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143的图给我跑成146_天天酷跑吧_百度贴吧
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143的图给我跑成146
还是不够稳啊全程高能量
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我跟你们说我就这表情
为了赶上这夕阳的光。。...
听说这相当于开到冰武的...
本期看似好解,其实有点...
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马云给你分的钱收到了吗?
该继续散财了
其实我不是马云
真后悔 黑猴子那一期 没拿下
刚刚我在网吧上网,剩最后的5毛钱算了看点苍井空的片子吧,结果一看就看了一个小时都没下机,我顿时就疑问了,我就喊网管12号机啥情况?网管说你后面那3个小学生一人给你加了一块钱!
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实在是屌呀呀呀呀,我滴腹肌哥啊啊啊啊。
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【求助】SDS-PAGE跑成这样是什么原因
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这个帖子发布于4年零105天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:2
SDS-PAGE 跑过N多次了,从没出现过这种情况第一道是MARKER,1、3、5、7是样品,2、4、6、8是loadingbuffer,怎么感觉样品都呈现弥散状啊,样品两月前提的组织总蛋白,提完是用纯SDS溶液溶解的,就冻-80℃了,不过中间-80坏了,-20℃冻了一个月,今天说拿出来跑一跑,取10ul,加2ul
5*loading buffer 煮了5min,上的样,怎么成这样了,就算降解了,最前面的溴酚蓝也不应该是这样吧~电极缓冲液 PH 好像在7.8~8.0之间~~~~~~~~~~~·是什么问题,求大神解疑。。。。还有一个问题,如果提出来的蛋白直接煮沸5min,没有加LB,在上样之前,是不是应该再加LB煮沸啊,多煮几次,不会对样品造成什么影响吗?
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应该是你样品处理问题
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果然是样品问题。。。。
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样品应该用1x loading buffer来保存
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蛋白变性一定是要加入loading buffer后才能加热变性,这样的变性是跑SDS-PAGE需要的带负电荷没有二级结构的样品。样品保存的话,可以直接冻-80,需要用的时候再定量也行,只要不反复冻融就可以。还有就是可能你的浓缩胶是否能提高浓度,感觉浓缩不完全。
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会不会是加样品的时候侧漏了?
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我的实验也出过这个问题,原因在于电泳缓冲液配错了
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【求助】SDS-PAGE跑成这样怎么办(有图)
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这个帖子发布于6年零289天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教各位电泳达人,跑蛋白电泳,每次跑出来都是类似图中的样子,各种缓冲液、试剂都是新的,可是依然解决不了问题。请问谁知道是为什么呢?万分感谢!
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1、胶有问题,重新配2、提取的蛋白降解了,重新提一下。
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wendypineapple 请教各位电泳达人,跑蛋白电泳,每次跑出来都是类似图中的样子,各种缓冲液、试剂都是新的,可是依然解决不了问题。请问谁知道是为什么呢?万分感谢!感觉像是电泳缓冲液的问题,下次跑的时候,加个Marker,如果Marker跑的好,那就是你蛋白的问题;跑的不好,说明缓冲液和胶的问题。
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lhs521521 感觉像是电泳缓冲液的问题,下次跑的时候,加个Marker,如果Marker跑的好,那就是你蛋白的问题;跑的不好,说明缓冲液和胶的问题。谢谢啊 其实最左边的是MARKER呢。。结果跑成那副样子。。电泳缓冲液会从哪方面影响呢?
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wendypineapple 谢谢啊 其实最左边的是MARKER呢。。结果跑成那副样子。。电泳缓冲液会从哪方面影响呢?比例不合适,或者是少加了东西,比如SDS
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是不是电泳缓冲液的pH值不对啊
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贴一下胶的配方?确定加了SDS?缓冲液的配方也贴一下?
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就是胶和缓冲液的问题~~
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【求助】请问sds-page跑成这样是怎么回事?
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这个帖子发布于7年零122天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
RT不知道是什么原因,跑胶的时候总是会出现类似胶碎了发生渗漏的情况!用加样针加样,30微升,没加到外面,12%胶新配的。但是跑出来的结果似乎不是很受影响
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刚开始跑没多久就会出现这样的情况,100V的电压
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胶与玻板贴合不紧密就会发生这种问题,有可能是你拔梳子时候用力偏了,导致玻板松动。另外胶配置不均匀,凝固较差或者放置过久失水体积缩小也有可能出现这个问题。
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梳子是在加了电泳液后拔掉的半小时后才拔应该凝固完全了
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凝固完全与否不能光看时间,主要看形态。你可以观察胶完全凝固之后才装电泳槽,这样就可以排除这个问题。拔梳子时候最好垂直向上,否则很容易把两块玻板之间撬开缝隙。
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进入分离胶之前能压平也行,你的缓冲液正常吧
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我前天也出现了这种情况,我的出现这种状况的原因是,配好分离胶用无水乙醇封胶,之后加浓缩胶的时候乙醇倒掉晾干时间太短,没有挥发完导致,之后多放了一会儿就好了。园里早先有个帖子也是这个问题,也贴出来给你看看,希望对你有帮助!
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还有这个帖子:
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1.75亿学生的选择
我是初学者,跑出来的蛋白电泳图,那些一排一排的条带是什么意思,还有一列一列的怎么看那个图,那么多条带,都是啥意思了,
你的胶是考染的吗?首先你得先知道一点蛋白质的基本理论知识(不会不知道吧?难道你是学医的?),或者说蛋白质(包括其他分子,如DNA、RNA等)电泳的原理(或者说是分离原理).只说蛋白质:蛋白质在正常情况下,一般带有负电荷,因由不同的蛋白分子因为性质(空间结构以及基团性质)不同而带电量不同,这样结合蛋白质分子本身的不同质量,会在电场下(即电泳中)产生不同的移动速度,进而将不同的蛋白分离开.又为了消除蛋白质分子间性质的差别,创造一个单一因素的电泳分离条件,所以在进行蛋白质电泳之前,都会对蛋白质进行变性处理(非变性胶等不在此列),使蛋白质肽链打开:SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构.而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂.在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异.如此,蛋白质(准确的说应该是变形后的蛋白质或者是蛋白- SDS胶束)便会在电场中根据不同的带电量- 亦即分子量而分成不同的条带.每一条带代表着不同分子量大小的蛋白质组合(一组蛋白质).上面只说的是SDS-PAGE胶蛋白质电泳.当然,在电泳后,需要进行染色,你才能看到蛋白条带(Marker除外,因为它是带有耦合染料的蛋白质分子或片段).
嗯,谢谢,我知道代表的是一组蛋白,但那么多带,都说明什么,一般来说,拿一张蛋白电泳图,应该怎么看?看些什么?
首先,你得知道你实验的目的是什么?你的目的蛋白是什么?目的蛋白的分子量是多大?这样,你才能找到你想要的条带。如果你仅仅是为了看蛋白条带,那么我无语。但还是向你解释一下:上面说了,每个条带代表了一组蛋白,但是你做实验的-具体而言是跑胶,做蛋白质电泳的话,一般都是有有对照的,而且一般情况下,都是做差异性的比较(定性或者定量),即不同泳道之间蛋白质(条带)的表达差异(WB的结果更直接能说明问题,双向电泳同)。举个例子:不同刺激条件下(如温度、时间、药物等),某一或某些蛋白(或者是诱导蛋白)的表达差异或变化情况,即可通过蛋白质电泳及其后续实验,得到结果(或证实)。
所有,不是说应该怎么看,看什么,而是你想看什么。
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给个图才能解释。不给图怎么解释啊
大致解释一下嘛
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