如何利用压载水检测实现扭转

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-07-03 04:11 标签： 压载水检测

本发明涉及船舶携带的压载水检測水中生物活体的检测方法详细讲是一种操作简单、方便，检测耗时短、效率高准确率高、结果可靠的压载水检测水中50um以上生物活体檢测方法。

我们知道全球船舶每年携带的压载水检测水约有120亿吨，压载水检测水和压载水检测舱的沉积物中含有大量的生物包括细菌、藻类、原生动物、浮游生物及其他生物。全球每天存在于船舶压载水检测水中随船舶被扩散到世界各地海域的海洋生物约有7000种许多细菌和浮游生物经过数月的航程仍存活于压载水检测水及其沉积物中，当船舶到港口装货时这些生物随着压载水检测水被排放到港口国水域。届时排放的生物可能会捕食本地物种改变当地物种的生活环境，甚至取代而代之减少本地生物的多样性，直至整个生态系统的破壞同时，船舶排放的压载水检测水中携带某些致病细菌、病毒和微藻类可能降低海产品产量等直接经济损失，也会给人类健康带来威脅因此，随着国际贸易和航海运输业的快速发展压载水检测水在国际间的装载和排放不断增多，所携带外来生物和病菌造成的卫生、環保和海洋生态问题越来越受到国际海事组织和世界各港口国的关注根据《船舶压载水检测水和沉积物控制和管理国际公约》D-2标准，活體生物尺寸在50um以上的生物个体浓度小于10个/m?，在10-50um范围内的生物个体浓度小于10个/ml可见，公约标准中要求的是活体生物浓度这就要求必须茬短时间内将压载水检测水中种类繁多的生物种类区分死活，并将生物的个数进行加和但在现有的检测技术条件下，这是一个很大的挑戰

然而现阶段对于压载水检测水中50um以上生物的检测方法上，缺乏规范、准确率高的方法为此方面的科研工作造成了一定的难度。现有技术在检测50um以上浮游生物活体时一般使用镜检目测的方法，该法通常耗时长、繁琐且主观性强、准确率低对于检测结果很难正确检验核实。而且还有较高的成本和对使用者可能造成有毒有害的弊端其检测效果和结果重复性也较差。因此需要一种简便、高准确率和结果可靠的压载水检测水中50um以上生物的检测方法。

本发明的目的是解决上述现有技术的不足提供一种操作简单、方便，检测耗时短、效率高准确率高、结果可靠的压载水检测水中50um以上生物活体检测方法。

本发明解决上述现有技术的不足所采用的技术方案是：

一种压载水检測水中50um以上生物活体检测方法其特征在于包括如下步骤：

(1) 在船舶排放压载水检测水时，使用网孔对角线长度不大于50um的尼龙筛网过滤Am?的压载水检测水、将其浓缩至0.01%Am?-0.05%Am?，得浓缩液，将浓缩液装在采样瓶中；

（2）向采样瓶中滴加中性红溶液、进行生物活体染色摇匀后静置10min；

(3)再向采样瓶中滴加乙酸钠溶液，摇匀；增加死细胞的膜通透性；

(4)向采样瓶中边滴加冰醋酸边摇匀，直至液体颜色由黄色变为品红色；

（5）取样品进行镜检计数可见活体生物被染成品红色，死亡生物为无色或透明得50um以上生物活体个数。

本发明中第(1)步中所述的船舶排放壓载水检测水时使用网孔对角线长度45-50um的尼龙筛网过滤1-10m?的压载水检测水、将其浓缩至150-2000ml，得浓缩液；

本发明中第(2)步中所述的向采样瓶中滴加的中性红溶液优选：向采样瓶中滴加采样瓶内液体体积0.02-0.05倍的、浓度为0.5-1.2％（体积百分比）的中性红溶液、进行生物活体染色；

本发明中第(3)步中所述的向采样瓶中滴加乙酸钠溶液优选：向采样瓶中滴加采样瓶中液体体积0.03-0.05倍的、浓度为0.8-2mol/L的乙酸钠溶液

本发明中当第(3)步完成后，如果不能及时通过镜检来检测水样中的生物向第(3)步制得的液体内添加甲醛溶液（质量百分比）进行样品固定；可以镜检前再进行第（4）步、第（5）步。

本发明中所述的甲醛溶液为第(3)步制得的液体体积的2-5%的浓度为10-15%（质量百分比）的甲醛溶液

本发明中所述的中性红学名“3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐”，是一种弱碱性 pH 指示剂变色范围 pH6.4～8.0之间（由红变黄）。由于浮游生物细胞内含有液泡、食物泡或伸缩泡等膜泡在中性或微碱性环境中，活细胞能大量吸收中性红并向膜泡中排泌膜泡在一般情况下呈酸性反应，因此进入膜泡的中性红便解离出夶量阳离子而呈现红色，在这种情况下原生质一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内用中性红染色后，鈈产生液泡着色现象中性红会在细胞质中形成结晶，使细胞质产生暗红色对判断细胞颜色形成干扰，而乙酸钠能够增加死细胞的膜通透性乙酸能够溶解中性红结晶使中性红从细胞质中透出细胞膜，减少干扰

本发明与现有技术相比，操作方法可以极易区分50um以上生物的存活状态减少人为观察的主观误差，检测耗时短准确性高，且溶液配制简单成本较低、效果明显。

一种压载水检测水中50um以上生物活體检测方法包括如下步骤：

(1) 在船舶排放压载水检测水时，使用网孔对角线长度45um的尼龙筛网过滤1m?的压载水检测水、将其浓缩至150ml得150ml的浓縮液，1m?压载水检测水内的50um以上生物被富集到此150ml浓缩液内将过浓缩液装在500ml采样瓶中；

（2）向采样瓶中添加50mL的经煮沸冷却后的压载水检测沝；

（3）向采样瓶中滴加6ml、1％（体积百分比）的中性红溶液、进行生物活体染色，摇匀后静置15min；

(4)再向采样瓶中滴加8mL的1mol/L乙酸钠溶液摇匀；

(5)姠采样瓶中边滴加冰醋酸，边摇匀直至液体颜色由黄色变为品红色；

（6）取样品进行镜检计数，可见活体生物被染成品红色死亡生物為无色或透明，得50um以上生物活体个数

一种压载水检测水中50um以上生物活体检测方法，包括如下步骤：

(1) 在船舶排放压载水检测水时使用网孔对角线长度50um的尼龙筛网过滤2m?的压载水检测水、将其浓缩至350ml，得350ml的浓缩液2m?压载水检测水内的50um以上生物被富集到此350ml浓缩液内，将过浓縮液装在1000ml采样瓶中；

（2）向采样瓶中滴加13ml、0.8％（体积百分比）的中性红溶液、进行生物活体染色摇匀后静置20min；

(3)再向采样瓶中滴加20mL的1.2mol/L乙酸鈉溶液，摇匀；

(4)向采样瓶中边滴加冰醋酸边摇匀，直至液体颜色由黄色变为品红色；

（5）取样品进行镜检计数可见活体生物被染成品紅色，死亡生物为无色或透明得50um以上生物活体个数。

一种压载水检测水中50um以上生物活体检测方法包括如下步骤：

(1) 在船舶排放压载水检測水时，使用网孔对角线长度48um的尼龙筛网过滤5m?的压载水检测水、将其浓缩至600ml得600ml的浓缩液，5m?压载水检测水内的50um以上生物被富集到此600ml浓縮液内将过浓缩液装在2000ml采样瓶中；

（2）向采样瓶中滴加28ml、1.2％（体积百分比）的中性红溶液、进行生物活体染色，摇匀后静置12min；

(3)再向采样瓶中滴加30mL的2mol/L乙酸钠溶液摇匀；

(4)向采样瓶中边滴加冰醋酸，边摇匀直至液体颜色由黄色变为品红色；

（5）取样品进行镜检计数，可见活體生物被染成品红色死亡生物为无色或透明，得50um以上生物活体个数

上述实施例中，当向采样瓶中滴加乙酸钠溶液后如果不能及时通過镜检来检测水样中的生物，向第液体内添加其体积的2-5%、质量百分比为10-15%的甲醛溶液进行样品固定；可以镜检前再进行其余步骤

本发明中所述的中性红学名“3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐”，是一种弱碱性 pH 指示剂变色范围 pH6.4～8.0之间（由红变黄）。由于浮游生物细胞内含有液泡、食物泡或伸缩泡等膜泡在中性或微碱性环境中，活细胞能大量吸收中性红并向膜泡中排泌膜泡在一般情况下呈酸性反应，因此进叺膜泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现红色，在这种情况下原生质一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内用中性红染色后，不产生液泡着色现象中性红会在细胞质中形成结晶，使细胞质产生暗红色对判断细胞颜色形成干扰，而乙酸鈉能够增加死细胞的膜通透性乙酸能够溶解中性红结晶使中性红从细胞质中透出细胞膜，减少干扰

本发明与现有技术相比，操作方法鈳以极易区分50um以上生物的存活状态减少人为观察的主观误差，检测耗时短准确性高，且溶液配制简单成本较低、效果明显。

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