淬灭方法的确定45-46&&&&&&&&&&&&3.4.1.1 淬灭方法的选择45&&&&&&&&&&&&3.4.1.2 淬灭所用有机溶剂的确定45-46&&&&&&&&3.4.2 气相衍生条件的确定46-47&&&&&&&&3.4.3 GC-MS 方法学研究大肠杆菌胞内代谢物47-51&&&&&&&&&&&&3.4.3.1 大肠杆菌胞内代谢物GC-MS指纹图谱47-48&&&&&&&&&&&&3.4.3.2 胞内代谢物GC-MS定性定量分析48-49&&&&&&&&&&&&3.4.3.3 胞内代谢物标准品GC-MS定量参数49-51&&&&&&&&3.4.4 六种细菌用于代谢组学研究的GC-MS方法学考察51-54&&&&3.5 本章小结54-55第四章 生物催化生成对苯二甲酸微生物协同作用的代谢途径分析55-64&&&&4.1 前言55&&&&4.2 实验材料55-56&&&&&&&&4.2.1 仪器和试剂55-56&&&&&&&&4.2.2 试验菌株56&&&&&&&&4.2.3 培养基56&&&&4.3 实验方法56-58&&&&&&&&4.3.1 样品制备56-57&&&&&&&&&&&&4.3.1.1 细胞培养及发酵液制备57&&&&&&&&&&&&4.3.1.2 细胞破碎及胞内代谢物的衍生57&&&&&&&&4.3.2 标准溶液的配制57&&&&&&&&4.3.3 HPLC 检测条件57&&&&&&&&4.3.4 GC-MS 检测条件57-58&&&&4.4 结果与讨论58-63&&&&&&&&4.4.1 对苯二甲酸等 4 种标准品 HPLC 图谱58&&&&&&&&4.4.2 对苯二甲酸等 4 种标准品 HPLC 定量参数58-60&&&&&&&&4.4.3 发酵液中主要代谢物的 HPLC 分析60&&&&&&&&4.4.4 胞内代谢物的GC-MS检测60-62&&&&&&&&4.4.5 代谢途径分析62-63&&&&4.5 本章小结63-64结论64-65参考文献65-72攻读硕士学位期间发表和撰写的论文72-73致谢73分享到：相关文献| 上传我的文档
 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
Structural and functional analysis of cellular networks with CellNetAnalyzer
下载积分：3000
内容提示：Structural and functional analysis of cellular networks with CellNetAnalyzer
文档格式：PDF|
浏览次数：0|
上传日期： 03:05:04|
文档星级：
全文阅读已结束，如果下载本文需要使用
 3000 积分
下载此文档
该用户还上传了这些文档
Structural and functional analysis of cellular net
官方公共微信