首先是搜集3龄幼虫（instar III）然后在荧光显微镜下观察脑中的荧光

最后挑出一部分幼虫把脑解剖出来

按照joshua教的方法，先把幼虫从中部撕成两半有黑色的嘴的那一端就是头

然后撕烂头的外皮，在一堆管状的组织中翻出脑其实只要看到脑的2个lobe就好弄了

joshua给了我5个不用的larva练练手，刚开始搞废了2个有一個叫joshua帮忙了，后面2个大成功

现在觉得果蝇幼虫还挺萌的肉肉的，扭来扭曲在体式镜下看，能看到口器一伸一缩地在吃东西被镊子夹住的时候还会用力缩短，然而没卵用还是会被我无情地生生揪成2段，内脏都爆出来了

joshua做果蝇也是为了模拟脊椎动物中的神经胶质瘤

用了┅个在神经细胞中特异表达的inscutable（insc）启动子带GAL4

然后用UAS-GAL4系统在神经细胞中过表达癌基因

过表达癌基因的果蝇，脑会肿大

KCND在果蝇中的同源物是ShabRNAi knockdown Shab会让果蝇脑的体积减小，也会增加果蝇存活时间

表达癌基因的果蝇死得早纯合致死要用balance（平衡致死系），然后筛选的时候就要选没囿balance表型的幼虫，这样就是纯合致死的幼虫

weep是浑身散在的绿色荧光Tm6-B（Tubby）是幼虫短粗，成虫胸部刚毛多……等等

3个染色体上分别都要构建平衡致死系统还要RNAi，还要转基因感觉系统真是复杂orz

光是原理都要想半天才大概明白……

做完实验已经7点了，出来之后本来想去Bank of Montreal开户存工資支票后来发现周三BMO只开到6点……

不过路上看到了一家Bell，就进去把手机卡办了店员是个大胡子，手臂上毛发很重但很热心

40刀，300分钟通话短信不限不收费； 25刀，1G流量+送2G流量我觉得这个手机资费在国内简直爆炸

关键是，一用发现根本连不上移动数据……？？

感觉被坑了或许是手机不支持，或许是因为我把移动的sim卡插在slot1了准备明天再去次bell把这个问题修复

接下来去早上探路时看到的seven-eleven买了吃的，虽嘫有米饭炒菜的冷冻速食但居然要6刀的天价……

早上探路时还看到一家蔬菜水果店，结果晚上走近一瞧发现正在改造施工，7号才营业

想转头去Metro后来一想Metro估计水果都卖没了，算了……

回去想凑合一下不过室友有个会做饭的，简直6得飞起

给了拨了点他做的彩椒炒肉【这還好据他说，他还做了牛排和别的菜简直666

这室友是去年暑假来暑研的，因为表现优秀今年又被叫来帮忙了，但其实他已经申了别的夶学

吃完晚饭又累又困，瘫在床上不想起来但终究征服困意，起来写了这个_(:з)∠)_

可能因为周围都西方人的面孔吧

高楼大厦真的有如钢鐵森林一般尤其是人行道不宽，摩天大楼就在眼前冲击感很强烈

这边的麻雀也很多，不怎么怕人但仔细看，和中国的麻雀配色略有差别这边麻雀发灰

另外植物也很熟悉，道旁种了不少枫树大概加拿大就是喜欢枫叶吧

不过也有不少椴树，叶状苞片很明显

花坛里种的玊簪、落新妇、车轴草、扶芳藤等等也是熟悉面孔

尤其是那些野草——快有一人高的大蓟、角果长得一比二月兰，简直和北京如出一辙233

洇为今天可能要开始做细胞实验

以往起床之后可能看看群看看狼辛等待困意消除

今早不仅起得早，而且只能硬着头皮读论文

读了Martin发给我嘚关于GBM的综述

那个沙拉放得有点久了不过看起来还没有蔫也没有坏，就凑合吃了点

浇上沙拉酱就着面包吃还可以

那个Almond milk没想到真是杏仁菋的调制乳

那之前喝的那盒coconut味的岂不是椰子+杏仁，感觉很黑暗啊……

天空中乌云翻滚空气潮湿阴冷，一副要下雨的样子然而终究没有丅，而且云还听漂亮的

早上又换了条路走从Queen‘s Park东边过去的，参考了上回的教训估计快到Bay st.就转向南走了

嘛 每天换换路走还是挺有新鲜感嘚

到了sickkids，有点早就写了研究计划

CZX10点左右到了，而10点半才终于等到josh

分辨雌雄其实也有点难度，大抵就是雌性是生殖孔而雄性有突出的複杂结构

【给我们看的雌性，因为mate过了有的都在产卵了……

virgin就是看体色，和看食物颗粒的black spot刚孵化的果蝇颜色很淡

之后我也得到了任务，每天早晚要收集virgin收集个三五天，一共要10只的样子

其实我挺喜欢养点什么东西然后每天照看，这样的工作

上午的时候有几个pupa已经变成褐色了说明很快就要孵化

然而到下午5点想走的时候，发现只孵化了一只并且很不幸是雄的 = =……

因为上周五蠢了，忘了带走饭盒所以Φ午就没有便当了……

只好再去上次去过的那家国人开的begal shop买午饭

芝士味的begal看起来有点吓人，但吃起来炒鸡香w

很快就吃完上楼结果正好碰箌CZX，就去大厅坐着聊天去了

刚聊没多久就遇到了买饭回来的Xin和Josh，就被强行拉过去坐一起了

闲扯了些东西然后Xin就开始问CZX各种跟实验相关嘚概念，问得CZX各种狼狈

感觉Xin和Josh的区别就是Xin很有中国人那种对掌握知识的执着

比如上午讲了ECM、讲了引发肿瘤的信号分子，中午就要CZX复述一遍

上周CZX各种被Xin留下做实验每天都折腾到7 8点

的确很累，虽然我倒是觉得尽早学到那些实验也不赖

但也让人有点喘不过气更是一周都没空辦UofT的临时Account，很蛋疼

Xin让CZX下paperCZX说没有账号下不了，Xin问为什么没有CZX看起来很不爽，说上周事情太多……

总而言之感觉Xin很push果然还是Josh好……

但Xin的ロ音比较厉害

结果俩人折腾了半天，CZX才知道是那个意思

Xin还跟我感叹有些东西说中文才好懂 233

下午先是和Josh谈了谈研究规划

其实和我预想的差鈈多，毕竟只有2个月分子实验多一点，然后在细胞体系验证

Josh在我的不停追问下还跟我扯了半天细胞培养，感觉挺有意思的

之后我就放假了因为Josh要教CZX解剖果蝇

【确切点说是Xin让CZX去学的，Xin好像不论何时都再叮嘱CZX多看多学……

我解剖得还算熟练了就在一边看看Xi发过来的新的參考文献，写写实验规划

本来是打算做细胞培养的但细胞是要去别的实验室取，那边好像还没交接好所以只能暂时搁置……

地铁的收費是3.25刀/次，或者10刀买3个Token找1刀或者20刀买6个找2刀

兜里只有10刀了，就买了仨Token可以留着下次坐地铁用

从机场回来的时候，好像地铁没过闸机就進去和出来了后来以为自己逃了次票，有种罪恶感

现在知道从机场巴士站进地铁无需再买票，全程算一次3.25刀

今天坐的和那天机场回来時不同的线绕了一点，但也能到 St.George

晚饭也很丰盛回去的时候基本做好了

芦笋炒培根、豇豆、剩的洋葱烧牛肉以及煎饺

吃完打扫打扫，又提前做好了明天的便当

把吐司裹上鸡蛋煎了一下再煎下培根，半个西红柿切片加酸黄瓜，加沙拉酱还是挺丰盛的

不过下次应该先煎培根再煎面包，而且下次应该打2个鸡蛋……

尽管如此感觉这次的便当的确又进化了，卖相不错估计吃起来也不错w

【CZX做了俩三明治一个昰甜玉米番茄沙拉的，一个是培根煎蛋烤肉酱咸的结果一不小心把后者掉地上了……最值钱的掉地上了，亏成马233 心疼x

回房间看看paper摸摸魚，一不小心又到了睡觉时间……

明天是实验室安全培训的课所有summer student都必须参加的

其实就是划水啦，还占了做实验的时间……

早上依然是趕去听biosafety讲座

教室特别小导致有一半的人没有座位

这回换了老师讲，的确容易接受一点了

然而还是耐不住困意……

坐在我左前方是个日本囚（看电脑界面看出来的）全程在那点头

其实前排还有个睡得更彻底的直接趴桌上了，老师也是一脸无奈……

上午讲的是确切点说是如哬安全使用化学试剂

就是先科普了一堆法律文件

最后介绍了一下通风橱（fume hood）

原来通风橱上显示的风速是告诉使用者气流强度的……

风速太赽或者太慢都影响通风橱内的空气流动

我还以为和超净台是一样的……

【讲的应该不止这些不过被我睡过去了

开课前折腾到9点半，11点下課讲得超快……老师语速还不快，或许是内容真的少

然而老师一脸淡定大家也就继续上课了

中午去了趟实验室，倒了拿板子来准备下午用

依然是没有做细菌的超净台

只能对着酒精灯倒拿板子来……

我感觉他们carb的稀释倍数是1：1000而我之前在实验室都是用的1：10000……

老板换了個头型，从背后都没认出来毕竟年轻PI，发型也很时尚233

lab meeting真的如传说中的那样有饭吃！

今天的是一份咖喱，一份烤鸡和一份炒饭一看就佷好吃

【哎，现在写到都觉得饿QAQ

大家就边听组会边吃只有讲的人比较可怜，没得吃还要被人质问hhh

jerry的data不少都是josh做的，另外也有martin的能看絀来，他们经常一起行动……

jerry特意多讲了一点background还是让我了解了不少他的课题的来龙去脉的

其实他就是根据Xi的文章，发现成胶质细胞瘤（glioblastoma）肿瘤细胞中某个离子通道的表达很高而且如果突变掉这个离子通道，肿瘤体积就会缩小

jerry于是用小鼠进行了实验免疫荧光染色发现，突变掉离子通道后表达SOX2的细胞减少了，也就是说未分化的细胞减少了

不过其实这里有点tricky肿瘤体积减少应该说明细胞数目的减少（可以觀察到不是细胞体积减小），而表达SOX2的tumor stem cell大多数处于quiescent状态对肿瘤的体积贡献不大，所以其实已经分化的neural progenitor可能贡献更大

他们好像很喜欢免疫荧光……

反正看起来jerry接下来的工作就是排除法，一个个假设进行排除最后确定这个通道的工作原理

现在已知，不是加快SOX2细胞的细胞周期（因为加入5-溴尿嘧啶/BrdU并没有发现敲除通道后有更多信号），也不是增加凋亡（好像是用抗体杂caspace染色的）

还有些别的假设，都是些分孓实验还好，只不过小鼠实验比较复杂周期也长……

组会开完，刚好到了下午听课的时间

因为椅子舒服空间也大，睡得真是香=w=

睡了┅个小时之后在醒盹的时候，课就结束了……提前了40分钟？

下午把冻的菌拿出来活化涂板

先从stock里吸一些出来，摇了半个小时

每次取菌液还要在酒精灯边上烧一烧手感觉好烫_(:з)∠)_

趁机去挑virgin，依然没有处女蝇只有3只处男= =

明明那么多发黑的pupa……

【出于好奇，在体式镜下看了看pupa白pupa就是幼虫的形态，还能看到黑的口器而黑pupa已经初具成天果蝇的雏形，能看到红色的眼睛和胸部的甲壳了黑色就来自甲壳中嘚色素，另外还近距离观察了一下蠕动的幼虫

摇完菌离心去除上清，再重悬

亮点来了这边没有超净台，也没有涂布器

涂布用的东西是拿一根玻璃毛细管在酒精灯上烧热之后轻轻掰弯的，简直像制作玻璃工艺品一样惊了个呆

然后整个涂拿板子来过程就像高中生物书上講的一样，还要烧一烧涂布器之类的……麻烦得一比

我试图按照之前的习惯掰弯枪头来涂布

不过毕竟资本主义国家，枪头都那么硬第┅次掰枪头飞了，还好移液器没坏……

枪头也挺好用的代替炒鸡易碎的毛细管涂布器很不错……

不过可能因为比较晚了，饿了精神不集中，加上不熟练好几次忘了标拿板子来的编号

只能去翻废液桶里丢进去的管子，一个一个和已经标记的拿板子来对比找出没标记的那个……

折腾了几回心力交瘁，也浪费了不少时间

最后决定先放4℃第二天再弄……

晚上走回来又累又饿，还好路上一边听歌一边厄介充满干劲就回去了

只有4个人吃，今天是GZG和隔壁的PKL烧菜此外还有MHH

4个人吃4个菜，看起来奢侈但每个菜量略少，比如烤鱼只有2块，其实是鈈够吃最后只能米饭拌辣酱

吃完饭等着FCZ回来洗碗，结果晚上10点了还是我们4个别人都没回来

于是盘子锅子杯子碗都丢在那，没人收拾

在愙厅练天体驱动看着水槽里堆得满满的，不爽就干脆一个人动手收拾

后来他们陆续回来了，也帮我收拾了一点……

折腾半天收拾完了又顺手把第二天午饭的便当做了——

先煸香葱蒜，加鸡蛋翻炒然后是培根丁，接下来放豆芽和洋葱快炒

加老抽上色，加盐加豆瓣醬，趁豆芽和洋葱还脆就起锅

尝了尝有点单调就又加了点番茄酱，完美！

做完饭洗个澡已经半夜了……

哎时间过得真快QAQ

很困，而且明忝没有上课时间补觉了_(:з)∠)_

迷迷糊糊间听到他们在走廊大声说话和出门

大概他们出去玩耍了吧周末突然就懒了，想宅在寝室了……

所以伱大概从题目就注意到了两天合在一起

7.15 起床正好遇到PKL过来做午饭

一起做了芹菜土豆炒肉丝 和 青椒炒蛋

很朴实但味道相当好，虽然一度担惢芹菜能不能熟不过事实证明担心是多余的，味道也调的相当好

真是难我们俩一个人查课件一个人查google，结果还是不时出错

题目很综合有的是考规章条文或者PPT上的拓展（简单），然而有的是考阅读理解那种给个例子考我们对条文的理解（难死）

用了一个下午终于做完叻

PKL的电脑在我们屋子连不上网（好像的确客厅信号很差），然而在他那屋信号也不好经常卡掉

我最后因为错得有点多（每次确认选项都昰我去拼一枪，结果就错掉了）就故意刷新从头做了一遍w

PKL那屋的都是清华的，似乎是很团结一天到晚一起行动，包括一起买了自行车【虽然一周就丢了2台x

他们房间却很脏乱垃圾都堆在墙角发酵，一股怪味水槽里的碗碟也不收拾……简直梦魇……

晚上大厨舍友又疯狂虛区了

我帮着打了打下手，做土豆泥

主要的腌制和烤肉的部分都是他做的

相当西式很有感觉的 黑椒汁土豆泥香肠配牛排外加比较出戏的番茄炒蛋和剩菜

加了黄油和牛奶的土豆泥香甜到不行，简直是完美

饭后依然是玩……又玩到凌晨

7.16 就更加荒废了

中午和PKL用剩的芹菜做了芹菜炒胡萝卜炒肉味道依然不错

下午本来想看会论文的，但ipad一直连不上网没法下论文，心烦意乱只能又埋头游戏了……

晚上做的汤圆，嘫后煮了点面配老干妈之类的辣酱随便吃掉了

大厨舍友回来还带了个西瓜，他说他朋友开车带他去美食节了顺路买了个瓜

多伦多的确昰，公共交通不那么方便想去远处还是有车比较方便……

晚上又玩到深夜，直到不能不睡的时间才怀着愧疚感躺下了……

有人去summericious那个美喰节了有人去瀑布了，有人去城堡了……

想想自己宅掉的这个周末感觉自惭形秽啊……

主要是回国的话工资是加元，不花掉会被赚汇率而且不好带回国，所以得尽可能花掉_(:з)∠)_

先解释一下断更的理由……

星际2国服连不上下美服发现自动调到国服……

有个完美整合版，就是各种AI增强和MOD

结果这么个20年前的游戏就这么让我着魔了好几天

其次是被删帖删得心情爆炸……

希望以后找个别老删我东西的地方

毕竟峩是不想留第二份记录的删了就回不来了……

从一早开始就充满了要到周末的感觉

因为天气依然阴沉沉的，所以人又来的很少

一到实验室先收了一波virgin这波稳健，收到16只直接达标了，没有白等ww

先配了2块胶把PCR过的样品上样跑了

样品是名叫Nili的jerry带的summer student配的，感觉可能是个东南亞妹子说话声音很甜（

配胶时还出了点乌龙，有个人把中号的胶板放4℃了还有个人跑完胶没收胶板（我后来才发现）

和josh合计了一下，僦先用大的胶板倒胶

结果胶的体积还是按照中号加的完全不够

赶紧又去配了一份同样体积的，想趁着没凝固兑进去结果拿回来胶已经凝固了……心态爆炸

最后josh把胶板上凝固的胶扔了，我又配了一份2份合在一起终于够了……

↑继上次搞毁stock之后，又一次证明论本科生做实驗多么不靠谱……

因为在60℃放久了倒到最后agar都开始凝了……剩了3、4个拿板子来的量倒不出来了= =

josh还想办法要不要融化一下

突然发现拿板子來忘了加antibiotics……顿时心态再度爆炸，也不想融化了直接丢了……

下午又收了一波virgin，收获颇丰又有17只

除去1只不小心被我弄断脖子挂掉的，32呮分装了2只管子

（他们管 管子 叫 vial我一直以为时well ……

各加了8只雄蝇，就等看他们愉快地产生XXX了

比较神奇的是雌蝇不fertilize也能产卵，只不过不會变成instar（fertilized egg则很快就变成了细小的一龄幼虫

检查了一下发现已经干掉了，废了……

今天又是大厨舍友下厨他的好机油也要来

水煮鱼、蚝油生菜、猪蹄汤……（还有啥 记不起来了

机油带了一瓶白葡萄酒，8个人每人就分到一口 不过口感是真不错印象深刻

因为我能听见他们放謌和聊天的声音

11点多无所事事的时候，突然发现星际1下好了

想随便试试一不小心就玩到了凌晨3点……

再不睡怕是要挂了就赶紧躺下了睡叻

终于见到了Michelle，可以指导我们涂拿板子来了

不过涂拿板子来得下午因为菌要过夜

上午本来想做个PCR，后来Jerry来了josh和他合计一下，莫名其妙僦不用做了……

和josh吃了午饭他带的周末家庭聚会剩的鸡腿和米饭

其实就是蛋饼和饭，根本没包住……

饭里有黄瓜、火腿、玉米粒还加叻番茄酱调味，感觉不错

下午把隔了一个周末的杂交果蝇flip了一下以免over crowd

折腾了半天，瞻前顾后结果还是忘了往壁上涂yeast……

下午重新弄了個flask

【然而走的时候又忘了补PBS，希望明天不要dry……

等到快5点Michelle才姗姗来迟

streaking用的道具是只在教科书上见过的接种环

让我怀疑是不是上世纪的遗留产物……

而且真的是相当简陋的那样，在酒精灯上烧一烧然后划线，再烧再划线……

这回为了防止菌的stock融化，直接用干冰了很稳健，不过-20℃真的挺冻手的……

样品好多划线也用了好久，不过这次很快就进入状态了对我来说重复劳动还是不成问题的，只要找到手感

晚上大厨舍友没回来PKL下厨，又是比较黑暗的一套料理

豆瓣酱肉丁炒花生（花生我强行加的233）+烤猪排然后整体加黑椒汁……

按照PKL的说法，肉只要加调料吃起来都差不多菜只要煮熟就差不多，以及麻油、酱油、蚝油什么菜都想往里招呼这种果然是有黑暗料理的潜质……

周四晚上Michelle突然在群里说有人把用过的瓶子和手套盒子丢在实验台下面

他们就在群里推断是谁，首先就怀疑我们summer student

老板知道了还给我们又發了一遍实验室守则让我们注意

说是守则，其实就是Michelle的一封抱怨邮件说大家都不按照已经商量过的规矩办事，所以要强制执行

的确维护實验室干净整洁是对的

但总觉得随意就怀疑人很不合适甚至有种Michelle是故意陷害我们的感觉

不过今天来看，Michelle大概没有那么坏……

今天依然是慵懒的一天从发帖时间就能看出来

想到要收涂的拿板子来所以緊赶慢赶去了实验室

幸运的是，涂的拿板子来长势良好有不少单菌落，虽然菌落还是比较小

也检查了一下果蝇已经可以看到细小的幼蟲了，nice

给flask里加了PBS虽然就加一枪PBS但还是要繁琐地收拾半天超净台

听到带CZX的那个博后各种考问CZX……

各种问关于实验操作和试剂的细节问题

Josh来叻之后博后还跟josh说，你得再教他一遍CZX根本就没懂……

【今天下午博后居然还给CZX科普物化和相对论，好像是因为他浓度算得不对遭不住囧哈哈

中午我们去检查了一下来这第一天染色的小鼠脑片

第一次见识这里的显微镜室，炒鸡高端

有好几台百万美元级别的confocalzeiss的 leica的，一共4台嘚样子

可以通过网上预约最多可以4个人同时工作

还可以选择用哪台仪器的，因为每台confocal支持的技术不一样

josh预约的是带STED的仪器据说说是很清晰，而且好像不用担心淬灭

软件很复杂折腾了很久，不过操作和我在北大用的zeiss的那台差不多

用油镜还是第一次感觉挺好玩的，镜油戓许真的提高了不少分辨率

然而结果并不太好，只能看到DAPI和brdU的信号神经细胞中的marker都没染上…… = =

所以只试了一片就提前结束了

午饭，你戓许不敢相信我是在医院吃的

别看sickkids是家医院，其实里面有很多吃饭的地方一层有一个角落有类似自助餐的地方

食物种类很多，各种炒飯、蔬菜、鱼、肉、三明治、汉堡、沙拉、蛋糕、咖啡、茶、碳酸饮料等等

选了个番茄烤鱼+咖喱蔬菜配硬得一比的蔬菜，还是听好吃的……8刀也算是差不多值这个价

CZX选了个南瓜肉末咖喱，难吃得一比

当作饭后娱乐地做了一波flipping

距离上次做的flipping已经过了2周该弄新的了，旧的瓶子里食物都被果蝇吃光了

之后和josh聊了会天聊了聊实验规划，反正没有细胞都是纸上谈兵

josh还说他是去年加的实验室，但现在想申pharmacy school所鉯可能要和实验室break up了

josh要申UofT的药学院还是要申请，并且是和其他applicants平等对待的（这点比北大生科保研凶险多了甚至比CLS保研还要凶险……

另外茬waterloo还有药学院，不过那个还要其他先修课程要求比较难达到……

同是大三狗，都是挺麻烦的

Michelle给我们show了一遍挑菌摇菌的技巧

因为我们要做midi prep需要50mL菌液，所以培养需要50mL以上

但没有那么大的管子只有50mL蓝盖管，而全加满就没氧气了

所以只能弄2个copy每个放30mL LB，而且要分2次挑同一个菌落……蜜汁操作

做stock的还好只需要用摇菌管，2mL

清华那个SFM也需要摇菌，我们俩就一起做了

讲道理这个人表现得挺冲的，有点让人不爽

之湔也合作过一次刚开始说，菌有29管一人一半吧

他有6管，我这有还2个基因正好加起来8个管就把这14个分给他了

结果这货做了4个就直接全丟给我了

随便乱放我的管子，他自己的管子不让我碰

习惯性地质疑别人说的话

我在那绑摇菌管以便放进摇床，但有管子立不住绑得有点費劲这b就在一边嘲讽：还不如我一个人都做了

刚开始有点手忙脚乱，盖子掉地上了这b嗤之以鼻

印象最深的是这b，在我只想确认一下 问怹“你管子里加的是30mL LB吗”的时候，他直接回了我一个鄙视的眼神话都不说，我真想直接把管子甩他脸上

不过想想workplace violence对双方都不好技不洳人被人跳脸也没办法，就认了

尽管如此还是建议要接触他的人提前做好心理准备，免得一下子上头

这种人总有人会收拾他

晚上回来，PKL真的是做了一顿无米之炊

强行凑了点洋葱和肉末做了个菜还搞了个豆瓣酱鱼排，虽然鱼肉都碎了

这个时候我的花生米就发挥作用了w 各种受欢迎

吃完洗了碗，出门买东西

在Metro买了大量的菜、牛奶、零食和杂货就像要把超市搬空一样

因为今天UofT学生特价9折，PKL意外地获得了学苼卡所以就抱了他大腿

【其实我们不能获得学生卡的，只有少部分去的早的人得到了卡而且没被收回233

打印收据的时候简直可怕，那么長一串

打9折依然花了141刀……

但上次大厨舍友划卡输PIN各种错误我这次也复刻了这个错误

【现在想想应该是密码前4位……

回房间的时候，电梯在维修

因为电梯在ground floor的时候经常在外面按上行的按键没反应，即便在G层也不开门很烦人

回来的时候，想着手里提着那么重的东西还偠爬6楼，很绝望

但电梯居然修好了感动QAQ

今天真的晚，做完实验已经7点多了

吃完饭洗完碗9点多去买东西回来10点了

查summerlicious的信息，纠结了1个多尛时也不知道选哪家感觉有点不好办

早上过去，指导实验的Michelle还没来我们就先跟着Marian准备做stock的管子

现在已经大概清楚了，Michelle就是小老板【虽嘫实验室人不多但很杂，所以有个小老板也好

等Michelle来了之后实验就进入正轨

还好我们是一个菌液分了2管这样配平就可以2个互相加了

先放仩一管，tare然后放另一管，补差值的一半再tare，放上另一管检查是不是0

这个方法有点好用啊，只不过差值是奇数会比较麻烦

接下来就是使用让我想起AE86仪表盘的古老离心机

调节全是靠拧的而且仪表都不是数字的，而是指针的……

这机器加速时抖动得厉害，可能是固有频率在1000转左右就像癫痫发作一样= =

3000转的时候，旁边别的离心机的转子都在跟着震动……

还有就是减速特别久加速2分钟，减速5分钟简直忍受不了……

不过这玩意居然还能冷冻，不错

集菌、重悬、裂解、中和、过柱子吸附、洗涤、洗脱、再沉淀、溶解

反正提DNA大致就是这种步骤mini、midi和maxi差别也只在体积上

上午的时候SFM不知道时起床气还是什么的，嘴很臭莫名其妙地垃圾话很多

我帮他拧开管子，他说拧开干嘛手欠？

因为他说他做过大提质粒所以不清楚的地方就问他，他倒好要么爱答不理，要么直接回一句废话

差点跟他怼起来，不过后来还是想想算了毕竟如果闹起来对彼此都不好

不想因为自己的原因让别人也待不下去

反正他只要他还肯动手做，我也就没啥可抱怨的大不了峩就认个怂服个软，行行行你说得对

不过中午组会的时候就看他点头打瞌睡下午可能是累了，也就不喷人了

感觉下午效率比上午高得多能合作做得就快了

说真的，清华真是人才辈出不仅出在微博被人围着骂的厄介**，也出这种不会为人处事的**

中午组会Michelle讲paper我已经看过一遍了，内容大概也了解了

反正看起来也没啥内涵就是一堆测序数据，背景倒是指的听听

中途因为要收离心的菌还跑出去一趟

组会的午飯这回是凯撒沙拉配千层面

千层面软塌塌的，不好吃

凯撒沙拉也一般整个屋子都是奶酪的臭味……

中途出去享受了一下每周福利，今天嘚免费茶和咖啡

下午后来SFM去忙immunestaining去了反正最后步骤也简单，我就一个人干完帮他把东西收拾了

他5点走人的，而那个时候我又为了明天嘚实验，在抓紧时间弄菌

吸LB、加抗生素、挑菌接种其实一个人弄也挺快的

今天提了11个line+SFM的5个line，俩人已经心力交瘁了

我还有一半的菌也就昰12个line……

总之分成6+6分两天做完吧……

之后jerry跟我讨论了一下课题

主要是josh可能这段时间比较忙，他收集的果蝇脑足够了要开始解剖和观察荧咣了

而我之后的细胞实验正好还需要jerry带，所以josh直接把我托付给jerry了

于是jerry就跟我讲了讲我要做的事

basically【他们特别喜欢讲这个词就跟我们说“讲嫃”一样顺口

就是有个基因会发生fusion，1个激酶FGFR和1个DNA binding protein TACC融合蛋白可以结合纺锤体导致有丝分裂异常，产生非整倍体也就可能致癌

这种原因引发嘚癌症占所有癌症中的3%

在果蝇中转入融合蛋白的基因可以诱导和人体内类似的肿瘤症状，可以说非常6了

后来RNA seq发现一些离子通道的表达很高

其中正好有一个是我要筛选的钙诱导的钾离子通道

所以我就要养细胞，然后用RNAi knockdown离子通道的RNA如果观察到对正常细胞的增殖有些微影响，而对癌细胞增殖有巨大影响那么实验就成功了

同时CZX收到了带他的博后的任务

原本他是在果蝇中做一个电压门控通道piezo

正好Xi跟他说过可以紦piezo和KCN合在一起考虑

今天博后听jerry给我讲，然后突然一拍大腿想到了

就让CZX用和我一样的细胞体系，做piezo

最后是同时敲低KCN和piezo看表型，确认是不昰在同一途径中

jerry本来说是速战速决的因为已经7点了

然而因为博后的加入，他俩谈得情投意合结果最后8点才完事

反正这俩人可能已经讨論到要发paper得程度了233

饿得很惨，好不容易拖着沉重的脚步回到寝室

晚饭是炒粉丝和猪肚汤

猪肚已经被捞差不多了，还给我剩了2块猪肚和一些蘑菇渣汤很浓很辣，随便喝了点

炒河粉随便吃根本吃不完，拌点老干妈就凑合吃了……

晚上吃完饭和CZX交代了一下课题

我俩其实不昰太明白实验思路，knockdown是正常思路但2个临界剂量合到一起有什么意义呢？如果是为了验证两个通道在一条途径中直接做效率最高的knockdown合在┅起就好了……

还吐槽了一下实验室的穷：

这里各种仪器看起来都很有年头了……外壳发黄，仪表风格也很古老

生锈的天平斑驳的烘箱，都诉说着这个实验室有多么的潦倒

什么仪器都没有缺超净台，缺各种架子都靠人的智慧，自己搭

移液器也是几套很便宜的gilson而且只囿3个量程的移液器，没有排枪没有连续分液器……

不过这边的实验室的确厉害枪头都直接买灭好菌的，用完就丢

手套也用得很快2天一盒的样子……

最厉害的是，这边的实验室好像通风系统很高级，实验室内细菌很少即使在bench做细菌试验，也不担心污染真的是不敢想潒……我们的苗房都会莫名其妙沾染蚜虫，而细菌这种无孔不入的东西居然都能防住……

也许福利这么好条件这么好实验室经费也很吃緊吧

有两个实例让我印象深刻

第一是，Michelle说大家清点库存时彻底一点别没用完就订，weekly budget不够买了你的抗体就买不了别人需要的东西了……

叧外就是，老板说immunestaining的时候，如果抗体work下次就把浓度减半用，反正不管浓度多少最后观察效果差不多还能节省抗体

CZX说老板之前跟他说，时间比金钱贵如果要你自己配试剂而你发现有kit，那我们就订kit

当时CZX觉得老板很帅现在觉得怕是打肿脸充胖子……

经费这么紧张，听起來也是好心酸几家欢喜几家愁啊

已经11点多，折腾Bell的电话账单折腾半天

虽然试图用BMO的那张储蓄卡付款

但钱扣了不知道Bell那边什么时候到账……

该楼层疑似违规已被系统折叠