 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
基底细胞癌中肿瘤相关信号通路研究进展
下载积分：1099
内容提示：基底细胞癌中肿瘤相关信号通路研究进展
文档格式：PDF|
浏览次数：1|
上传日期： 08:54:01|
文档星级：
该用户还上传了这些文档
下载文档:基底细胞癌中肿瘤相关信号通路研究进展.PDF
官方公共微信　　生物通报道& 由Brigham妇女医院(BWH)和Dana-Farber癌症研究所(DFCI)领导的一个研究小组揭示出了一些惊人的新发现，证实一种已知在癌症中起关键作用的重要信号通路，在2型糖尿病的形成中也扮演了重要的角色。这些发表在11月17日《自然》（Nature）杂志上的研究结果，阐明了一类长期的糖尿病药物：噻唑烷二酮类(Thiazolidinediones TZDs)发挥作用改善葡萄糖代谢的机制，表明了这一MEK/ERK信号通路的抑制剂或许也有望用于治疗2型糖尿病（延伸阅读： ）。
论文的主要作者、Brigham妇女医院内分泌、糖尿病和高血压科研究人员Alexander S. Banks博士说：“人们普遍认为噻唑烷二酮类药物能够大大助益2型糖尿病治疗，但它们也具有重大的风险。问题在于，我们是否能够通过稍微改变这些药物，或是从不同的方向来处理这一信号通路将这些副作用降至最小？”
这一假设使得Banks和Dana-Farber癌症研究所癌症生物学系的研究人员Bruce Spiegelman博士，将焦点放到了称作为CDK5的一个关键作用分子上。作为一种激酶，CDK修饰了TZDs靶向的分子PPARγ上的一个关键位点。为了进一步地了解CDK5的作用，Banks和同事们构建出了一种脂肪组织中缺乏CDK5的特殊小鼠品系――PPARγ在脂肪组织中高度活化，人们认为TZDs就是在脂肪组织中起作用。
并没有证实他们对于CDK5的最初猜测，该研究小组的结果指向了一个非常不同的方向：他们的结果表明另一个关键激酶参与其中。与哈佛医学院的研究人员合作，Banks、Spiegelman和同事们进行了广泛的、无偏倚搜寻以确定它的身份。研究最终将他们导向了称作为ERK的激酶。
在对ERK的功能进行详细的生物化学研究后，研究小组着手检测了它在葡萄糖代谢中的作用，发现了一些阻断ERK功能的MEK抑制剂显著地改善了小鼠糖尿病模型的胰岛素抵抗。
Banks说：“一类抑制ERK作用的新药已被开发出来，主要用于针对癌症。这些称作为MEK抑制剂的药物可帮助延长晚期黑色素瘤患者的生命。这篇论文最令人兴奋的一个方面是，你可以利用这些设计用于治疗癌症的MEK抑制剂，以更低、更安全的剂量抑制糖尿病中看到的ERK异常激活。”
Spiegelman说：“所有为开发出新疗法而付出的尝试都带有风险，而在此处看到的这些机会值得进一步地在临床中去进行探索。”
尽管还需要开展更多的工作来确定MEK抑制剂是否是安全、有效的2型糖尿病治疗方法，这项新研究为揭示TZD的作用分子基础提供了重要的窗口。此外，它表明了抑制MEK/ERK有可能是减小TZD药物有害效应的一个可行之路。
（生物通：何嫱）
生物通推荐原文摘要：
An ERK/Cdk5 axis controls the diabetogenic actions of PPARγ
Obesity-linked insulin resistance is a major precursor to the development of type 2 diabetes. Previous work has shown that phosphorylation of PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor γ) at serine 273 by cyclin-dependent kinase 5 (Cdk5) stimulates diabetogenic gene expression in adipose tissues1. Inhibition of this modification is a key therapeutic mechanism for anti-diabetic drugs that bind PPARγ, such as the thiazolidinediones and PPARγ partial agonists or non-agonists2. For a better understanding of the importance of this obesity-linked PPARγ phosphorylation, we created mice that ablated Cdk5 specifically in adipose tissues. These mice have both a paradoxical increase in PPARγ phosphorylation at serine 273 and worsened insulin resistance. Unbiased proteomic studies show that extracellular signal-regulated kinase (ERK) kinases are activated in these knockout animals. Here we show that ERK directly phosphorylates serine 273 of PPARγ in a robust manner and that Cdk5 suppresses ERKs through direct action on a novel site in MAP kinase/ERK kinase (MEK). Importantly, pharmacological inhibition of MEK and ERK markedly improves insulin resistance in both obese wild-type and ob/ob mice, and also completely reverses the deleterious effects of the Cdk5 ablation. These data show that an ERK/Cdk5 axis controls PPARγ function and suggest that MEK/ERK inhibitors may hold promise for the treatment of type 2 diabetes.
我来说两句(0)
[Ctrl+Enter]
热搜：||||
知名企业招聘
医药/产业</
相关文章：
加载相关文章......
今日文章：
加载今日文章......
版权所有 生物通
Copyright&
, All Rights Reserved
联系信箱：客服电话：
客服在线时间：09:00~22:30(节假日不休息)
客服邮箱：在线投稿：
《临床输血与检验》Slit／Robo信号通路在妇科肿瘤发生中的作用
　　Slit及其受体Roundabout(Robo)是近年发现的参与神经轴突导向、细胞迁移甚至轴突分支、树突生长过程的新的导向分子。作为神经导向因子，Slit／Robo在调控中枢神经系统发育中的作用已被逐步阐述明确。而近年来研究发现，Slit／Robo信号还可能参与了肿瘤的发生、发展。本文就其在肿瘤，尤其是妇科肿瘤发生发展中的作用予以综述。
　　1 、Robo家族的生物学特性Slit是由发育期中线胶质细胞和中隔组织分泌的一组分子质量为170～190 ku的细胞外分泌蛋白，其结构域组成包括氨基端短的信号肽，4个连续富含亮氨酸的重复序列，一串(69个)表皮生长因子样的功能区，一个层黏连蛋白G样结构域和一个羧基端富含半胱氨酸的区域。从果蝇至哺乳动物迄今已发现3种亚型的S／／t基因，分别是S／／tl、S／it2和f3。Slitl仅表达于神经组织；Slit2分布于神经组织、肾、肺和内皮细胞；Slit3则定位于线粒体，主要分布于肺组织，在肾、脑、心脏、脾和淋巴结也有分布 ]。
　　Slit受体蛋白Robo家族是一种单次跨膜蛋白哺乳动物中包括4个成员：Robol／Duttl、Robo2、Robo3／Rigl和Robo4／Magic Roundabout，其主要表达于神经系统中，也表达于非神经细胞上．如血管内皮细胞，提示Robo可能具有神经系统外的其他重要生物学功能。
　　Robol。Robo2，Robo3的胞外结构域含有5个免疫球蛋白样结构域和3个纤连蛋白Ⅲ重复序列，胞内段较大．有潜在的酪氨酸磷酸化位点和脯氨酸丰富区。胞内段含有4个保守的胞内基序。即CC0、CCl、CC2和CC3。CCl基序的酪氨酸残基可被Abelson(Ab1)酪氨酸激酶磷酸化，从而下调Robo介导的信号传递：CC2基序结构域能与细胞内信号分子Enabled(Ena)相互作用，调节细胞骨架变化。而Robo4的结构较为特殊， 比Robo家族其他成员要小：相对于其他成员，胞外部分仅有2个免疫球蛋白样结构域和2个纤连蛋白结构域，胞内区仅有CCO和CC2两个基序。用体外培养方法，发现Robo4仅表达于内皮细胞和缺氧细胞，用原位杂交和免疫组织化学法。显示体内Robo仅表达于内皮细胞 Robo4在神经细胞外的内皮细胞中的发现表明Slit／Robo在调控神经系统发育以外的领域&& 血管形成过程中可能起着重要作用Sait。在女性生殖系统的表达研究发现．Slit／Robo不仅表达于中枢神经系统，在女性生殖系统中也有表达，其持续表达可能参与了许多重要的女性生殖生理过程。Dickinson等 发现，羊卵巢初级卵母细胞中有Slit／Robo表达。当卵巢发育时．随着增殖卵母细胞数量的减少，Slit／Robo的表达上升。此外。在人卵巢的黄体细胞和间质细胞亦存在Slit／Robo的表达。在体外原代培养的人黄体细胞．若阻断Slit／Robo的活性可以增加细胞迁移。减少细胞凋亡．表明Slit／Robo可能参与调控妇女的溶黄体过程。
　　Slit／Robo还表达于人子宫内膜腺上皮细胞及输卵管上皮细胞。妊娠妇女子宫蜕膜组织Slit2／Slit3和Robol／Robo4的表达低于非妊娠妇女月经分泌中期子宫内膜的表达水平。体外实验显示．Slit／Robo表达还可能受到性激素的调控。用雌孕激素联合处理永生化的子宫内膜腺上皮细胞(hTERT&EEpC细胞系)，可显着抑制Robol的表达。因此。Slit／Robo的时空特定性表达可能参与了人体内许多重要的生理过程，其表达异常有可能从多方面影响细胞生长、黏附、迁移，从而形成肿瘤。
　　3 SlifRobo在妇科肿瘤中的表达肿瘤组织中Slit／Robo表达异常．并且可能存在组织特异性。Ma等 研究了子宫内膜癌复发和未复发患者初次手术时肿瘤组织中Slit和Robo的表达情况，发现复发患者较未复发患者Slit2和Robol的表达升高。因此。认为Slit2／Robol信号通路可能在肿瘤转移、复发中发挥作用，并且可能是一个预测子宫内膜癌复发的潜在的生物学标记物。
　　然而，在很多其他类型的上皮性肿瘤中，人们却发现了相反的现象。Narayan等 检测了浸润性宫颈癌及其癌前病变中Slitl、Slit2、Slit3、Robol和Robo3的表达水平及其启动子甲基化的状态，结果显示：在浸润性宫颈癌中Slit／Robo的表达下调、启动子区域存在高度甲基化，并且启动子高甲基化是肿瘤发生的早期事件。此外，作者还发现Slit2缺失的宫颈癌患者生存预后不良。
　　对卵巢癌的研究中也发现了Slit、Robo基因的表达下调。卵巢生殖细胞肿瘤中Slit3的表达存在缺失，上皮性卵巢癌的体外研究亦发现有Slit／Robo家族的表达下降H。。，并且细胞分化越低。Slit／Robo的表达越低。Qiu等_1o 检测了66例卵巢癌组织标本及卵巢癌细胞系中 基因的表达情况以及启动子的甲基化程度，发现66例卵巢癌标本中56例 f2启动子高甲基化。52例 f2表达下调，并且启动子高甲基化的程度与鲫 基因的表达相关。增加 f2的表达可以抑制细胞生长、迁移、克隆形成及增加凋亡。然而在男性前列腺癌中，却发现Slitl～SIi乃表达上调而R 01表达下调。
　　这些研究结果表明Slit／Robo信号通路在不同的肿瘤发挥的生物学功能不同．促进肿瘤生长的机制也不尽相同。这有待于进行深入细致的研究，以阐明矛盾背后的统一。
　　4 Slit／Robo信号通路在妇科肿瘤发生中的机制
　　4．1 Slit／Robo信号与细胞生长、迁移和死亡Slit／Robo信号通路在哺乳动物发育过程中的重要作用之一是抑制细胞的异常迁移。Slit与Robo结合后，可以通过与细胞内信号分子abl酪氨酸激酶、enabled、Slit-Robo Rho GTP酶激活蛋白(srGAP)，son 0fsevenless(SOS)以及Dreadlocks(Dock)分别作用，调节细胞骨架从而直接调控细胞迁移[1引。或是通过刺激细胞膜表面的黏附分子P&cadherin和B&catenin表达升高，增加细胞间的黏附作用而抑制细胞迁移。
　　在肿瘤的进展过程中．如果由于Slit／Robo基因的杂合性缺失、等位基因缺失或启动子区甲基启动子造成其表达下调或失活．则可能通过上述途径造成抑制细胞迁移能力下降，从而使得肿瘤细胞的转移能力增加。Donninger等口 用基因芯片和定量反转录聚合酶链反应(qRT&PCR)对浆液性的卵巢癌基因组表达进行研究，发现 表达水平与肿瘤细胞的迁移能力呈负相关，并且Sj 在卵巢癌中表达下调。研究表明在卵巢癌SKOV3及PEO一14细胞系中，阻断Slit／Robo的活性可以减少细胞凋亡。
　　Stella等n罚的研究结果也发现：在子宫内膜癌细胞系Hec1-A和卵巢癌细胞系SKOV3中存在Slit2／Robol的表达。降调Slit2的表达可以增加肿瘤细胞的迁移能力，反之若将Slit2过表达，则可显着抑制肿瘤细胞依赖于肝细胞生长因子(HGF)的侵袭和转移．并且Slit2的这种抗转移能力可能是通过抑制肌动蛋白介导的突出力以及增加钙黏蛋白介导的细胞间黏附来实现的除调控细胞迁移外，Slit／Robo信号还可以调控细胞的增殖和死亡。在Slit2转染的成纤维细胞瘤和鳞状细胞癌中，细胞凋亡增加、增殖减少。这一点，在裸鼠实验中也已得到证实。注射了Slit2的裸鼠成瘤实验发现，抗凋亡相关因子Bcl&xl和增殖相关的细胞周期蛋白Cdk6、CyclinD1表达均下降．其可能的促凋亡机制是激活Caspase一3通路而实现的。
　　因此，在某种程度上而言， 被认为是一种抑癌基因，Slit／Robo信号通路发挥了抑制肿瘤细胞生长的作用。
　　但也有些学者报道了相反的研究结果。Schmid等研究发现Slit／Robo信号可以通过增强基质金属蛋白酶9(MMP一9)和血管内皮生长因子(VEGF)的活性利于肿瘤细胞通过血脑屏障，从而促进乳腺癌的脑转移，因而认为Slit／Robo信号能够促进乳腺癌细胞迁移。对直肠癌的研究也发现Slit2／Robol有促进肿瘤生成的作用。Slit／Robo表达增加与直肠癌患者的不良预后有关，其机制可能是Slit2与Robol结合后。通过Haikai影响E-cad的泛素化．从而增加E-cad的降解，从而导致上皮细胞向间质细胞转化、侵袭能力增加、最终形成肿瘤_l引。这更说明了Slit／Robo信号在肿瘤发生过程的重要性及复杂性，详细机制有待于进一步的研究予以阐明。
　　4．2 Slit／Robo信号与生理性及病理性血管生成 血管生成是肿瘤赖以生长、转移的基础。血液能提供肿瘤代谢及营养需要，并提供肿瘤细胞血源性播散的途径。原位癌发展到侵袭性癌的关键就在于肿瘤新生血管的生成。研究表明，Slit／Robo信号可能在生理性及病理性血管生成中发挥重要作用。
　　Liao等 发现在足月胚胎绒毛膜上存在Slit2／Robol的表达。在毛细血管内皮细胞上亦有Robol的表达。这说明Slit2／Robol可能参与了胚胎发生过程中的血管形成。由于生殖系统的器官，如卵巢、子宫内膜和胚胎组织都是高血管密度的，且血管生成和脉管重塑活动十分活跃。因此研究妇科肿瘤中Slit／Robo信号在促肿瘤血管生成中的作用就显得更为重要。有研究显示，Slit／Robo信号在许多不同类型的肿瘤中都参与了病理性血管生成。
　　然而．Slit／Robo究竟是通过哪条具体的通路来实现其病理性血管生成的作用， 目前尚存争议。
　　Wang等[4]发现肿瘤细胞能够分泌Slit2，其可以结合血管内皮细胞上的Robol受体，吸引血管内皮细胞向肿瘤内迁移，从而诱导肿瘤的新生血管形成，并促使肿瘤快速生长[21]。通过Robol胞外区的特异性抗体R5阻断Slit2／Robol信号，则可使肿瘤血管密度明显降低和肿瘤体积显着缩小。Wang等 研究也发现。在I=I腔癌和地鼠颊囊癌成癌过程中由癌前阶段向癌转化时，Slit2／Robol参与了血管形成&开关&的激活，通过R5抗体阻断Slit2／Robol信号可抑制自发成癌动物模型的肿瘤新生血管形成。
　　相反，其他学者的研究则发现，Slit与Robo4而非Robol结合，才是真正的血管生成诱导因子。激活Slit2／Robo4信号可抑制由VEGF介导的内皮细胞迁移和脉管生成&]。研究发现在人微血管内皮细胞(HMVEC)和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中均有Robo4 的表达．在培养的HUVEC 加入Slit2可以抑制HUVEC的迁移， 并且这种作用可以被Robo的阻断剂(RoboN)所阻断，表明Slit2／Robo4信号抑制血管内皮细胞的迁移从而抑制新生血管形成。
　　Slit2既可以与Robol结合又可以与Robo4结合。
　　考虑到细胞内周期性核苷酸和钙离子浓度的变化可能会导致轴突导向因子从抑制型向诱导型转变或者逆转 ，Slit／Robo信号调控肿瘤新生血管的生成可能存在组织特异性和某些时空特异性。这其中的分子机制复杂，值得进一步去探讨。
　　5 展望虽然目前在很多方面已发现Slit／Robo信号通路参与肿瘤的发生和发展。如调控肿瘤细胞黏附迁移、生长和死亡，以及促进肿瘤新生血管形成等，但是仍然存在很多尚待解决的难题。如何解释那些在肿瘤发生发展中存在相互矛盾的结果，妇科肿瘤中生殖激素又对Slit／Robo信号通路起着什么调控作用，相信随着对Slit／Robo信号通路的进一步探索和研究．人们必能了解清楚此信号通路，为妇科肿瘤的辅助诊断及靶向治疗提供理论依据。
　　本文是节选自的医学论文，感谢你的阅读！
我们的服务
客服经理咨询电话：025- 客服经理咨询QQ
客服经理咨询Email：
建议及投诉电话：025- 建议投诉QQ
建议及投诉Email：
期刊合作QQ
期刊合作Email：
国家信息产业备案号码：苏ICP备号
【免责声明】：本网站所提供的信息资源如有侵权、违规，请及时告知【doc】Wnt信号通路成员APC蛋白和β—catenin与肿瘤的关系β,蛋白,成员,肿瘤的,..
扫扫二维码，随身浏览文档
手机或平板扫扫即可继续访问
【doc】Wnt信号通路成员APC蛋白和β—catenin与肿瘤的关系
举报该文档为侵权文档。
举报该文档含有违规或不良信息。
反馈该文档无法正常浏览。
举报该文档为重复文档。
推荐理由：
将文档分享至：
分享完整地址
文档地址：
粘贴到BBS或博客
flash地址：
支持嵌入FLASH地址的网站使用
html代码：
&embed src='/DocinViewer-4.swf' width='100%' height='600' type=application/x-shockwave-flash ALLOWFULLSCREEN='true' ALLOWSCRIPTACCESS='always'&&/embed&
450px*300px480px*400px650px*490px
支持嵌入HTML代码的网站使用
您的内容已经提交成功
您所提交的内容需要审核后才能发布，请您等待！
3秒自动关闭窗口肿瘤坏死因子_通过激活NF_B信号通路加快肝细胞周期进程04
上亿文档资料，等你来发现
肿瘤坏死因子_通过激活NF_B信号通路加快肝细胞周期进程04
ＲｅｓｅａｒｃｈＰａｐｅｒｓ研究报告；生物化学与生物物理进展；ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎ；ｗｗｗ．ｐｉｂｂ．ａｃ．ｃｎ；肿瘤坏死因子α通过激活ＮＦ－κＢ信号通路；加快肝细胞周期进程＊；杨季云１）张思仲１）＊＊郭红２）曾祥元３）马布仁；（１）四川大学华西医院医学遗传研究室，生物治疗国；２）；四川大学生物治疗国家重点实验室基因工程小鼠中心，
ＲｅｓｅａｒｃｈＰａｐｅｒｓ研究报告生物化学与生物物理进展ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓ２００７，３４（６）：６０４￣６１０ｗｗｗ．ｐｉｂｂ．ａｃ．ｃｎ肿瘤坏死因子α通过激活ＮＦ－κＢ信号通路加快肝细胞周期进程＊杨季云１）张思仲１）＊＊郭红２）曾祥元３）马布仁３）（１）四川大学华西医院医学遗传研究室，生物治疗国家重点实验室疾病基因组学研究室，成都６１００４１；２）四川大学生物治疗国家重点实验室基因工程小鼠中心，成都６１００４１；３）成都军区总医院临床实验科，成都６１００８３）摘要在慢性炎症部位有易发肿瘤的倾向，大约有２０％的恶性肿瘤发生与慢性炎症相关，肝细胞癌是世界第三大癌症死亡病因，其患者多数有慢性炎症病史，当炎症慢性迁延，肝细胞癌发生率明显增加．但慢性炎症与肿瘤发生与发展的细胞和分子Ｂ机制仍然不清楚．利用人肝细胞株Ｌ－０２细胞，研究肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）对细胞周期的影响及其机制，并探讨核因子κ（ＮＦ－κＢ）和ＥＲＫ１／２活化对细胞周期的影响，以期能更确切地阐明炎症介质ＴＮＦ－α在肝细胞癌发生发展中的作用．发现ＴＮＦ－α能促进肝细胞从Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期转换．蛋白质印迹检测表明，ＴＮＦ－α能以剂量依赖方式诱导ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，而对ｃｙｃｌｉｎＥ的Ｂ，ＥＲＫ１／２，抑制ＮＦ－κＢ活化降低了ＴＮＦ－α诱导的ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，导致细胞周期表达无明显影响．同时ＴＮＦ－α能激活ＮＦ－κ阻滞于Ｇ０／Ｇ１期．抑制ＥＲＫ１／２活化则对细胞周期和ｃｙｃｌｉｎＤ１表达无显著影响．结果提示，ＴＮＦ－α通过活化ＮＦ－κＢ信号通路，诱导ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，加快细胞周期进程，这可能是促进肿瘤的发生发展重要机制．针对ＴＮＦ－α和ＮＦ－κＢ的治疗可能延长慢性炎症相关性肿瘤的潜伏期和抑制肿瘤的发展．关键词肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－αＢ（ＮＦ－κＢ），胞外信号调节激酶（ＥＲＫ），细胞周期，慢性炎症，肿瘤发生），核因子κ学科分类号Ｒ７３散发肿瘤的病因很难确认，但是，致癌物的作用和慢性炎症是肿瘤发生发展的重要基础．在慢性炎症部位有易发肿瘤的倾向，大约有２０％的恶性肿瘤发生与慢性炎症相关［１］．肝细胞癌是世界第三大癌症死亡病因，其患者多数有慢性炎症病史，当炎症慢性迁延，肝细胞癌发生率明显增加［２］．运用抗炎药物可延长晚期肝癌病人生存期［３］．因此，慢性炎症是肝细胞癌发生和发展的重要因素［２，４］．但炎症与肝细胞癌发生与发展的细胞和分子机制仍然不清楚．在炎症过程中，炎症细胞分泌多种炎症因子，如肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα，ＴＮＦ－α）、ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＩＬ－８等．它们通过促进细胞增生，迁移和血管生成参与组织损伤与修复．肿瘤坏死因子α是一种主要由活化的巨噬细胞分泌的多功能炎症因子，也可由肿瘤细胞产生，有广泛的生物学功能．在临床中发现，ＴＮＦ－α在乳腺癌、前列腺癌，膀胱癌、结肠癌、肝癌、淋巴瘤和白血病的肿瘤细胞和基质细胞中都有表达，其阳性的患者预后较差［４］．抑制炎症细胞因子分泌减慢了乳头状瘤的发展．而腹腔注射ＴＮＦ－α则促进乳头状瘤的生长和肿瘤组织内的血管生成［５］．在化学致癌物诱导的皮肤癌中，ＴＮＦ－α促进了恶性肿瘤发生，而敲出ＴＮＦ－α及其受体基因的小鼠表现出对化学致癌物的耐受［６，７］．用致癌物处理肝干细胞，可诱导细胞增生和肿瘤坏死因子分泌，而敲出了ＴＮＦＲⅠ基因的小鼠肝干细胞增生和肿瘤形成明显降低［８］．因此，炎症细胞分泌的肿瘤坏死因子可能作为肿瘤促进因子，参与了肿瘤的发生发展．在肿瘤的发生发展中，细胞异常增生是一个重要的特征，表现为细胞周期调节紊乱．因此，本文利用人肝细胞株Ｌ－０２细胞，观察ＴＮＦ－α对细胞周期的影响，并探讨核因子κＢ（ＮＦ－κＢ），胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）１／２活化对细胞周期的影响，以期能更确切地阐明炎症介质ＴＮＦ－α在肝细胞癌发生发展中的作用．＊国家重点基础研究发展规划项目（２００４ＣＢ５１８８０５），国家自然科学基金（３０４７０９６０，３０３７１４９１）资助项目．＊＊通讯联系人．Ｔｅｌ：０２８－８５１６４００９，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｚｚｈａｎｇ＠ｍｃｗｃｕｍｓ．ｃｏｍ收稿日期：２００６－１１－１７，接受日期：２００７－０１－１７２００７；３４（６）杨季云等：肿瘤坏死因子α通过激活ＮＦ－κＢ信号通路加快肝细胞周期进程?６０５?１材料与方法到ＰＶＤＦ膜．３％ＢＳＡ封闭１ｈ，分别加入一抗，４℃孵育过夜，ＴＢＳ－Ｔ洗涤１０ｍｉｎ，重复３次，加二抗，室温孵育１ｈ，ＴＢＳ－Ｔ洗涤１０ｍｉｎ，重复３次．加ＥＣＬ，Ｘ光片曝光．ＮＦ－κＢ活化的转录因子活性ＥＬＩＳＡ检测１．４．１细胞核蛋白的提取．细胞接种于７５ｃｍ２培养１．４瓶，细胞生长至８０％融合度时用于实验．先弃去培养基，Ｈａｎｋ&ｓ液洗涤２次，分别加入０、１０、２０、５０和１００μｇ／ＬＴＮＦ－α刺激细胞２ｈ．ａ．弃去培养液，５ｍｌＰＢＳ（含磷酸酶抑制剂）洗涤１次，加入１０ｍｌＰＢＳ（含磷酸酶抑制剂），细胞刮收集细胞，转移到离心管中，４℃，５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃去上清液，放置于冰上．ｂ．使用５０μｌ裂解缓冲液重悬细胞，高速涡旋１０ｓ．ｃ．重悬液放置在冰上，摇床１５０ｒ／ｍｉｎ孵育３０ｍｉｎ．ｄ．高速涡旋３０ｓ，４℃，１４０００ｇ离心１０ｍｉｎ，吸取上清转移到离心管，Ｂｒａｄｆｏｒｄ法检测蛋白质浓度，保存于－８０℃，避免反复冻融．Ｂ活性．ａ．每孔加１．４．２ＥＬＩＳＡ测定核蛋白中ＮＦ－κ入３０μｌ结合缓冲液，再分别加入２０μｌ样品（含１０μｇ蛋白，裂解缓冲液稀释），阳性对照孔加入５μｇＲａｊｉ细胞核提取物，空白对照孔加入２０μｌ裂解缓冲液．ｂ．盖子密封，室温，摇床１００ｒ／ｍｉｎ，孵育１ｈ，２００μｌ１×洗涤缓冲液洗涤３次．ｃ．每孔加１００μｌＮＦ－κＢ抗体（１∶１０００），盖子密封，室温，孵育１ｈ，２００μｌ１×洗涤缓冲液洗涤３次．ｄ．每孔加１００μｌＨＲＰ－ＩｇＧ（１∶１０００），盖子密封，室温孵育１ｈ，２００μｌ１×洗涤缓冲液洗涤４次．ｅ．每孔加１００μｌ显色液（预先复温至室温），室温避光孵育５ｍｉｎ．ｆ．每孔加１００μｌ终止液，４５０ｎｍ波长比色．以所测定的Ａ值作为细胞中ＮＦ－κＢ活化的指标．１．５ＮＦ－κＢ活化的免疫细胞化学检测细胞生长至８０％融合度时用于实验．细胞处理同１．４．每组６个标本．免疫细胞化学染色，检测转录因子ＮＦ－!Ｂ核转位．操作步骤见试剂说明书．１．６统计分析所有数据均采用ＳＰＳＳ１１．０统计软件进行方差分析和ｔ检验．全部结果用（±ｓ）表示．１．１主要试剂Ｌ－０２肝细胞株由成都军区总医院临床实验科提供；抗Ｐ－ＥＲＫ１／２、抗ＴｏｔａｌＥＲＫ１／２、抗ＮＦ－κＢｐ６５、抗ｃｙｃｌｉｎＥ兔多克隆抗体和抗ｃｙｃｌｉｎＤ１鼠单克隆抗体购于ＳＡＮＴＡＣＲＵＺ公司；羊抗兔ＩｇＧ和羊抗鼠ＩｇＧ购于深圳晶美生物技术有限公司；ＴＰＣＫ和ＰＤ９８０５９购于Ｓｉｇｍａ公司；ＲＰＭＩ－１６４０、胎牛血清（ＦＣＳ）购于Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；重组人ＴＮＦ－α购于Ｒ＆Ｄ公司；ＥＣＬ检测试剂盒购于Ｐｉｅｒｃｅ公司；ＢＣＡ蛋白检测试剂盒购于北京百泰克生物技术公司；Ｅｎｖｉｓｉｏｎ检测试剂盒和ＤＡＢ染液购于ＤＡＫＯ公司，ＴｒａｎｓＡＭＮＦκＢＦａｍｉｌｙＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＡｓｓａｙＫｉｔ和ＮｕｃｌｅａｒＥｘｔｒａｃｔＫｉｔ购于ＡｃｔｉｖｅＭｏｔｉｆ公司．１．２细胞周期测定细胞接种于六孔细胞培养板，细胞贴壁后，弃去培养基，Ｈａｎｋ!ｓ液洗涤２次，无血清培养基培养２４ｈ使细胞周期同步化，换为含１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基．并分成对照组（０ｈ和１２ｈ）、ＴＮＦ－α组（１０μｇ／ＬＴＮＦ－α培养１２ｈ）、ＰＤ９８０５９组（２０μｍｏｌ／Ｌ培养１２ｈ）、ＴＮＦ－α＋ＰＤ９８０５９组（２０μｍｏｌ／ＬＰＤ９８０５９预处理３０ｍｉｎ，加入１０μｇ／ＬＴＮＦ－α培养１２ｈ）、ＴＰＣＫ组（２０μｍｏｌ／ＬＴＰＣＫ培养１２ｈ）、ＴＮＦ－αｍｏｌ／ＬＴＰＣＫ预处理＋ＴＰＣＫ组（２０μ３０ｍｉｎ，加入１０μｇ／ＬＴＮＦ－α培养１２ｈ）．０．２５％胰酶消化，收集细胞，ＰＢＳ洗涤细胞２次，１％多聚甲醛固定．ＰＢＳ洗涤细胞２次，用ＰＢＳ配制１×１０６／ｍｌ的细胞悬液；将等体积的细胞悬液和ＰＩ染液混合，４℃避光放置３０ｍｉｎ；以４８８ｎｍ波长为激发光，流式细胞仪检测细胞周期分布．每组４个标本．１．３蛋白质印迹０．２５％胰酶消化，收集细胞，４℃预冷的ＰＢＳ（０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．２～７．３）洗涤３次，加２００μｌＲＩＰＡ裂解液（５０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ７．４，１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，０．５％脱氧胆酸钠，０．１％ＳＤＳ，ａｎｄ１％ＮＰ－４０，５ｍｇ／Ｌｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，１ｍｍｏｌ／ＬＰＭＳＦ，１ｍｍｏｌ／ＬＮａ３ＶＯ４，１ｍｍｏｌ／ＬＮａＦ），冰上充分裂解３０ｍｉｎ，４℃，１２０００ｇ离心５ｍｉｎ．ＢＣＡ试剂盒蛋白质定量，加入５×上样缓冲液，沸水中煮５ｍｉｎ．２０μｇ总蛋白上样，１２％聚丙烯酰胺凝胶电泳．电泳结束后，于４℃，９０Ｖ电压，２ｈ将蛋白转２结果２．１ＴＮＦ－α加快肝细胞从Ｇ０／Ｇ１期到Ｓ期的细胞周期进程经过２４ｈ无血清培养，Ｇ０／Ｇ１期细胞为８８．６５％，Ｓ期细胞为６．４５％，细胞周期同步化于?６０６?生物化学与生物物理进展Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２００７；３４（６）Ｇ０／Ｇ１期．加入含１０％胎牛血清，继续培养１２ｈ，Ｇ０／Ｇ１期细胞为７６．９１％，Ｓ期细胞为１７．８８％．１０μｇ／ＬＴＮＦ－α处理的细胞，Ｇ０／Ｇ１期细胞为６６．９５％，Ｓ期细胞为３０．７１％，与对照组有显著差异，表现为Ｇ０／Ｇ１期缩短，细胞周期进程加快（图１）．表明ＴＮＦ－α能促进肝细胞的周期转换．（ａ）８０Ｍ４Ｍ３Ｍ２Ｍ１００１０００ＣｏｕｎｔｓＨｉｓｔｏｇｒａｍｓｔａｔｉｓｔｉｃｓＭａｒｋｅｒＡｌｌＭ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４％Ｇａｔｅｄ１００．００２．０２８８．６５６．４５１．９２Ｍｅａｎ１３１．９４４５．８３１８９．２８１９９．９１２６５．２３（ｂ）８０ＣｏｕｎｔｓＭ１Ｍ３Ｍ４Ｍ２ＨｉｓｔｏｇｒａｍｓｔａｔｉｓｔｉｃｓＭａｒｋｅｒＡｌｌＭ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４％Ｇａｔｅｄ１００．００３．２９７６．９１１７．８８１．２３Ｍｅａｎ２０４．４３１０５．７６１８９．２１３０１．５１３７９．６３００Ｐ１Ｐ１１０００（ｃ）Ｃｏｕｎｔｓ８０Ｍ４Ｍ３Ｍ２Ｍ１ＨｉｓｔｏｇｒａｍｓｔａｔｉｓｔｉｃｓＭａｒｋｅｒＡｌｌＭ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４％Ｇａｔｅｄ１００．００１．２４６６．９５３０．７１０．６５Ｍｅａｎ２２４．４３１０７．６９１９７．９５３０９．６１２２７．９４００Ｐ１１０００Ｆｉｇ．１ＥｆｆｅｃｔｏｆＴＮＦ－αｏｎｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｈｅｐａｔｉｃｃｅｌｌｌｉｎｅＬ－０２（ａ）ＴｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬ－０２ｃｅｌｌｓｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚｅｄｂｙｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｗｉｔｈｆｒｅｅ－ｓｅｒｕｍｍｅｄｉｕｍｆｏｒ２４ｈ．（ｂ）ＴｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬ－０２ｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｗｉｔｈＲＰＭＩ１６４０ｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１０％ＦＣＳｆｏｒ１２ｈ．（ｃ）ＴｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬ－０２ｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｗｉｔｈＲＰＭＩ１６４０ｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１０!ｇ／ＬＴＮＦ－αａｎｄ１０％ＦＣＳｆｏｒ１２ｈ．Ｍ２，Ｍ３ａｎｄＭ４ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄｔｈｅＧ０／Ｇ１，ＳａｎｄＧ２／Ｍｐｅｒｉｏｄｏｆｃｅｌｌｃｙｃｌｅ．２．２ＴＮＦ－α诱导肝细胞ｃｙｃｌｉｎＤ１表达增加采用蛋白质印迹方法检测ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，发现１０!ｇ／Ｌ的ＴＮＦ－α能诱导细胞ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，随着剂量的增加，ｃｙｃｌｉｎＤ１表达量也随之增加．而另外一个调控细胞Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期转换的细胞周期素ｃｙｃｌｉｎＥ的表达则无明显变化（图２）．结果提示，ＴＮＦ－α主要通过诱导ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，促进Ｌ－０２细胞Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期转换．ＥＲＫ１／２对ＴＮＦ－α诱导的肝细胞周期的影响为了确定ＥＲＫ１／２对ＴＮＦ－α诱导的细胞周期转换的影响，检测了ＴＮＦ－α对ＥＲＫ１／２磷酸化水平的影响．结果发现，ＴＮＦ－α能诱导ＥＲＫ１／２活化，随剂量的增加，ＥＲＫ１／２磷酸化水平也明显增２．３高（图３ａ）．但是，使用ＥＲＫ１／２活化的特异性抑制剂ＰＤ９８０５９抑制ＥＲＫ１／２磷酸化，ＴＮＦ－α处理细胞１２ｈ后，Ｇ０／Ｇ１期细胞为６２．３８％，Ｓ期细胞为３０．９３％，与ＴＮＦ－α处理组无显著差异（图３ｃ）．同时，抑制ＥＲＫ１／２磷酸化对ＴＮＦ－α诱导的ｃｙｃｌｉｎＤ１表达并没有显著影响（图３ｂ）．结果表明，ＥＲＫ１／２在ＴＮＦ－α诱导肝细胞的细胞周期转换中没有显著的作用．２．４ＮＦ－κＢ对ＴＮＦ－α诱导的肝细胞周期的影响运用转录因子活性ＥＬＩＳＡ法检测ＮＦ－κＢ活化程度，１０!ｇ／ＬＴＮＦ－α能诱导肝细胞ＮＦ－κＢ活化，与对照组有显著差异（Ｐ＜０．０５）．ＮＦ－κＢ活化程度随ＴＮＦ－α剂量增加而随之增加（图４ａ）．ＮＦ－κＢ亚基ｐ６５免疫细胞化学结果显示，未受ＴＮＦ－α作用的肝细胞中的ＮＦ－κＢ处于非活化状态，ｐ６５主要定位于细胞浆中．ＴＮＦ－α刺激能诱导ＮＦ－κＢ活化，导致ＣｙｃｌｉｎＤ１ＣｙｃｌｉｎＥ!－ａｃｔｉｎＴＮＦ－&!ｇ／Ｌ０１０２０５０１００Ｆｉｇ．２ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｙｃｌｉｎＤ１ａｎｄｃｙｃｌｉｎＥｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＬ－０２ｃｅｌｌｓｗｉｔｈＴＮＦ－αｔｒｅａｔｍｅｎｔｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔＡｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ０，１０，２０，５０，１００!ｇ／ＬＴＮＦ－αｆｏｒ２４ｈ，ｗｈｏｌｅｃｅｌｌｐｒｏｔｅｉｎｅｘｔｒａｃｔｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄａｎｄｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇｆｏｒｃｙｃｌｉｎＤ１，ｃｙｃｌｉｎＥ．２００７；３４（６）（ａ）Ｐ－ＥＲＫ１／２ＴｏｔａｌＥＲＫ１／２１（ｃ）杨季云等：肿瘤坏死因子α通过激活ＮＦ－κＢ信号通路加快肝细胞周期进程（ｂ）ＣｙｃｌｉｎＤ１#－ａｃｔｉｎ２３４５６ＴＮＦ－!ＰＤ９８０５９Ｈｉｓｔｏｇｒａｍｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ８０ＣｏｕｎｔｓＭ１０?６０７?－－－＋＋－＋＋８０ＣｏｕｎｔｓＨｉｓｔｏｇｒａｍｓｔａｔｉｓｔｉｃｓＭ３Ｍ４Ｍ２ＭａｒｋｅｒＡｌｌＭ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４％Ｇａｔｅｄ１００．００５．５１６２．３８３０．９３０．５４Ｍｅａｎ２００．９１９５．７７１４３．０２１９７．４５３８８．６５Ｍ４Ｍ３Ｍ２Ｍ１ＭａｒｋｅｒＡｌｌＭ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４％Ｇａｔｅｄ１００．００１．９９８１．５９１５．３２０．６０Ｍｅａｎ２０４．５０１０８．０３１８７．１１２９９．１３３８４．８５００Ｐ１１００００Ｐ１１０００ＰＤ９８０５９（２０&ｍｏｌ／Ｌ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒ１２ｈＴＮＦ－!（１０&ｇ／Ｌ）＋ＰＤ９８０５９（２０&ｍｏｌ／Ｌ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒ１２ｈＦｉｇ．３ＲｏｌｅｏｆＥＲＫ１／２ｉｎｃｅｌｌｃｙｃｌｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｆｔｅｒＴＮＦ－αｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ａ）ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥＲＫ１／２ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎＬ－０２ｃｅｌｌｓｗｉｔｈＴＮＦ－αｔｒｅａｔｍｅｎｔｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０，１０，２０，５０，１００!ｇ／ＬＴＮＦ－α，ｉｎｄｉｃａｔｅｄａｓｌａｎｅ１￣５．Ａｎｄｌａｎｅ６ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈＴＮＦ－α（１０&ｇ／Ｌ）＋ＰＤ９８０５９（２０μｍｏｌ／Ｌ）．（ｂ）ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｙｃｌｉｎＤ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＬ－０２ｃｅｌｌｓｗｉｔｈＴＮＦ－αｔｒｅａｔｍｅｎｔａｆｔｅｒｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＥＲＫ１／２ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．（ｃ）ＴＮＦ－α－ｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬ－０２ｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＥＲＫ１／２ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．（ａ）（ｃ）＊＊１．５＊＊１．００．５０（ｂ）ＣｙｃｌｉｎＤ１Ｅ$－ａｃｔｉｎＴＮＦ－!ＴＰＣＫ（ｄ）ＣｏｕｎｔｓＦＡ＊＊＊＊△２．０ＡＢＣ１２３４５６Ｄ－－－＋＋－＋＋８０Ｍ４Ｍ３Ｍ２Ｍ１ＨｉｓｔｏｇｒａｍｓｔａｔｉｓｔｉｃｓＣｏｕｎｔｓＭａｒｋｅｒＡｌｌＭ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４％Ｇａｔｅｄ１００．００２．５２８０．８０１５．３９０．６９Ｍｅａｎ２０７．１８１０４．２０１８９．２８３００．９４３７４．０４８０Ｍ４Ｍ３Ｍ２Ｍ１ＨｉｓｔｏｇｒａｍｓｔａｔｉｓｔｉｃｓＭａｒｋｅｒＡｌｌＭ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４％Ｇａｔｅｄ１００．００５．５１８２．３８１０．９３０．５４Ｍｅａｎ２００．９１９５．７７１９３．０２２９７．４５３８８．６５００１００００Ｐ１ＴＰＣＫ（２０&ｍｏｌ／Ｌ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒ１２ｈ０１０００Ｐ１ＴＰＣＫ（２０&ｍｏｌ／Ｌ）＋ＴＮＦ（１０&ｇ／Ｌ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒ１２ｈＦｉｇ．４ＲｏｌｅｏｆＮＦ－κＢｉｎｃｅｌｌｃｙｃｌｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｆｔｅｒＴＮＦ－αｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ａ）ＮＦ－κＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＬ－０２ｃｅｌｌｗｉｔｈＴＮＦ－αｔｒｅａｔｍｅｎｔｂｙＥＬＩＳＡ．Ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０，１０，２０，５０，１００&ｇ／ＬＴＮＦ－α，ｉｎｄｉｃａｔｅｄａｓｃｏｌｕｍｎ１￣５．Ａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎ６ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈＴＮＦ－α（１０&ｇ／Ｌ）＋ＴＰＣＫ（２０μｍｏｌ／Ｌ）．＊＊Ｐ＜０．０１ｖｅｒｓｕｓｔｈｅｃｏｌｕｍｎ１．△Ｐ＜０．０１ｖｅｒｓｕｓｔｈｅｃｏｌｕｍｎ２．（ｂ）ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｙｃｌｉｎＤ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＬ－０２ｃｅｌｌｓｗｉｔｈＴＮＦ－αｔｒｅａｔｍｅｎｔａｆｔｅｒｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＮＦ－κＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．（ｃ）ＮＦ－κＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＬ－０２ｃｅｌｌｗｉｔｈＴＮＦ－αｔｒｅａｔｍｅｎｔｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＤＡＢｓｔａｉｎｉｎｇ，×４００）．Ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０，１０，２０，５０，１００&ｇ／ＬＴＮＦ－α，ｉｎｄｉｃａｔｅｄａｓＦｉｇｕｒｅＡ￣Ｅ．ＡｎｄＦｉｇｕｒｅＦｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈＴＮＦ－α（１０&ｇ／Ｌ）＋ＴＰＣＫ（２０μｍｏｌ／Ｌ）．（ｄ）ＴＮＦ－αｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬ－０２ｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦ－κＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．?６０８?生物化学与生物物理进展Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２００７；３４（６）ｐ６５亚基转位到细胞核内．ｐ６５亚基的核转位也呈ＴＮＦ－α剂量依赖性，直观地验证了转录因子活性ＥＬＩＳＡ实验的结果（图４ｃ）．ＴＰＣＫ（２０μｍｏｌ／Ｌ）可特异地抑制ＴＮＦ－α诱导的抑制ＮＦ－κＢ活化．抑制ＮＦ－κＢ活化后，再经过ＴＮＦ－α处理，Ｇ０／Ｇ１期细胞为８２．３８％，Ｓ期的细胞为１０．９３％，与ＴＮＦ－α处理组比较，细胞周期阻滞在Ｇ０／Ｇ１期（图４ｄ）．同时，抑制ＮＦ－κＢ活化后，ｃｙｃｌｉｎＤ１表达明显降低（图４ｂ）．结果表明，ＴＮＦ－αＢ，促进ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，从而加快通过激活ＮＦ－κ细胞从Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期转换．提示ｃｙｃｌｉｎＤ１表达增加是ＴＮＦ－α加快细胞周期进程的主要因素．ＣｙｃｌｉｎＤ１启动子区包含多个调节元件的结合靶点，如Ｒａｓ、ＴＲＥ、Ｅ２Ｆ、Ｏｃｔ、ＳＰ１、ＣＲＥ和ＮＦ－κＢ结合的靶点．因此，多种转录因子可能参与调节ｃｙｃｌｉｎＤ１表达［１５］．在肿瘤细胞中，抑癌基因ＰＴＥＮ通过下调ＥＲＫ１／２活性，降低ｃｙｃｌｉｎＤ１的转录，导致细胞周期阻滞在Ｇ１期［１６］．低剂量电离辐射作用于肿瘤细胞时，激活ＥＲＫ１／２，导致ｃｙｃｌｉｎＤ１表达增加，促进细胞从Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期［１７］．本实验中，ＴＮＦ－α能以剂量依赖的方式激活ＥＲＫ１／２．然而，抑制ＥＲＫ１／２磷酸化对ＴＮＦ－α诱导的ｃｙｃｌｉｎＤ１表达没有影响．同时，抑制ＥＲＫ１／２磷酸化对ＴＮＦ－α诱导的细胞周期进程也没有影响．表明在肝细胞株Ｌ－０２细胞中，ＥＲＫ１／２信号通路没有参与ＴＮＦ－α诱导的细胞周期转换．非活化状态的ＮＦ－κＢ通常与其抑制物ＩκＢ聚合形成三聚体，存在于细胞浆中．在多种因素如ＬＰＳ、细胞因子、病毒、氧化剂、异种抗原及紫外线照射等ＮＦ－κＢ活化信号的刺激下，通过不同的信号转导途径，激活ＮＦ－κＢ诱导激酶（ＮＦ－κＢ－ｉｎｄｕｃｉｎｇｋｉｎａｓｅ，ＮＩＫ）或活化途径中的其他激酶，使ＩκＢ磷酸化、泛素化并降解，从而暴露ＮＦ－κＢ的核定位信号，转移至细胞核内与特定基因启动子结合，介导相关基因表达．在乳腺癌细胞中，ＮＦ－κＢ活化加快了细胞周期进程，导致细胞增生．抑制ＮＦ－κＢ活化，降低了ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，导致细胞周期阻滞于Ｇ０／Ｇ１期［１８］．在Ｇ１期，ＮＦ－κＢ可以调节ｃｙｃｌｉｎＤ１表达水平和活性．抑制ＮＦ－κＢ活性可导致ｃｙｃｌｉｎＤ１相关激酶活性下降，延迟Ｒｂ蛋白（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａｐｒｏｔｅｉｎ）磷酸化，导致细胞发生细胞周期阻滞［１９］．因此，ＮＦ－κＢ信号传导通路是细胞周期调控的途径之一．本研究结果表明：ＴＮＦ－α能以剂量依赖方式诱导肝细胞株Ｌ－０２细胞ＮＦ－κＢ活化．免疫细胞化学方法检测ＮＦ－κＢｐ６５亚基也证实了这结果．抑制ＮＦ－κＢ活化，可降低ＴＮＦ－α诱导的ｃｙｃｌｉｎＤ１表达水平，导致细胞周期阻滞于Ｇ０／Ｇ１期．表明ＴＮＦ－α通过激活ＮＦ－κＢ，转录调节ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，促进细胞周期从Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期转换．实验结果提示，在慢性炎症中，炎症细胞分泌的ＴＮＦ－α通过激活ＮＦ－κＢ，转录调节ｃｙｃｌｉｎＤ１表达，加快细胞周期从Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期转换，导致细胞周期调节紊乱．这可能是慢性炎症中ＴＮＦ－α促Ｂ进肿瘤发生发展的机制之一．针对ＴＮＦ－α和ＮＦ－κ的治疗可能延长慢性炎症相关性肿瘤的潜伏期和抑３讨论ＴＮＦ－α主要由活化的巨噬细胞分泌产生，也可由肿瘤细胞产生．ＴＮＦ－α的生物学作用是通过结合细胞表面的可溶性三聚体受体而启动，它有２个不同的ＴＮＦ受体，ＴＮＦＲ１（５５ｋｕ）和ＴＮＦＲ２（７５ｋｕ），２种受体在大多数细胞表面都有表达．在炎症过程中，ＴＮＦ－α对组织损伤和修复都发挥了重要作用，可诱导病变细胞凋亡，同时也诱导成纤维母细胞增生，在损伤血管同时，也诱导多种血管生成因子表达［９］．高剂量ＴＮＦ－α局部治疗肿瘤可选择性地破坏肿瘤组织血管，从而发挥抗肿瘤作用［１０］．然而，ＴＮＦ－α也可使培养的上皮细胞发生转化［１１］．ＴＮＦ－α在肿瘤发生发展中表现出矛盾的生物学功能．在本实验中，发现ＴＮＦ－α能缩短Ｇ０／Ｇ１期时相，加快细胞周期进程．真核细胞周期分为Ｇ０／Ｇ１，Ｓ，Ｇ２和Ｍ４期．各期存在一系列关键的检测点，如Ｇ１／Ｓ、Ｇ２／Ｍ检测点．各检测点功能正常保证细胞周期顺利进行．其中，主要调控点在Ｇ１期，Ｇ１／Ｓ检测点在细胞周期进程中起关键作用，决定细胞周期能否启动进行细胞增殖细胞．细胞周期调控的核心蛋白分子是细胞周期素ｃｙｃｌｉｎ，不同分子的ｃｙｃｌｉｎ、ＣＤＫ、ＣＤＫＩ及其他相关调控蛋白精确地调控细胞周期的每一个时相．ｃｙｃｌｉｎＤ和ｃｙｃｌｉｎＥ分别与ＣＤＫ４／６和ＣＤＫ２形成复合物，促使细胞从Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期．一旦细胞通过Ｇ１／Ｓ检测点，细胞就能完成整个细胞周期．因此，ｃｙｃｌｉｎＤ和ｃｙｃｌｉｎＥ是引起细胞增殖的关键性因素［１２，１３］．研究表明，ｃｙｃｌｉｎＤ１和ｃｙｃｌｉｎＥ过表达能缩短Ｇ１期时相，加快细胞周期进程和细胞增殖，导致肿瘤发生发展［１４］．本实验结果表明，ＴＮＦ－α能以剂量依赖方式诱导Ｌ－０２细胞表达ｃｙｃｌｉｎＤ１，而对ｃｙｃｌｉｎＥ的表达则没有影响，结果包含各类专业文献、文学作品欣赏、行业资料、高等教育、幼儿教育、小学教育、各类资格考试、肿瘤坏死因子_通过激活NF_B信号通路加快肝细胞周期进程04等内容。　
您可在本站搜索以下内容：
　生长因子、细胞因子或激素激活此通路,介导细胞增殖、...肿瘤坏死因 子受体相关因子 6(TNFR-associated ...(nuclear factor 资 B,NF-资 B),诱导炎症因 子...
　信号转 导过程, 一种细胞因子的信号通路也可以激活...3 NF-κ B 信号 1975 年,E. A. Carswell 和 ... 于是他们将这种物质命名为肿瘤 坏死因子(tumour ...
　 NF-κB通路激活在肿瘤发生发展中的作用_医药卫生_...癌变,调控细胞周期及凋亡,影 响细胞分化,促进肿瘤... 肿瘤坏死因子_通过激活N... 7页 免费 HIF_1_...
　在信号通路子-KB(nuclear factor-kappa B,NF-KB)...蛋白家族是一种多效性的转录因子,可以与多种基启动... 细胞周期循环所需蛋白的表达,在破肌细胞和纤维细胞...
　 核因子NF-κB信号通路模型的建立及其小分子抑制剂...当激活因子从细胞表面进入细胞内后,首 先激活上游...我们发现:山楂酸和肿瘤坏死因子 α 联合使用具有良好...
　某些肿瘤细胞或使某些肿 瘤组织发生出血坏死的因子,...TNF- α与 TNFRⅠ相互作用,可激活多种信号转导通路...有研究证实 TNF- α 通过激活 NF- κ B、AP- ...
　细胞周期进程的一些特定信号通路, 可以检查细胞周期... 在脊椎动物中为 A1-2、B1-3 、C、 D1-3、...(NGF) ; 2)少数具有抑制作用,如肿瘤坏死因子(TNF...
　 肿瘤坏死因子简介_基础医学_医药卫生_专业资料。...然而,TNF-R2 可以通过活化 NF-κB 和 JNK 通路...等与细胞增殖密切相关原癌基因的表达,引起细胞周期有...
　 异丙酚通过激活ERK信号通路减少H2O2引起的L02肝细胞...这会引起细胞的凋亡和坏死。凋 亡是一种主动的细胞...ERK 磷酸化激活后与下游的转录因子及其他激酶相互...
别人正在看什么？