胰高血糖素样肽-1
。在胰腺,胰高血糖素原被裂解为胰高血糖素(PG
33～61) 、肠高血糖素相关性胰多肽( glicentin-related pancreaticpeptide ,GRPP
,相当于PG 1～30) 和胰高血糖素原主要片段。而在肠道的L 细胞中,胰高血糖素原被裂解为GLP-1 (PG78～107
的酰胺化产物) 、GLP-2 (PG 126～158) 和肠高血糖素(PG1～69)(图1) [6] 。
　　肠道最初产生的GLP-1 是37 肽,为PG72～108 的氨基酸序列。肠分泌的GLP21 (1～37) 是无活性的肽链,需酶解切除N 端6 肽,成为具有生物活性的GLP21
(7～37) ,其C 末端甘氨酸可以作为酰胺化酶的底物,这样,肠道中天然产生的GLP21有80 %左右为GLP21 (7～36)
酰胺，相当于PG 78～107 的酰胺化产物,其序列在目前已研究的哺乳类动物中均相同[7 ] 。C
末端酰胺化增加了GLP-1 的体内稳定性。
　GLP-1 具有葡萄糖依赖性促进胰岛素分泌作用,由于这一特点,可避免引起严重的低血糖,并且低剂量持续性注射GLP-1
可使B 细胞对葡萄糖的反应性恢复正常[8]
。GLP-1通过cAMP依赖机制引起胰岛素基因的转录,从而增加胰岛素的mRNA,表明GLP-1也可以促进胰岛素的合成。
增加胰岛β细胞数量　许多体外研究显示,GLP-1具有诱导β细胞增殖和分化的直接作用。对胰岛细胞系大鼠胰岛细胞瘤来源的胰岛素分泌细胞系、GLP-1具有生长因子样作用,可以剂量依赖性地增加DNA的合成[9]
。Vahl等[10] 研究发现,GLP-1 可促使肥胖的高血糖大鼠出现胰岛的生长,增强β细胞的增殖。Leech 等[11]
研究发现,细胞内cAMP浓度升高可与鸟嘌呤核苷酸交换因子结合,形成cAMP2鸟嘌呤核苷酸
交换因子,它可活化Ras(小分子质量G蛋白的一个亚族)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein
kinase ,MAPK) 信号通路,该通路的活化可能在GLP-1引起的β细胞增殖中起着十分重要的作用。
抑制胰高血糖素分泌　GLP-1不仅能葡萄糖依赖性的作用于胰岛β细胞,也作用于胰岛α细胞,抑制胰高血糖素分泌,这一作用也是依赖于葡萄糖。因为分泌胰高血糖素的α细胞上不表达GLP-1R
,故对胰高血糖素分泌的抑制可能是通过GLP-1刺激胰岛素和生长抑素分泌增加的间接作用来实现。
抑制胰岛β细胞凋亡　对STZ鼠的胰岛细胞、离体的人类β细胞以及胰腺癌细胞进行凋亡诱导试验,结果均发现GLP-1
和exendin-4 减少了胰岛细胞的凋亡[12,13] 。这种作用可能是由其受体介导的。Hui 等[14]
通过对MIN6细胞的研究发现,其受体的激活是与cAMP 及蛋白激酶A磷酸化耦联的,通过一系列信号转导途径阻止细胞的凋亡。Farilla
等[15] 则发现,GLP-1降低了凋亡基因caspase-3
mRNA的转录水平及转录后活性,同时上调了抗凋亡基因Bcl2及Bcl-xL的表达水平。
在下丘脑、脑干及小脑中均有表达,提示其在脑内可能有一定的生理功能。最近有研究表明,餐后GLP-1
的分泌可以促使饱食感的产生,从而起到摄食终止信号的作用,研究发现这种作用与大脑调节摄食中枢的激活有关[16 ]
。但是,也有研究显示GLP-1R 基因剔除的小鼠并不一定产生糖尿病或肥胖,表明与GLP-1R
相关的信号通路对长期体质量控制无显著影响, 或者是当GLP-1R基因剔除后,机体启动了其他的代偿机制。另外有证据表明,GLP-1
对于维生素B6 引起的周围感觉神经的损伤能够起到保护作用[17 ] 。
2.2.2 对胃肠道功能的影响　在对鼠、猪和人的一系列研究中发现,GLP-1
可抑制胃肠道蠕动和胃液分泌,延迟胃排空。在2 型糖尿病患者中,GLP-1
可剂量依赖性地抑制胃排空,在外周血胰岛素水平并未升高的情况下明显降低餐后血糖浓度[18 ] 。同时,GLP21
还能高效地抑制胃液分泌。在为控制消化性溃疡而切断迷走神经的患者中,这种调节作用也消失,表明迷走神经在这一生理机制中发挥着重要作用。
对心脏的作用&&&&&&
3. 1 GLP21 对心脏的保护作用
有关。研究表明，在心肌缺血/再灌注过程中,心肌细胞损伤不但有坏死,也存在凋亡。心肌的缺血与缺血/再灌注损伤的细胞凋亡有如下特点:
①缺血早期以细胞凋亡为主。②梗死灶周边部分以细胞凋亡为主。③轻度缺血以细胞凋亡为主。Kajstura 等[19 ]
研究认为,细胞凋亡是急性心肌梗死时心肌损伤的主要形式，而细胞坏死是随后发生的。许多细胞因子及激素被发现参与了心肌细胞凋亡的过程，如胰岛素样生长因子、转化生长因子β、糖皮质激素等。最新的研究发现，GLP-1
也参与了心肌细胞的凋亡过程,并且可能具有抑制心肌细胞凋亡,保护心脏作用。Lazaros 等[20]
通过对急性心肌梗死和血管成形术后有收缩功能障碍的患者进行研究,发现GLP-1
能够改善这些患者的左室功能。并选取急性心肌梗死患者和成功的血管成形术后左室射血分数& 40
%的患者,在其基本治疗的基础上以1. 5
pmolP(kg·min) 的速度连续72h 输入GLP-1 ,发现GLP21
能够显著改善这些患者的左室射血分数、改善局部及整体的室壁运动指数,并且这种作用与发生心肌梗死的时间和部位无关,试验过程中患者只有短暂的胃肠道反应,说明GLP21
具有很好的耐受性。
Zhao 等[21]通过对大鼠离体正常心脏和心脏的缺血再灌注模型进行研究,发现GLP-1
可以直接作用于正常心脏,增加正常离体心肌的葡萄糖的摄取,使心肌收缩力减低,这种作用可能是不依赖胰岛素，而由GLP-1
直接作用于心脏而产生的。
&&&&&&&&然而，GLP-1
对于促进缺血后左心室功能的恢复,以及增加缺血后心肌的葡萄糖摄取的作用与胰岛素的作用非常相似,可能是依赖胰岛素而间接产生的。目前，国内尚无关于此项研究的相关报道,
国外对于GLP-1
对心肌缺血损伤后的恢复和梗死面积的作用以及相关机制的研究报道也较少,且具体结果仍存在争议。&&&&&&
&&&&&&&&&3.2.1
cAMP 相关途径　在大多数细胞类型中,核因子κB 的激活可诱导编码凋亡抑制蛋白C2IAP1、C2IAP2
基因表达，诱导抗凋亡基因Bcl22、Bcl2xL 的表达。研究表明，核因子κB
系统的激活可以有多条途径，包括cAMP2蛋白激酶途径中活化的蛋白激酶A 可直接激活核因子κB 系统，GLP21
介导的抗心肌细胞凋亡作用是否与该途径有关，尚有待于进一步证实。
3.2.2 PI3 K/AKT途径　PI3 K与AKT是促进抗细胞凋亡作用的重要调节因子，其过量产生可抑制细胞的凋亡。AKT 是PI3
K的靶蛋白之一，AKT 的激活过程可被PI3 K抑制剂Wort-mannin、ly294002
所阻断，且AKT的抗凋亡作用被抑制。因此，推测GLP21 的刺激信号可能通过增加PI3 K
的活性而上调AKT通路的活性，发挥其抗凋亡作用。
&&&&&&&&3.2.3
MAPK途径　MAPKs 参与细胞凋亡的信号转导过程。MAPKs 级联反应包括3 个顺序的活化过程：MAPKK
激酶、MAPK激酶与MAPK。每一种激酶又由不同成分组成：MAPKK激酶由一种苏氨酸蛋白激酶(C2RAF)
、一种苏氨酸蛋白激酶(B2RAF) 、MEK激酶(MEK kinase ,MEKK) 等组成，MAPK激酶由MAPKPERK
激酶(MAPKPERK kinase ，MEK) 、SAPKPERK 激酶(SAPKPERK kinase , SEK) 、MAPK
激酶3 (mitogen2actived protein kinase kinase3 ,MKK3) 、MAPK激酶6
(mitogen2actived protein kinase kinase 6 ,MKK6)
等组成，而MAPK包括ERK、应激活化蛋白激酶(JNKPSAPK)
、p38。MAPK家族有多个成员及多条反应途径,其中RAS-RAF-MEK-ERK信号通路的活化能促进细胞的增殖，抑制细胞的凋亡。由于Bose 等[23
] 研究发现GLP21 介导的抗心肌细胞凋亡作用可以被ERK抑制剂UO126
所阻断,因此推测其抗凋亡作用可能与激活该通路有关。总而言之,GLP-1
介导的心肌细胞抗凋亡信号转导途径及机制尚不完全清楚，有待于进一步研究证实。
展　望&&&&&&&综上所述，GLP-1
对于糖尿病治疗领域具有十分重要的作用，并且一些相关的用于治疗糖尿病的药物已处于临床试验阶段。另外，GLP-1
对于缺血/再灌注心肌细胞具有直接的保护作用，并且这种保护作用可能与其抑制心肌细胞的凋亡有关，但其抑制心肌细胞凋亡的信号转导途径及机制目前尚不完全清楚，因此加强这方面的研究有助于探索GLP-1
用于治疗心脏疾患的新途径，为今后治疗糖尿病及心脏疾病提供一种新方法。
&&&&附：GLP-1(7237)
或GLP-1(7-36) NH2 是无活性的GLP-1(1-37) 经酶解去掉N 端6 肽和C
端酰胺化后生成的具有高度活性的多肽。各种体外实验研究表明,GLP-1(7-37) 和GLP-1
(7-36)NH2不仅是一种胰岛素促泌剂,而且能促进胰岛素基因转录和生物合成，重新补充胰岛素池中因分泌而减少的胰岛素,不会导致β细胞耗。
已投稿到：小木虫 --- 500万硕博科研人员喜爱的学术科研平台
&&查看话题
中国发现非肽类小分子胰高血糖素样肽-1受体激动剂
http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=386479
这个项目目前的进展情况如何？有知道的吗？
感谢交流！
感谢交流！但近几年胰高血糖素样肽-1受体激动剂似乎很火，比如利拉鲁肽。
谢谢！去看看。
研究生必备与500万研究生在线互动！
扫描下载送金币一种新的胰高血糖素样肽-1类似物及其缓释技术的研究--《南开大学》2010年博士论文
一种新的胰高血糖素样肽-1类似物及其缓释技术的研究
【摘要】：胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)是由肠道L细胞分泌的一种肠肽激素,具有多种生理功能,有显著的血糖浓度依赖的刺激胰岛素分泌作用,可以降低空腹和餐后血糖,在2型糖尿病的临床治疗中具有较好的应用前景。但由于GLP-1在体内半衰期很短,被二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-IV)的快速降解和肾脏代谢作用,使其临床应用受到了很大限制。因此,开发更稳定的新型GLP-1类似物或缓释制剂,延长其体内有效作用时间已成为近年来关注的热门课题。
本文首先构建纤维素结合域(CBD)与链霉亲和素(SA)的融合蛋白,制备了表而生物偶联SA的纤维素磁性微球(SA-CBD-MCMS),通过生物素(biotin)结合的Oligo(dT),建立了从细胞或组织中快速提取mRNA的方法,并从大鼠胰腺中提取mRNA,克隆了大鼠GLP-1受体(GLP-1R)。并将含有GLP-1 R基因的重组表达载体pcDNA3.1(+)/GLP-]R转染含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的CHO/EGFP细胞,经抗性筛选、流式细胞分选和功能性分析,得到了稳定转染的细胞系CHO/EGFP/GLP-1R。该功能性报告基因细胞分析系统可以剂量依赖性的通过EGFP表达,对GLP-1 R激动剂的体外活性进行定性定量分析,为研究、开发和评价长效GLP-1类似物奠定了基础。
本研究创新性地合成了含有31个氨基酸的新的GLP-1类似物KGLP-1,其结构是在天然GLP-1(7-37)酰胺的N端添加一个赖氨酸(Lys)。利用上述CHO/RGFP/GLP-1R细胞评价体系及自制DPP-IV粗酶液对KGLP-1的体外活性和稳定性进行分析。结果显示,KGLP-1能以剂量依赖的方式激活GLP-1 R,其EC50值(2.44 nmol/L)与天然GLP-1 (0.83 nmol/L)相比略有升高：但KGLP-1具有显著的抗DPP-Ⅳ降解作用,与DPP-Ⅳ粗提物作用12h后仍能保持80%的活性。进步体内活性分析结果表明,KGLP-1能以剂量依赖的方式显著降低小鼠体内的血糖水平,在同等剂量下,给药2h后仍具有明显的降血糖和促胰岛素分泌作用,而天然GLP-1在给药1h后活性即消失。在糖尿病模型小鼠实验中,KGLP-1也同样显示出了明显的降血糖作用(p0.01)。
为了改善KGLP-1的肾脏清除,本研究制备了KGLP-1与HSA的融合蛋白KGLP-1/HSA,并对其体内外活性、稳定性进行了分析。体外分析结果表明,KGLP-1/HSA具有与GLP-1相似的GLP-1R激动剂活性,EC50值为314 nmol/L,虽然其活性低于天然的GLP-1及类似物KGLP-1,但显示了明显的抗DPP-Ⅳ降解作用,12 h后仍能刺激CHO/EGFP/GLP-1R细胞产生较强的荧光,其强度为原来的84%。体内活性分析结果表明,虽然KGLP-1/HSA在给药后1h才表现出明显的降血糖、促胰岛素分泌的作用,但这种活性可以维持8h以上,而GLP-1与KGLP-1在给药1至2h后效果即不显著。以上结果表明,通过与HSA的融合,KGLP-1/HSA能明显地减缓其体内代谢清除率,延长其体内作用时间。
此外,本研究还对KGLP-1的注射缓释制剂进行了探索。利用复乳(W/O/W)溶剂挥发法制备了载KGLP-1的PLA和PLGA微球,分别考察了高聚物的种类、平均分子量等因素对微球形态、平均粒径、包封率和体外释药特性的影响。结果发现,该类微球的包封率都小于40%,药物损失大。而采用S/O/O溶剂萃取法制备的载KGLP-1的PLGA长效注射微球其形态特征、包封率、体外释药均显示了较好的结果。电镜分析显示微球表面相对光滑致密,大小均一,平均粒径为33.5μm,包封率为85.5%,微球初始6h的突释为15.3%,14d的累计释放总量达到69.5%。采用糖尿病模型大鼠皮下注射给药,对血糖和血清胰岛素水平的考察结果显示,载有KGLP-1的PLGA微球可以提供稳定的药物释放,实现了给药一次,缓释10 d,控制血糖、促进胰岛素分泌的效果。
本论文以自行开发的SA-CBD-MCMS为工具,提取大鼠胰腺mRNA,克隆了大鼠GLP-1R。然后以GLP-1R为靶点构建了含有EGFP报告基因的功能性细胞分析系统CHO/EGFP/GLP-1R,以此作为GLP-1R激动剂体外活性评价的细胞模型。利用该模型对新型GLP-1类似物KGLP-1及其与HSA的融合蛋白KGLP-1/HSA进行体外活性、稳定性评价,结合KM小鼠、糖尿病模型动物的体内实验,证明了KGLP-1作为一种新的抗DPP-Ⅳ降解的GLP-1类似物的有效性,并通过与HSA的融合,可以延长其降低血糖、促进胰岛素分泌的作用时间。同时,采用PLGA为包埋材料,S/O/O溶剂萃取法成功制备了载KGLP-1的缓释微球制剂,实现了长效治疗的效果,为开发能够用于2型糖尿病临床治疗的长效GLP-1类药物及其缓释制剂奠定了理论基础。
【关键词】：
【学位授予单位】：南开大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2010【分类号】：R587.1【目录】：
摘要5-7Abstract7-14符号说明14-16第一章 前言16-54 第一节 胰高血糖素样肽-1的生物学特征16-26
1.1.1 胰高血糖素样肽-1的发现16-17
1.1.2 胰高血糖素样肽-1的分泌17-18
1.1.3 胰高血糖素样肽-1与其受体之间的相互作用18-22
1.1.4 胰高血糖素样肽-1的生理功能22-25
1.1.5 胰高血糖素样肽-1的代谢25-26 第二节 二肽基肽酶Ⅳ26-30
1.2.1 DPP-Ⅳ的结构与分布26-28
1.2.2 DPP-Ⅳ的功能28
1.2.3 DPP-Ⅳ与底物的接触反应特征28-29
1.2.4 DPP-Ⅳ的研究热点29-30 第三节 GLP-1与2型糖尿病的治疗30-33
1.3.1 2型糖尿病30-32
1.3.2 GLP-1用于2型糖尿病治疗的可行性及优越性32-33
1.3.3 GLP-1在2型糖尿病治疗中的研究方向33 第四节 长效GLP-1类似物的研究进展33-46
1.4.1 长效GLP-1类似物的种类33-39
1.4.2 已经上市或临床研究阶段的GLP-1类药物39-45
1.4.3 GLP-1类似物的局限性和缺点45-46 第五节 DPP-Ⅳ抑制剂的研究进展46-52
1.5.1 DPP-Ⅳ抑制剂的分类46
1.5.2 已经上市或临床研究阶段的DPP-Ⅳ抑制剂类药物46-51
1.5.3 DPP-Ⅳ抑制剂与其他降糖药联合应用51
1.5.4 DPP-Ⅳ抑制剂的局限性及缺点51-52 第六节 GLP-1类药物的发展趋势52-53 第七节 本研究的目的和意义53-54第二章 胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)的克隆54-83 第一节 材料和方法55-73
2.1.1 实验材料55-59
2.1.2 实验方法59-73 第二节 结果与分析73-80
2.2.1 Micron-sized MCMS的制备73-74
2.2.2 CBD结合活性的验证74-75
2.2.3 融合蛋白CBD-SA的克隆、表达75-77
2.2.4 Micron-sized MCMS与CBD-SA的结和力77-78
2.2.5 生物偶联方法与化学偶联方法对链霉亲和素亲和力的影响78
2.2.6 大鼠胰岛mRNA的提取及重组质粒pcDNA3.1/GLP-1R的构建78-80 第三节 讨论与小结80-82 小结82-83第三章 GLP-1R激动剂的细胞评价体系的建立83-101 第一节 材料和方法84-90
3.1.1 实验材料84-85
3.1.2 实验方法85-90 第二节 实验结果90-96
3.2.1 CHO/EGFP/GLP-1R细胞系的建立90-92
3.2.2 CHO/EGFP/GLP-1R细胞系的鉴定92-93
3.2.3 GLP-1浓度与EGFP表达量间的剂量关系93-96 第三节 讨论与小结96-100 小结100-101第四章 胰高血糖素样肽-1类似物KGLP-1101-116 第一节 材料和方法102-106
4.1.1 实验材料102-103
4.1.2 实验方法103-106 第二节 结果与分析106-112
4.2.1 KGLP-1的体外活性和稳定性106-107
4.2.2 KGLP-1对正常小鼠血糖的影响107-110
4.2.3 KGLP-1对糖尿病模型小鼠血糖的影响110-112 第三节 讨论与小结112-115 小结115-116第五章 KGLP-1/HSA融合蛋白的活性分析116-127 第一节 材料和方法117-119
5.1.1 实验材料117
5.1.2 实验方法117-119 第二节 结果与分析119-123
5.2.1 KGLP-1/HSA体外结合、活化GLP-1R的能力119-120
5.2.2 KGLP-1/HSA体外抗DPP-Ⅳ降解的能力120
5.2.3 KGLP-1/HSA体内降血糖、促进胰岛素分泌的效果120-123 第三节 讨论与小结123-126 小结126-127第六章 载KGLP-1的长效注射微球的研究127-148 第一节 材料和方法128-133
6.1.1 实验材料128-129
6.1.2 实验方法129-133 第二节 结果与分析133-141
6.2.1 复乳(W/O/W)溶剂蒸发法制备KGLP-1/PLA微球133
6.2.2 复乳(W/O/W)溶剂蒸发法制备KGLP-1/PLGA微球133-134
6.2.3 复乳溶剂蒸发法制备KGLP-1/PLA和KGLP-1/PLGA微球的性能分析134-137
6.2.4 S/O/O溶剂萃取法制备载KGLP-1的PLGA微球137
6.2.5 S/O/O溶剂萃取法制备KGLP-1/PLGA微球的体外释放实验137-139
6.2.6 S/O/O溶剂萃取法制备KGLP-1/PLGA微球的体内的活性评价139-141 第三节 讨论与小结141-147 小结147-148总结与展望148-151创新点151-152参考文献152-169致谢169-170在学期间完成论文170-172个人简历172
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【参考文献】
中国期刊全文数据库
王振敏;[J];上海工业;2002年02期
赵建华,廖维宏,陈建梅;[J];创伤外科杂志;2003年03期
苏庸春;李欣;于洁;戴碧涛;徐酉华;肖剑文;;[J];第三军医大学学报;2006年05期
刘志挺;吕竹芬;陈燕忠;;[J];广东药学院学报;2007年05期
吴之中,张政朴,鲁格,何炳林;[J];高分子通报;2000年01期
李孝红,袁明龙,熊成东,邓先模,黄志镗;[J];高分子通报;1999年01期
李利,王军,姜宏卫,南海荣;[J];国外医学.内分泌学分册;2002年01期
李晓丽;林东子;张志珍;;[J];医学分子生物学杂志;2008年05期
崔红星,张倩;[J];合成纤维;2004年04期
马光辉;;[J];科技潮;2006年12期
中国硕士学位论文全文数据库
范益军;[D];重庆大学;2005年
马国昌;[D];浙江大学;2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库
陆荣;郑雪芹;安晶;董锐;;[J];工程塑料应用;2009年02期
方玲;李君;戚嵘嵘;;[J];工程塑料应用;2009年06期
王志举,吴晓东;[J];安徽化工;2005年03期
曹新鑫;戴星红;刘静静;;[J];安徽化工;2008年01期
刘美静;吕建洲;;[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年03期
杜周和;寇波云;刘俊凤;胡祚忠;朱永群;张剑飞;;[J];安徽农业科学;2007年14期
杨瑛;郑文轩;;[J];安徽农业科学;2010年34期
郑文轩;杨瑛;;[J];安徽农业科学;2010年36期
季更生;刘玉华;勇强;余世袁;;[J];安徽农业科学;2011年04期
康文娟;张广梅;赵协慧;童丽;王津慧;刘占厚;;[J];安徽农业科学;2011年30期
中国重要会议论文全文数据库
夏磊;;[A];第七届功能性纺织品及纳米技术应用研讨会论文集[C];2007年
鲁玺丽;蔡伟;赵连城;;[A];第五届中国功能材料及其应用学术会议论文集Ⅱ[C];2004年
柴兰琴;李晓军;;[A];甘肃省化学会第二十四届年会论文集[C];2005年
赵凌冲;金锋;刘文明;;[A];第2届全国工业催化技术及应用年会论文集[C];2005年
匡德宣;孙晓梅;江勤芳;陈瑜;叶尤松;代解杰;;[A];2002年灵长类实验动物学术交流会论文摘要集[C];2002年
苏宁;连至诚;钟廷机;陈苇菁;李卫东;杨巧红;张书征;张万方;胡世平;曾强;张令梅;陈云;黄伟文;熊玉冰;刘冬年;宫雅南;李万根;郑笑兰;;[A];首届中国中医药实验动物科技交流会论文汇编[C];2002年
陈静;陈枢青;;[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
刘福来;杨敏;;[A];2006中国非金属矿工业大会暨第九届全国非金属矿加工应用技术交流会论文专辑[C];2006年
朱霄;李浩然;王勇;张蕾;;[A];第九届全国计算（机）化学学术会议论文摘要集[C];2007年
曲萍;曹羽;李帅;张力平;陈品;;[A];第二届中国林业学术大会——S11 木材及生物质资源高效增值利用与木材安全论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库
韩景辉;[D];黑龙江中医药大学;2010年
刘慧敏;[D];山东大学;2009年
孙咏红;[D];中南林业科技大学;2010年
王炳涛;[D];浙江大学;2010年
张逢春;[D];吉林大学;2011年
董莹;[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
张建安;[D];中国科学技术大学;2011年
李佳川;[D];成都中医药大学;2011年
李彩娜;[D];北京协和医学院;2011年
赵丽;[D];北京协和医学院;2011年
中国硕士学位论文全文数据库
严琦;[D];华中农业大学;2010年
叶伟;[D];浙江理工大学;2010年
陈玉凤;[D];郑州大学;2010年
杨轶;[D];郑州大学;2010年
杜少华;[D];郑州大学;2010年
赵玲玲;[D];辽宁师范大学;2010年
车军华;[D];辽宁师范大学;2010年
罗晓婷;[D];湖南中医药大学;2010年
韩蓉;[D];苏州大学;2010年
蔚芳;[D];浙江中医药大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库
吕建平,江国顺,姚剑英,刘汉虎;[J];安徽化工;1998年01期
何应,魏树礼;[J];北京医科大学学报;2000年03期
谭晓华,张亚历,姜泊,周殿元;[J];第一军医大学学报;2000年04期
陈戴蕤,贝建中,王身国;[J];高分子学报;1999年05期
申有青，张富尧，张一峰，沈之荃;[J];高分子学报;1995年02期
李雄伟,肖锦,邓先模,贾文祥;[J];高分子学报;1997年05期
李孝红,袁明龙,熊成东,邓先模,贾文祥,张燕华;[J];高分子学报;1999年02期
葛海雄,蒋锡群,杨时成,杨昌正;[J];高分子材料科学与工程;2001年01期
常青;[J];高分子材料科学与工程;1994年01期
管蓉,艾照全,李建宗;[J];高分子材料科学与工程;1997年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库
邹慧;;[J];海峡药学;2008年03期
袁其晓;;[J];国外医学.妇产科学分册;1979年06期
陈一岳;[J];国外医学.药学分册;1980年03期
张立;;[J];国外医学.妇产科学分册;1982年06期
何运钰;张立;;[J];皖南医学院学报;1982年01期
杨振芸;;[J];国外医学.计划生育分册;1985年01期
张立;;[J];国外医学.计划生育分册;1985年02期
Handelsman DJ;Swerdloff RS;袁其晓;;[J];国外医学.妇产科学分册;1986年05期
董领娇,郝兰生,潘竞先;[J];北京大学学报(医学版);1987年05期
兰南;[J];国外医学.内分泌学分册;1988年03期
中国重要会议论文全文数据库
杨为民;金歧端;刘吉开;卿晨;刘一丹;陈植和;;[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
康铁牛;凌云;王晓波;陈馥衡;杨新玲;;[A];科技创新与绿色植保——中国植物保护学会2006学术年会论文集[C];2006年
郑文竹;陈清西;黄璜;;[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
楼晨光;高丽梅;宋丹青;;[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
池木根;杨明;赵毅民;;[A];中国药理学会第十届全国神经学术会议暨浙江省药理学会2002年年会论文摘要集[C];2002年
王宇明;;[A];病毒性肝炎慢性化、重症化基础与临床研究进展学术会议论文汇编[C];2009年
陈悦;;[A];中国化学会第26届学术年会化学生物分会场论文集[C];2008年
赵希娟;李原芳;黄承志;;[A];第十届中国化学会分析化学年会暨第十届全国原子光谱学术会议论文摘要集[C];2009年
陈东生;;[A];2011年全国医药学术论文交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班资料汇编[C];2011年
李平利;王凤山;;[A];山东省药学会2010年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库
项铮;[N];科技日报;2011年
康义瑶;[N];医药经济报;2011年
陶钧;[N];中国医药报;2005年
王勇;[N];医药经济报;2003年
;[N];人民日报;2008年
爱斯;[N];医药经济报;2010年
王永杰;[N];农村医药报（汉）;2005年
;[N];中国高新技术产业导报;2002年
北京地坛医院副院长
成军;[N];健康报;2008年
杜丽娜?　金义光;[N];中国医药报;2007年
中国博士学位论文全文数据库
高智慧;[D];南开大学;2010年
吴晓琰;[D];复旦大学;2011年
赵海军;[D];吉林大学;2006年
孙光福;[D];复旦大学;2005年
王硕;[D];吉林大学;2011年
蒋翔锐;[D];浙江大学;2005年
褚吉成;[D];天津大学;2004年
何严萍;[D];复旦大学;2004年
丁晓颖;[D];天津医科大学;2003年
段学民;[D];天津大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库
李刚;[D];郑州大学;2002年
王思明;[D];武汉大学;2005年
黄飞;[D];武汉大学;2004年
马臻;[D];浙江大学;2006年
梅德盛;[D];江西师范大学;2005年
赵瑞飞;[D];兰州大学;2010年
马国芬;[D];兰州大学;2010年
张建云;[D];河南农业大学;2004年
朱青;[D];复旦大学;2011年
敖雷;[D];浙江大学;2006年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 知识超市公司
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备74号丁香园App是丁香园社区的官方应用，聚合了丁香园论坛和丁香客的精彩内容。医生可通过丁香园App浏览论坛，也可以在这个医生群集的关系网络中分享和互动，建立更广泛的学术圈子。
扫描二维码下载
今日：3 | 主题：370224
每发1个新帖可以获得0.5个丁当奖励
【求助】人血浆中胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的检测
楼层直达：
这个帖子发布于3年零190天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已关闭悬赏丁当:2
请问我要测人血浆中胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的话，收集血样的时候，抗凝管里面加多少抑肽酶呢？我用的是sigma公司的A1153抑肽酶。谢谢！最好有相关文献。
分享到哪里？
本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人胰高血糖素样肽1(GLP-1)的水平。向预先包被了人胰高血糖素样肽1(GLP-1)单克隆抗体的酶标孔中加入胰高血糖素样肽1(GLP-1)，温育；洗涤后，加入HRP标记过的胰高血糖素样肽 1(GLP-1)抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人胰高血糖素样肽1(GLP-1)的浓度呈正相关。 试剂盒组成 1 7 显色剂 A液 6ml 标准品(32pmol/L) 0.5ml 2 标准品稀释液 3ml 8 显色剂 B 液 6ml 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 终止液 6ml 4 酶标试剂 6ml 10 说明书 1 份 5 30倍浓缩洗涤液 20ml 11 封板膜 2 张 6 样品稀释液 6ml 12 密封袋 1 个 需要而未提供的试剂和器材 1． 37℃恒温箱。 2． 标准规格酶标仪。 3． 精密移液器及一次性吸头 4． 蒸馏水， 5． 一次性试管 6． 吸水纸 注意事项 1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差 3． 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 4． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 5． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 7． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中 标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 操作程序 1． 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释)： 16pmol/L (5号标准品) 120μl 的原倍标准品加入120μl 的标准品稀释液 8pmol/L (4号标准品) 120μl 的5号标准品加入120μl 的标准品稀释液 4pmol/L (3号标准品) 120μl 的4号标准品加入120μl 的标准品稀释液 2pmol/L (2号标准品) 120μl 的3号标准品加入120μl 的标准品稀释液 1pmol/L (1号标准品) 120μl 的2号标准品加入120μl 的标准品稀释液 2． 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品 50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 3． 弃去液体，甩干，每孔加满 30 倍稀释后洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。 4． 每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 5． 弃去液体，甩干，每孔加满 30 倍稀释后洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。 6． 每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟. 7． 取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 8． 测定：以空白孔调零，在 450nm 波长下测量各孔的吸光度值(OD 值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 9． 根据标准品的浓度及对应的 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的 OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
分享到哪里？
你没看清问的是什么吧？
分享到哪里？
我查到一点点相关文献，但是都是国内的，可信多自己得琢磨。而且我也做相关的东西，也碰到了相同的问题，朋友，你找到结果没有？
分享到哪里？
每ml全血加0.3mmol/ml EDTA 20ul和含有0.1umol/ml Diprotin A与500KIE/ml Aprotinin（就是你所说的A1153抑肽酶）的酶抑混合液4ul。我不知道有没有文献，不过我们从04年到现在一直是这么做的，检测过很多人和动物的血样，也做过全套的方法学，应该没问题的。不过最重要的还是整个操作要低温，还要快，血样最好当天检测。
分享到哪里？
补充：酶量我们参考的是Phoenix Pharmaceuticals,Inc.的测艾塞那肽的试剂盒的说明书
分享到哪里？
cqfwyj 补充：酶量我们参考的是Phoenix Pharmaceuticals,Inc.的测艾塞那肽的试剂盒的说明书 您好，请问如果测血中活性GLP-1，是空腹时取血吗？
分享到哪里？
关于丁香园