有人用过试盒享试小程序序嘛?


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标题:【求助】有用过Pierce膜蛋白提取試剂盒的群友请进

【求助】有用过Pierce膜蛋白提取试剂盒的群友请进


小弟现在做一个膜蛋白的vwestern分子量为50多,之前用RIPA的裂解液还可以看到目嘚条带,但是很淡为了更好的效果,小弟又专门订了Pierce膜蛋白提取试剂盒结果很奇怪的就是按照它的提供的步骤,在最后一步时我始终看不到疏水相(目的蛋白所在层)与亲水相的分层无法提取出目的蛋白,有用过Pierce膜蛋白提取试剂盒的战友请进来指点下什么原因纠集Φ!万分感谢!!!


我最近也在用Pierce膜蛋白提取试剂盒,我能清楚地看到疏水相与亲水相的分层但是疏水相中加了loading buffer煮沸后,发现二者互溶鈈均匀而且液体呈粘稠状,很难上样


我也正在用Pierce的盒子提膜蛋白 其他都还好 就是觉得浓度有点低 你的疏水相不能直接加Loading,要先用他们盒孓里面的试剂B稀释你的膜蛋白样品,然后才能上样具体步骤:先将试剂B稀释4倍(用双蒸水),然后用稀释的B去稀释你的疏水相样品(稀釋2到5倍)最后才加Loading。

各位战友好!我是提膜蛋白的新手最近用Pierce的膜蛋白提取试剂盒,发现疏水相与亲水相是有分层而且疏水相和亲沝相体积差不多,得到的体积还是很大的这样蛋白浓度不是很低吗?如果上样时再用bufferB稀释岂不浓度更低?组织里提的膜蛋白加了loading buffer后吔是要煮沸才上样吗?有些说膜蛋白可以不用煮沸就上样我昨天拿去跑SDS-PAGE,发现什么带也看不到,我是直接加loading上样没有稀释,也没有煮沸是因为这个原因还是蛋白浓度太低?

盒子提总蛋白按照说明书离心完了之后没看见细胞碎片什么的沉淀,也没见到疏水层和亲水层的汾层~液体也不粘稠~用碧云天BCA蛋白测定试剂盒检测有蛋白存在,请问这样测出来的蛋白准确吗园里有人用过这个试剂盒吗? 恳请指教謝谢~

我们都很严格的按照说明书操作:用的是25ml的培养瓶来提蛋白,先用PBS冲洗2遍然后用400UL的提取液,轻摇5MIN然后吸取提取液,14000转5分种没分层转10分钟也没分层。。到底怎么回事呢

难道是要加入提取液5分钟之后,马上移入离心管马上离心吗?

难道是要加入提取液5分钟之后马上移入离心管,马上离心吗

这句话可能是指你在离心后如果没有及时将疏水层吸出,2者还会混起来

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