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HBsAg和抗-HBs双阳性患者乙肝病毒S区及RT区变异研究
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乙肝母婴阻断现状及存在的问题
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目的 获得具有较好致瘤性、在动物体内保留表达外源基因MUC1VNTR（mucin1，variable number tandem repeats）能力的稳定转染细胞株B16-GFP-MUC1，供MUCl靶向药物研究中体内抑瘤实验所用到的肿瘤模型。方法用脂质体转染的方法和有限稀释法获得单克隆细胞株；将该细胞株进行体内传代后，流式分选GFP阳性细胞群，并对分选后细胞用有限稀释法进行单克隆化。用流式细胞仪和共聚焦荧光显微镜观察各时期细胞克隆的GFP表达情况。结果脂质体转染方法得到的在G418压力选择下存在的细胞B16-1，其GFP阳性细胞比率最高为80％左右；致瘤性较差，75d内仅87．5％小鼠出瘤；体外的稳定性观察中，在无抗生素的培养液中观察5周，其阳性率降至20％左右；经过体内接种后仅有10％左右的肿瘤细胞保留了外源基因的表达。而经过体内传代和流式分选后得到的单克隆细胞群B16-39，其GFP阳性细胞比率〉90％；致瘤性为20d内100％小鼠出瘤；体外培养8周，GFP阳性的细胞比率〉90％；体内剥离后的肿瘤细胞的GFP阳性细胞比率均〉90％。结论对于用于体内动物模型的稳定转染细胞，通过体内传代，流式分选并单克隆化，是获得致瘤性好，体内体外较为稳定的稳定转染细胞株的一个可行方案。
目的 构建大鼠γ干扰素诱导蛋白10（IP-10）基因和绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL基因的原核融合表达载体，并对其表达进行鉴定。方法通过PCR获得本实验所需要的IP-10基因片段，通过酶切含有PE38KDEL的质粒PRKL459K获得绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL基因，再通过适当的酶切及连接反应，构建IP-10与PE38KDEL融合基因的原核表达载体pET-32a（＋）-IP-10-PE38KDEL，重组质粒经限制性内切酶、PCR及DNA序列测定证实构建成功后，转化感受态大肠杆菌B121，经WIG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE及Western-blotting分析证实其相对分子质量和特异性。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实，IP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆入原核表达载体pET-32a（＋），并在大肠杆菌中稳定表达，表达产物的相对分子质量与预期值相符，且所表达蛋白可被抗PE的特异性抗体识别。结论成功构建了原核表达载体pET-32a（＋）-IP-10-PE38KDEL，其融合基因在大肠杆菌中高效表达，为进一步研究其功能奠定了基础。
目的 纯化FSH-occludin融合蛋白，并检测其免疫原性。方法将表达FSH-occludin蛋白的酵母工程菌GS115／pPIC9K接种到YPD培养基中多次传代后，用PCR检测其目的基因。该酵母工程菌在BMMY培养基中经甲醇诱导表达，上清液初步浓缩后上柱进行凝胶过滤层析，并将纯化蛋白免疫Balb／c小鼠，检测其血清抗体水平，以免疫组化的方法分析各组织occludin的表达与定位。结果该酵母工程菌经多次传代后外源基因不丢失，Westernblot检测结果表明纯化蛋白具有很好的反应原性，免疫组化证实occludin在实验组高表达。结论表达FSH-occludin蛋白的酵母工程菌具有很好的遗传稳定性，其表达产物可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。
目的 观察合成多肽P72对葡萄球菌肠毒素超抗原（SES）促人外周血单个核细胞（PBMc）增殖活性的抑制作用。方法 ^3H-TdR掺入法检测人PBMC的增殖；ELISA检测IL-2、IFN-γ、TNV-β分泌情况。结果P72对SEA、SEB、SEC的促PB-MC增殖及分泌IL-2、IFN-γ、TNV-β具有抑制作用。结论细胞试验显示合成多肽P72对超抗原SEA、SEB、SEC的活性具有抑制作用。
目的观察小鼠TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗在小鼠体内的成瘤作用，初步研究其免疫原性。方法构建TIM2基因真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2，脂质体法转染H22细胞，制备得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗，建立小鼠肝癌移植瘤模型，观察其在小鼠体内的成瘤作用。结果成功得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗，免疫接种小鼠后，可明显抑制小鼠体内肿瘤的发生和发展；给予H22-TIM2接种的小鼠CD4亚群、CD4／CD8比值显著高于H22-EGFP细胞接种组、荷瘤对照组和正常对照组。结论TIM2基因修饰H22细胞后，可显著降低H22细胞的体内成瘤性，抑制小鼠肿瘤生长，同时。在体内具有一定的免疫原性，为进一步探讨TIM2在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据。
目的研究负载滋养层细胞抗原对小鼠髓源性树突状细胞（DC）分化成熟过程的影响，获得致耐受性DC。方法体外使用粒细胞巨细胞集落刺激因子（GM-CSV）诱导小鼠骨髓细胞定向分化、经LPS刺激获得成熟DC；通过外胎盘锥组织块培养法获得滋养层细胞，制备可溶性抗原，加入DC培养体系。流式细胞术检测DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ的表达，ELISA法检测DC分泌IL-10和IL-12的浓度，混合淋巴细胞培养评估DC刺激同种T细胞增殖、活化的功能。结果成熟DC表型为CD4d域CD80恸CD86^high油MHC-Ⅱ“曲，分泌大量的IL-12和极少量的IL-10，体外能有效刺激T细胞的增殖；负载滋养层细胞抗原的Dc表型为CD40^mid。CDS0hCD86^low MHC-Ⅱ^low，在分泌大量IL-12的同时IL-10也明显升高，不能有效刺激T细胞增殖，并使T细胞分泌细胞因子呈现明显Th2偏倚。结论负载滋养层细胞抗原后的DC表面共刺激分子及MHC一Ⅱ表达降低，刺激T细胞增殖能力下降；其自分泌和促使T细胞旁分泌的细胞因子呈现Th2偏倚，是一种耐受性DC。
目的研究诱骗受体DcR3对佐剂型关节炎（AA）大鼠模型的作用及其机理。方法注射弗式完全佐剂建立大鼠佐剂型关节炎（AA）模型，尾静脉注射DcR3蛋白，观察大鼠关节肿胀度、间接ELISA检测血清和滑膜液中细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ的变化。RT-PCR检测滑膜和淋巴细胞中DcRβ、Fas、FasL mRNA的表达以及脾脏中TGF-β、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 mRNA的表达。Westernblot分析滑膜细胞中Caspase-8、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2蛋白的表达。结果DcR3治疗从大鼠后，足肿胀度降低；血液和滑膜液的IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平下降；脾脏中TGF-β、IFN-γ、TNF-α mRNA表达下调，IL-4、IL-10mRNA表达上调；滑膜细胞中Caspase-8、Caspase-3蛋白表达上调，Bcl-2蛋白表达下调。结论DcR3可以用于实验性大鼠从的治疗，其治疗机制与调节滑膜细胞FasL、FasmRNA的表达和血液淋巴细胞中FasmRNA的表达，促进滑膜细胞和自身反应性淋巴细胞的凋亡；调节脾脏细胞Th1／Th2细胞因子平衡相关。本研究为进一步阐明RA的发病机理奠定了重要基础，为有效治疗RA提供了新思路。
目的探讨MSCs对GVHD的作用及其机制。方法建立大鼠同种异体骨髓移植模型，同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应，联合或不联合移植供体来源的MSCs，观察受鼠的生存时间，同时利用RT-PCR法研究Th1／Ih2淋巴细胞亚群的比例，用ELISA法检测移植后体内IL-4细胞因子的浓度。结果GVHD组的平均生存时间为（17．30±2．33）天，实验组的平均生存时间为（24．10±2．36）天，与单独移植HSCs相比，MSCs与HSCs共移植明显延长的受鼠的生存时间。同时，GVHD组Th1／Th2细胞比值为1．29±0．06，IL-04因子的浓度平均为（14．84±2．59）pg/mL，实验组Th1／Th2细胞比值为（0．77±0．14），IL-4因子的浓度平均为（40．09±13．99）pg/mL。MSCs与HSCs共移植降低了体内Th1／Th2淋巴细胞亚群的比例，提高了体内IL广4细胞因子的浓度。结论MSCs与HSCs共移植能有效抑制HSCs移植后致死性GVHD的发生，延长生存时间，同时MSCs可能通过作用于体内Th1／Th2淋巴细胞亚群的比例，促进体内IL-4细胞因子的分泌从而间接发挥了抑制GVHD的作用。
目的 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）多肽免疫C57BL／6小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型并初步探讨EAE发病的免疫学机制。方法用MOG35-55抗原免疫C57BL／6小鼠，观察实验动物的症状及中枢神经系统的病理改变；应用MTT法测定EAE小鼠脾脏T淋巴细胞活化增殖程度；应用ELISA技术测定EAE小鼠血清IFN-γ浓度和抗MOG35-55抗体水平。结果EAE组发病率为100％，HE染色观察到脑脊髓炎性细胞浸润，白质脱髓鞘等病理改变；EAE小鼠脾脏MOG35-55反应性T淋巴细胞增殖活化，血清IFN-γ浓度和抗MOG35-55抗体随病情的加重而升高。结论用MOG35-55多肽成功诱导了C57BL／6小鼠EAE模型；并推断EAE的发生可能与MOG35-55，反应性T淋巴细胞的活化、抗MOG35-55，抗体和IFN-γ升高有关。
目的茴香霉素对小鼠T细胞活化、反应性、杀伤作用及其同种异基因皮肤移植的影响。方法利用荧光标记的单克隆抗体双染技术结合流式细胞仪检测茴香霉素对小鼠CD3^＋T细胞早期及中期活化标志分子CD69和CD25表达的影响；用MTT法检测茴香霉素刺激下T细胞在单向或双向混合淋巴细胞反应中T细胞的反应性及其对大鼠肝癌（7919）细胞的杀伤效应；建立小鼠同种异基因皮肤移植动物模型，观察茴香霉素对移植皮肤存活时间的影响。结果在最佳剂量10．0ng/mL时，茴香霉素能够明显抑制T细胞表面分子CD69和CD25的表达，且能抑制单向或双向混合淋巴细胞反应中T细胞的反应性（P〈0．01）；10．0ng／mL茴香霉素亦能明显抑制T细胞对大鼠肝癌细胞的杀伤效应（P〈0．01）；5．0和15．0mg／kg茴香霉素能够明显延长小鼠移植皮肤的存活时间（P〈0．01）。结论茴香霉素对T细胞的活化、反应性、杀伤效应及同种异基因皮肤移植排斥反应均有明显抑制作用，可能为治疗免疫反应性疾病提供新的策略。
目的研究酮色林（Ketanserin，KT）对活化的淋巴细胞细胞因子分泌的调节。方法用双抗体夹心ELASA法检测KT对脂多糖（LPS）激活的体外培养的人外周血淋巴细胞细胞因子IL-2、TNF-α、IL-10和TCF-β1分泌的影响。结果KT浓度依赖性抑制LPS激活的人淋巴细胞致炎因子ID2的分泌，100μmol／L的KT也可抑制致炎因子TNF-α分泌，而10和100μmol/L KT可分别浓度依赖性的提高LPS激活的淋巴细胞分泌抗炎因子IL-10的产量，只有100μmol／LKT可显著提高LPS激活的淋巴细胞分泌抗炎因子TCF-β1。结论 KT可对体外活化的淋巴细胞细胞因子分泌进行受体非依赖性的直接调节。
目的探讨TLR4-NF-κB是否介导防御素Gal-13的获得性免疫调节作用。方法体外培养小鼠外周血单核细胞，加入Gal-13（1p-g／mL）后，分别于不同时间中止刺激，免疫细胞化学检测单核细胞NF-κB、CD80、CD86的变化，ELINA法检测IFN-α，IL-12的浓度，流式细胞术检测TLR4受体数目，并观察Gal-13对外周血单核细胞增殖功能的影响。另外加入TLR4阻断剂，观察上述因子的变化。结果Gal-13刺激单核细胞NF-κB、CD80和CD86的活化，促进IL-12和IFN-α的分泌，增加ConA刺激的细胞增殖，TLR4阻断剂可阻断Gal-13的这些作用。Gal-13的作用可下调TLR4受体数目。结论防御素Gal-13是TLR4的内源性配体之一，可通过TLR4-NF-κB途径调节获得性免疫反应。
目的探讨决定Lactobacillus plantarum Lp6在小鼠小肠派伊尔结（PP）内化的细菌源因素，并分析该菌株的免疫调节作用。方法FITC标记不同处理的细菌，分析在含PPs的回肠结扎段内化的情况。给小鼠灌胃活或灭活细菌，研究其对小鼠脾、PP细胞增殖和腹腔巨噬细胞吞噬活性的影响。结果甘露糖可以强烈的抑制细菌内化，灭活和四甲基脲处理可以较明显的减低细菌内化。活菌和灭活菌可以特异性的调节腹腔巨噬细胞、PP细胞和脾淋巴细胞的活性。结论细菌表面甘露糖糖凝集素是影响细菌PP内化的最主要因素。细菌活力、表面疏水性也有一定的作用。活菌和灭活可以不同程度的增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性并抑制脾和PP淋巴细胞增殖。
目的探讨Balb／c小鼠系统感染白色念珠菌后免疫功能的动态变化。方法MTF法检测conA诱导的T淋巴细胞增殖功能；ELISA法测定血清IL-18、IFN-γ和n4水平；RBC-C3bRR法观察红细胞的黏附功能；真菌培养计算左肾白色念珠菌数。结果高低剂量组感染组T淋巴细胞增殖功能呈上升趋势，至感染后第7天达正常水平；IL-18水平均从感染第1天骤降后，至感染后第7天达正常水平；而IFN-γ始终高于正常对照组及免疫功能低下组；IL广4于感染1d后降低，至第7天后高于正常对照组。低剂量组感染白色念珠菌后对RBC—C3bRR有刺激增强作用。高低剂量组的白色念珠菌的廓清能力随时间延长均增强。结论Balb／c小鼠高低剂量感染白色念珠菌时，对conA诱导的T淋巴细胞增殖功能有一定的刺激增强作用；感染早期多以Th1型细胞应答为主，后期Th1／Th2型细胞因子均升高，示体液免疫也参与了机体抗白色念珠菌感染。Blab／c小鼠低剂量感染白色念珠菌对RBC—C3bRR有刺激增强作用。Blab／c小鼠高低剂量感染白色念珠菌后，其廓清能力随时间延长而不断增强。
目的制备筛选可识别变异表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）的单克隆抗体（monoclon alantibody，mAb）。用筛选出的单克隆抗体建立检测变异HBsAg的ELISA实验方法。方法用血源HBsAg免疫Balb／c小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备抗-HBs单克隆抗体。不同单克隆抗体包被酶标反应孔，检测真核细胞表达的野生及变异HBsAg，了解各种单克隆抗体的反应模式。筛选出可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体Hb1，优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法，与8种HB-sAg检测试剂比较检测变异HBsAg的能力。结果经过筛选，得到一种可以较好识别包括G145R在内大多数变异HBsA异的单克隆抗体。检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg诊断试剂。结论用本实验制备的单克隆抗体可以用于ELISA检测变异HBsAg，减少HBsAg变异株的漏检率。
目的 构建人源Fab抗体文库，筛选抗HBsAg抗体片段并进行初步鉴定。方法收集20份临床检验废弃的成人乙肝感染者淋巴细胞，抽提总RNA，逆转录成cDNA，构建抗乙肝病毒人源免疫型Fab抗体文库。以HBsAg包板进行4轮循环的吸附．洗脱．扩增，挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆，对阳性克隆进行可溶性表达，并用ELISA对其特异性进行鉴定。结果构建的人源Fab型抗体文库的库容为2．0×10^8，并具有良好的多样性。经过4轮筛选，成功获得4株能与HBsAg结合的人源抗体克隆，分别命名为hFabHB1、hFabHB2、hFabHB3和hFabHB4。对其中的hFabHB1进行可溶性表达，ELISA鉴定阳性。结论 成功构建了抗乙肝病毒人源免疫型Fab抗体文库，从中筛选获得的4株人源Fab抗体片段有望在乙型肝炎的预防和治疗上发挥作用。
目的构建含小鼠卵泡刺激素（亚单位（FSH-β）与闭锁因子（Ocln）特定基因片段的重组质粒，以期获得靶向干扰睾丸支持细胞功能的重组避孕疫苗。方法运用PCR技术，分别扩增小鼠FSH-β亚单位特定基因序列和闭锁因子第二个胞外环序列片段；定向克隆到pET28b表达载体中；并运用免疫印迹法对重组蛋白的表达做初步鉴定。结果通过双酶切分析、测序鉴定证实特定的FSH-β亚单位和Ocln基因片断被成功克隆到pET28b中，且诱导表达的重组蛋白能够被抗小鼠FSH-β及抗Oeln抗体所识别。结论重组分子具有两种靶分子的抗原性，为进一步研究其生物学活性及免疫避孕效应奠定基础。
目的研究重组白细胞介素18（rIL-18）对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1／Th2免疫应答的影响。方法鼻腔接种肺炎链球菌建立小鼠肺炎链球菌肺炎模型，将Balb／c小鼠24只随机分为3组，分别为对照组，肺炎组和肺炎rIL-18干预组（n=8），RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中IFN-γ、IL-4 mRNA的表达，同时支气管肺泡灌洗液（BALB）进行活菌计数，有核细胞分类计数。结果①肺炎rIL-18干预组BALF中性粒细胞和巨噬细胞计数显著高于肺炎组和对照组（P〈0．001）；②肺炎rIL-18干预组BALF活菌计数显著低于肺炎组（P〈0．001）；③肺炎rIL-18干预组肺组织IFN-γmRNA表达上调而IL-4mRNA表达下调（P〈0．001）。结论 在小鼠肺炎链球菌肺炎早期给予rIL-18可诱导IFN-γ的合成，促进Th1免疫应答，使Th1／Th2免疫平衡向Th1免疫偏移、促进宿主对肺炎链球菌的防御。
目的研究肺癌组织的人类白细胞抗原Ⅰ类分子HLA-A，B，C，G的表达情况以及临床病理因素关系。方法抗HLA。A，B，C单克隆抗体（mAb）W6／32，抗HLA-G（mAb）GG11，以免疫组化S-P法检测49例肺癌中的HLA-A，B，C，G抗原表达情况，同时收集肺癌患者临床特征。结果小细胞肺癌、鳞癌和腺癌的HLA-A，B，C抗原表达有不同程度的下降或缺失，小细胞肺癌HLA-A，B，C抗原下降和缺失率最高（P〈0．05）；而不同病理分期、分级的肺癌HLA-A，B，C抗原表达并无差异（P〉0．05）。HLA-G在49例原发肺癌癌细胞中均无阳性表达，但4例肿瘤组织旁的部分免疫细胞上有阳性表达。结论肺癌HLA-A，B，C抗原表达下降与肺癌组织类型相关，而与临床病理因素无关；HLA-G在肺癌细胞无表达，而部分免疫细胞表达HLA-G。肺癌可通过HLA-I类分子诱导免疫耐受逃避宿主的免疫监控
目的通过对支气管哮喘患者和正常对照组的血清IL-10，IL-5和ECP水平的测定以及相互关系的研究，探讨它们在支气管发病中的作用。方法应用Pharmacia UniCAP系统和ELISA方法分别测定支气管哮喘患者和正常对照组的血清ECP和IL-10、IL-5水平。结果正常对照组和发作期的支气管哮喘患者的ECP水平分别为（3．97±2．13）μg／L和（21．76±12．08）μg／L。正常对照组，支气管哮喘ECP升高组和支气管哮喘ECP正常组的血清IL-5水平分别为（10．90±4．41）pg／mL，（20．62±15．74）pg／mL和（9．24±7．16）pg／mL。正常对照组和支气管哮喘ECP升高组之间IL-5水平有显著差异（P〈0．01），正常对照组和支气管哮喘ECP正常组之间IL-5水平无差异（P〉0．05），支气管哮喘ECP正常组和ECP升高组之间IL-5水平有显著差异（P〈0．01），ECP与IL-5明显相关，两者之间的相关系数r=0．465（P〈0．01）。正常对照组，支气管哮喘ECP升高组和支气管哮喘ECP正常组的血清IL-10水平分别为（38．28±15．17）Pg／mL，（22．76±15．25）pg／mL和（42．32±14．61）pg／mL，支气管哮喘ECP正常组和ECP升高组之间IL-10水平有显著差异（P〈0．01）。结论支气管哮喘的发生与嗜酸粒细胞有密切的关系，ECP和IL-5可反映嗜酸粒细胞的活化程度，在支气管哮喘发作时嗜酸粒细胞处于激活状态，易于释放蛋白颗粒；IL-5对嗜酸粒细胞有调控作用。支气管哮喘组的血清IL-10水平较正常对照组低，提示支气管哮喘患者IL-10分泌减少，不能有效抑制炎症或促炎症细胞因子的合成及释放，亦即不能有效抑制炎症反应，可能是导致或加重气道炎症的原因之一。
目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体（mIL-4RA）蛋白。方法PCR方法扩增小鼠IL-4 C118截断型基因，定向克隆人转移质粒pFastBacHTB中，转化感受态DH10Bac细胞，在DH10Bac细胞内重组pFastBacHTB与杆粒发生转座。筛选阳性克隆，提取重组杆粒，转染圆昆虫细胞株，获取完整重组杆状病毒。反复感染sf9细胞，扩增病毒同时表达目的蛋白；用ELISA方法进行蛋白鉴定并初步定量。结果经核苷酸序列测定及PCR方法，鉴定成功获得含mIIMRA基因的重组杆粒；通过杆粒转染后圆细胞所表现出来的细胞病变，推断成功转染并获得重组杆状病毒；最后ELISA方法初步定量sf9细胞培养上清中mIL-4RA蛋白表达量为（1．15±0.12）ng／mL。结论本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达mIL-4RA蛋白，为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础，同时亦为其他蛋白质的真核表达提供了方法学的参考。
目的制备兔抗人PIWIIA的多克隆抗体，并鉴定其特异性，应用组织芯片初步探讨其在人类正常及肿瘤组织中的分布。方法合成特异性PIWIIA多肽，以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白（KLH）作为载体构建多肽免疫原，通过致敏大白兔，制备兔抗人PIWIIA多克隆抗体，然后用亲和层析法纯化抗体。用ELISA和western方法进行抗体验证，并应用人组织芯片进行PIWIIA的免疫组化研究。结果通过构建PIWIIA多肽-KLH载体复合物致敏大白兔，我们制备了兔抗人PIWIIA蛋白多克隆抗体，经ELISA及Westernblot证实兔抗人PIWIIA抗体可特异性识别PIWIIA多肽，在人组织芯片中通过免疫组化染色显示该抗体在BU部分正常组织和肿瘤组织中呈阳性染色。结论本项研究成功制备兔抗人PIWIIA多克隆抗体，为进一步研究PIWIIA在人类疾病中的意义提供了有利工具。
目的构建携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒，使CD4^＋T淋巴细胞C8166内源性的高表达Vpr蛋白。方法利用Ad Easy-1系统，通过将含有目的基因片段的穿梭载体pAdTrack．CMV-vpr和骨架质粒pAdEasy．1在BJ5183细菌内同源重组的方法构建重组腺病毒质粒Ad-vpr，用脂质体法将重组质粒转染至HEK293A细胞包装，获得重组腺病毒Ad-vpr，荧光显微镜观察Ad-vpr感染C8166细胞GFP的表达，Western blotting鉴定VDr在C8166细胞内的特异性表达，流式细胞术检测Ad-vpr感染C8166细胞的效率。结果成功构建携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒，Westernblotting结果表明重组腺病毒Ad-vpr感染的C8166细胞内源性的高表达Vpr蛋白，流式细胞术检测结果表明Ad-vpr感染C8166细胞效率高（44．07±3．62）％。结论成功构建出携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒，使C8166细胞内源性的高表达Vpr蛋白。
目的 制备抗人丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基（pyruvate dehydrogenase complex E2，PDC-E2）的单克隆抗体（mAb）并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体，用线粒体总蛋白免疫Balb／c小鼠，采用杂交瘤技术制备mAb，并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定，通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原。结果 获得1株可稳定分泌抗人PDC-E2 mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类（型）为IgG1（K）。该mAb可用于ELISA检测、Westem blot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论 成功制备了抗人PDC-E2的mAb，为PDC-E2的研究提供了有力的工具。
目的研究毛细管电泳在生熟鲩鱼食品过敏原粗浸液分析中的应用。方法未涂层熔硅毛细管65cm（有效长度50cm）×75μm；选择醋酸溶液（pH2．5）和硼酸缓冲液（pH9．5）作为毛细管区带电泳（CZE）的运行缓冲液，另外选择Tris-H3PO4／SDS缓冲液（pH8．7）作为毛细管束胶电动色谱（MECC）的运行缓冲液，分别对鲩鱼在生熟状态下的总蛋白提取物进行毛细管电泳，并与其十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳进行比较。结果三种不同缓冲液的电泳方法均能用于生熟鲩鱼总蛋白的分析，而且Tris-H3PO4／SDS缓冲液（pH8．7）的效果最好、检测峰最多（生鲩鱼14个，熟鲩鱼13个），接近SDS-PAGE蛋白区带总数（生鲩鱼17条，熟鲩鱼15条）。结论毛细管电泳可以用于生熟鱼类食品过敏原粗浸液的分析。
目的制得乙肝免疫传感器，用于临床检验。方法以金电极为基底，自组装半胱胺，通过纳米金静电竞争吸附硫堇分子和乙肝过氧化酶酶标抗体，制得乙肝免疫传感器。采用循环伏安法和线形扫描伏安法考察了传感器的组装过程，响应电流的性质，传感器对乙肝病毒的响应特性。结果对乙肝抗原进行了定量分析，线形范围为1：30～1：200（稀释浓度V）；线性相关系数R为0．994。取临床血清进行检测，将结果与临床常用的ELISA法比较，符合要求。结论用半胱胺／纳米金方法固定乙肝抗体制得免疫传感器能应用于临床检验。
目的研究反复柯萨奇病毒B3m（CVB3m）感染对小鼠的影响，建立可行的病毒性心肌病动物模型。方法115只3～4周龄雄性Balb／c小鼠随机分为增量感染组，等量感染组，单次感染组和正常对照组，于首次感染病毒后第104天处死小鼠，应用阻抗微分法测定心输出量，病理及组织化学技术分析心肌病理损伤和胶原系统改变，计算胶原容积分数。ELISA法测定血清sIL-2R含量。结果增量感染组小鼠死亡率持续增高，心脏重量增加，心功能下降，心肌胶原容积分数和血清sIL-2R含量高于其它各组（P〈0．05），病理学特征为基质胶原明显增生重建。结论反复增量病毒感染诱发小鼠心脏重构和免疫系统功能异常可做为病毒性心肌病模型进一步研究。
目的 探索核苷类似物（阿德福韦酯）与胸腺五肽联合治疗慢性乙型肝炎抗乙肝病毒的效果。方法选取慢性乙性病毒性肝炎27例，阿德福韦酯联合胸腺五肽组15例，单用阿德福韦酯组12例，用药前、用药1月、3月后复查HBVDNA。结果用药前2组HBVDNA水平比较无显著性差异（2．2E＋7±5．3E＋7copies／mlvs2．0E＋7±4．5E＋7copies／ml，P〉0．05），用药1月后2组HBVDNA水平皆有明显下降，2组HBVDNA水平比较无显著性差异（3．3E＋4±6．9E＋4copies／mlvs2．1E＋4±2．8E＋4copies／ml，P〉0．05），用药3月后2组HBVDNA水平有显著性差异，阿德福韦酯＋胸腺五肽组HBVDNA水平低于单用阿德福韦酯组（8．0E＋2±2．1E＋3copies／mlvs2，9E＋3±2，9E＋3copies／ml，P〈0．05），用药1月后阿德福韦酯＋胸腺五肽组HBV．DNA转阴率加％，单用阿德福韦酯组HBV-DNA转阴率为0，用药3月后阿德福韦酯＋胸腺五肽组HBV-DNA转阴率明显高于单用阿德福韦酯组（87％vs33％，P〈0．05）。结论阿德福韦酯是一较好的抗HBV药物，无论单用或与胸腺五肽合用在用药1～3月后皆使HBVDNA水平明显下降，但在与胸腺五肽联用后使HBVDNA水平下降更加显著，特别是提高了HBVDNA转阴率，显示核苷类似物阿德福韦酯与胸腺五肽联用能增强抗乙肝病毒的效力，有助于病毒的清除。
目的研究CIP29在细胞中的定位及其对巨噬细胞凋亡和布鲁氏菌侵袭的影响。方法通过RT-PCR方法从细胞中获取CIP29基因片段，并将其亚克隆入质粒载体pEq28a和eGFP，构建原核表达质粒pET28a-CIP29和真核表达质粒eGFP-CIP29，原核表达质粒用于制备CIP29抗体，用于后续CIP29蛋白的检测；真核表达质粒用于转染巨噬细胞，通过荧光显微镜、Westernblot技术检测CIP29在真核细胞中的表达及定位，Annexin—V／PI双染检测其对细胞凋亡的影响，布鲁氏菌侵袭试验检测其对布鲁氏菌入侵巨噬细胞的影响。结果获得了CIP29基因，构建的表达质粒pEq28a-CIP29和eGFP-CIP29经测序和双酶切鉴定，证实重组表达质粒构建成功。将pEq28a-CIP29转化B121中，CIP29蛋白得到了表达，制备了特异性抗体，经ELISA检测效价达1：25600。进一步构建真核表达质粒eGFP-CIP29，转染细胞后，荧光显微镜观察结果显示其定位于核内，但也有部分扩散之胞质中，CIP29可诱导细胞的凋亡，但对布鲁氏菌侵袭的影响无统计学意义。结论本研究获得CIP29重组蛋白，并制备了其多克隆抗体，CIP29瞬时高表达诱导巨噬细胞凋亡。
自身免疫性疾病系由于机体免疫系统失衡，产生针对自身组织的免疫应答并导致自身组织、器官损害的一类疾病。调节性T淋巴细胞（Regulatory T cell，Treg）具有免疫应答低下和免疫抑制特性，在维持机体免疫耐受和免疫应答稳态方面具有非常重要的作用，Treg的异常与多种自身免疫性疾病有关。Foxp3特异性表达于CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞，与其发育、成熟以及抑制功能关系密切。本文拟就Foxp3基因的研究进展及与多种自身免疫性疾病的关系作一综述。
胎盘（placenta）又名“紫河车”，其含有多种微量元素和活性因子。以往国内外对胎盘及其提取物的研究利用主要集中在美容和保健品方面。文献证实胎盘提取物具有免疫调节作用和临床治疗效果。开发功能活性因子作为药物用于临床治疗具有很广阔空间。本实验室运用胎盘超滤提取工艺提取相对分子质量为Mr3000 GPIF并对其活性进行了系统研究。本文通过5-溴-2’脱氧尿苷掺入酶联免疫吸附实验-BrdU-ELISA检测GPIFT细胞增殖活性，并对注射不同剂量GPIF的Balb／c小鼠血清中溶菌酶含量和胸腺（脾）指数的变化情况进行了研究，为羊胎盘提取物活性成分研究及其深入开发做出了积极探索；同时，对于开发我国丰富的畜牧资源，形成农、牧业与高新技术产业链的衔接具有重要意义。
乌索酸（（Ursolic acid又名熊果酸、乌苏酸）是从忍冬科接骨木属植物陆英（Sambucus ChinensisLindl）中提取得到的单一化合物。研究表明，乌索酸对BCG＋LPS免疫性肝损伤有明显的保护作用，本实验为进一步研究乌索酸的保肝作用机理，建立不同的小鼠免疫模型，从多角度研究乌索酸对小鼠免疫功能的影响。
浙江伊利康生物技术有限公司是一家集研究、开发、生产、服务为一体的省级高新技术企业。公司创建于一九九二年。座落于（国家级）温州经济技术开发区高科技园区内．拥有6000m^2的生产基地、1500m^2的上海研发中心和一个动物实验基地。公司先后获得浙江省高新技术企业、省著名商标、省百家诚信企业、省百强科技民营企业、省青年文明号、省高新技术研究开发中心、省农行资信AAA企业、省工商企业信用AA级“守合同重信用”单位、温州市中小成长型企业、市人事系统先进单位、市创建信用企业先进单位、市诚信企业促进会理事单位、温州市品牌协会理事单位、龙湾区百强企业、区文明单位等荣誉。是目前国内同行业最具规模、最具品牌、最具发展潜力的生物体外诊断试剂企业之一。公司下设销售部、生产部、技术部、财务部、企划部：省级企业技术研发中心和伊利康生物技术研究所等。
[论著](陈亚静 苏学今 王丽颖 于永利)
(林媛 祁志荣 孙岚 李明远 蒋忠华 张林 李虹)
(向延芳 何畏 袁吉钊 梁志清 史常旭)
(王思雄 李亚斐 熊鸿燕 曹佳)
(马玲娣 文世宏 张彦 何於娟 刘小珊 康格非 蒋纪恺)
(刘超 孙宗全 陈家军 苏刚 史嘉玮 刘金平 邓勇志)
(李文珠 李迎 罗芳洪 胡庆中 陶惠然 王生育 陈彩霞 庄国洪)
(田莹 邓宇斌 王亚柱 王晔 朱文标)
(泰淑红 李虹 贾静 吕梅励 张林)
(于哲 邢飞跃 王通)
(王宪沛 邹安若 廖玉华 李璐 袁璟 涂丹娜)
(杨玉荣 佘锐萍 梁宏德)
(孙进 乐国伟 侯丽霞 王乃富 施用晖)
(傅颖媛 丁务高 陈开森 况南珍 曾小平 周智兴 许静)
(田拥军 张振华 李磊 刘慎沛 徐飏 陆蒙吉 杨东亮)
(焦永军 周镇先 曾晓燕 赵红 薛蓉 管晓虹 冯振卿 朱凤才 史智扬)
(何畏 李彦锋 向延芳)
(熊盛道 徐国鹏 熊维宁 舒俊华 倪望 陈仕新)
(程桂荣 易胜中 吴雄文)
(邵莉 郭胤仕 朱丽君 许以平)
(田代印 符州 王晓芳 王莉佳)
(王迎昕 郜恒骏 陈锡美 孟逊)
(贺芳 曾耀英 王通 吴晓萍 季煜华 林长乐)
(刘莉 鞠艳芳 杨金菊 柳晓兰 高媛 王婉 刘蓉 曲海霞 陈志成 刘莹 高建恩 孙启鸿)
(徐飞龙 吴海强 刘志刚 戈早川)
(覃柳 刘仲明 邹小勇)
(聂宏刚 徐晶 栾影 潘文静 张瑶 邹亚男 关振中)
(李玲 王宇明)
(吴小艳 赵忠鹏 张良艳 王希良)
[综述](马铮（综述 ） 王如文（审校）)
[短篇报道](高利臣 钟英英 魏泓)
(熊筱娟 易增兴 徐丽英)
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